【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物抗病，具体涉及利用nmral2_bovine基因作为靶点在防治牛结核病中的应用。
技术介绍
1、结核病是一种重要的人兽共患病，由结核分枝杆菌复合群感染引起，主要包括结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,m.tb)及其牛变种牛分枝杆菌(mycobacteriumbovis,m.bovis)。世界动物卫生组织(woah)将动物结核病列入需要上报的疾病名录，我国将牛结核病列为二类动物疫病以及八种重点防治的人兽共患病之一。由于牛结核是人结核的重要传染源，因此，在食品安全和公共卫生中具有重要意义，世界各国均官方规定采用“检疫-扑杀”策略控制牛结核。发展中国家是人结核病和牛结核病的高负担国家，“检疫-扑杀”控制牛结核病给各国政府和从业者带来了沉重的经济负担；同时，巨大的人结核病负担和细菌耐药率不断增加迫切需要更为有效的防控手段。因此，本领域迫切需要开发一种有效防控人兽共患结核病的新方法。
2、一氧化氮(nitric oxide，no)作为一个重要的分子，在结核病的调控中发挥了重要的作用。适度的no产生可以杀灭病原微生物，而过量的no产生则会导致过度的炎症反应，产生细胞损伤，最终导致细胞死亡。尽管nitrogen metabolite repressor(nmra)和大多数nmra-like蛋白质都是在细菌或真菌中鉴定出来的，但也存在一种广泛分布于高等动物中的nmra-like蛋白质，即nmral1，也被称为hscarg。在细胞质中，nmral1通过抑制nf-κb和rlr途径的活性，
技术实现思路
1、本专利技术一方面保护nmral2_bovine基因抑制剂的用途--用于制备预防或治疗牛结核病的药物。进一步地，所述nmral2_bovine基因抑制剂包括靶向敲低nmral2_bovine基因表达的sirna，或靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子或其表达载体。优选地，所述sirna的靶向序列为5’-uggcuucugcuaagcuaccucugag-3’。优选地，所述靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子的序列为5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。
2、本专利技术一方面保护用于制备预防或治疗牛结核病的药物，包括靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子或其表达载体，优选地，所述核酸分子的序列为5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。还包括靶向敲低nmral2_bovine基因的核酸分子，即与nmral2_bovine基因杂交的双链rna，所述双链rna第一链的序列与nmral2_bovine基因中的靶序列相同，所述的靶序列为5’-uggcuucugcuaagcuaccucugag-3’。
3、本专利技术另一方面保护抗牛结核病的细胞模型，所述细胞模型中的内源性nm ral2_bovine基因被敲除或者敲低，从而使内源性nmral2_bovine基因的表达缺失或表达量降低。成功构建的nmral2_bovine基因敲除细胞株，命名为胎牛肺细胞ebl/nmra-ko#9(简称nmral2-ko)，该细胞株已于2023年11月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号cctcc no：c2023350。
4、本专利技术另一方面保护一种抗牛结核病的基因编辑牛的制备方法，将牛源细胞中的nmral2_bovine基因敲除或敲低，从而使内源性nmral2_bovine基因的表达缺失或表达量降低，进一步制备nmral2_bovine基因敲除或敲低的基因编辑牛。
5、本专利技术还保护一种筛选预防和/或治疗牛结核病的候选化合物的方法，设置测试组和对照组，所述测试组是在细胞中添加测试化合物，所述对照组是在细胞中不添加测试化合物，比较测试组和对照组细胞中nmral2_bovine基因的表达量，筛选显著降低nmral2_bovine基因表达量的测试化合物。
6、本专利技术的技术方案具有如下主要的有益效果：
7、1.本专利技术首次提供了一种nmral2_bovine抑制剂的新应用，用于抑制结核分枝杆菌复合群在宿主细胞内的存活，从而抵抗结核分枝杆菌复合群感染引起的牛结核病。
8、2.本专利技术提供了一种对结核分枝杆菌复合群感染有抗性的基因工程化细胞及其制备方法，所述细胞株可以在不影响细胞正常功能的情况下，抵抗结核分枝杆菌复合群的感染，可以作为离体实验模型，减少化学添加剂对细胞实验的影响。
9、3.本专利技术提供了一种抗牛结核病的基因编辑牛的制备方法，利用此方法制备抗牛结核病的牛模型，用于抗结核病药物或制剂研究。
10、4.本专利技术提供一种筛选预防和/或治疗结核病的候选化合物方法，以nmral2_bovine基因作为靶点，筛选显著降低nmral2_bovine基因表达量的测试化合物。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.NmrAL2_Bovine基因抑制剂的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗牛结核病的药物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NmrAL2_Bovine基因抑制剂包括靶向敲低NmrAL2_Bovine基因表达的siRNA，或靶向敲除NmrAL2_Bovine基因的核酸分子或其表达载体。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述敲低siRNA的靶向序列为5’-UGGCUUCUGCUAAGCUACCUCUGAG-3’。
4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述靶向敲除NmrAL2_Bovine基因的核酸分子的序列为5’-GGTATCTCGGTTGCTGATAT-3’。
5.用于制备预防或治疗牛结核病的药物，其特征在于，包括靶向敲除或敲低NmrAL2_Bovine基因的核酸分子或其表达载体。
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述靶向敲除NmrAL2_Bovine基因的核酸分子的序列为5’-GGTATCTCGGTTGCTGATAT-3’。
7.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述
8.抗牛结核病的细胞，其特征在于，所述细胞中内源性NmrAL2_Bovine基因被敲除或者敲低，从而使内源性NmrAL2_Bovine基因的表达缺失或表达量降低。
9.根据权利要求8所述的细胞，其特征在于，所述细胞的保藏编号为CCTCC NO：C2023350。
10.一种抗牛结核病的基因编辑牛的制备方法，其特征在于，包括步骤：将牛源细胞中的NmrAL2基因敲除或敲低，从而使内源性NmrAL2基因的表达缺失或表达量降低，进一步制备NmrAL2基因敲除或敲低的基因编辑牛。
11.一种筛选预防和/或治疗牛结核病的候选化合物的方法，其特征在于，包括：设置测试组和对照组，所述测试组是在牛源细胞中添加测试化合物，所述对照组是在牛源细胞中不添加测试化合物，比较测试组和对照组细胞中NmrAL2_Bovine基因的表达量，筛选显著降低NmrAL2_Bovine基因表达量的测试化合物。
...【技术特征摘要】
1.nmral2_bovine基因抑制剂的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗牛结核病的药物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述nmral2_bovine基因抑制剂包括靶向敲低nmral2_bovine基因表达的sirna，或靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子或其表达载体。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述敲低sirna的靶向序列为5’-uggcuucugcuaagcuaccucugag-3’。
4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子的序列为5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。
5.用于制备预防或治疗牛结核病的药物，其特征在于，包括靶向敲除或敲低nmral2_bovine基因的核酸分子或其表达载体。
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子的序列为5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。
7.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述靶向敲低nmral2_bovine基因的核酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭爱珍，彭永崇，陈颖钰，谢胜松，周诗颖，孙钦，周信君，胡长敏，张磊，陈曦，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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