【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物支架，具体为一种负载当归多糖的生物支架及在修复全层软骨缺损中的应用。
技术介绍
1、进入21世纪，中国已从体育大国迈向体育强国，体育运动日益普及，与此同时，运动损伤导致的全层软骨缺损愈发常见。全层软骨缺损通常难以采用保守治疗，因其往往会形成“瘢痕愈合”。当前，主要依靠手术治疗，依据缺损面积大小有不同选择：骨髓刺激技术(清创+微骨折)，其原理是利用骨髓中的间充质干细胞分化为软骨细胞来修复创面，但仅适用于缺损面积小于1cm2的情况，且无法确定修复软骨的类型。
2、在全层软骨缺损修复领域，当归多糖有着重要应用。当归多糖能够促进软骨细胞增殖，增加软骨细胞数量，利于缺损部位的填充，还可推动干细胞向软骨细胞分化，在修复进程中，诱导干细胞转变为软骨细胞，参与软骨缺损修复。此外，当归多糖具有激活补体活性、清除自由基、提升免疫力的功效，对造血系统也有显著作用。
3、聚(乳酸-乙醇酸)纳米粒载体具备独特的靶向性，能提高药物稳定性并减少毒副作用。载药纳米微粒作为近年来新型的药物投递载体，借助安全无毒、可生物降解的高分子材料作为包封载体，把药物输送至靶器官，不但可增强药物选择性与疗效、降低毒副作用，还能够穿越组织细胞间隙，实现药物的控制释放，延长作用时间。并且，在保证药物作用的同时，可减少给药剂量，减缓药物降解，提高药物稳定性，进一步降低或避免药物的毒副作用。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题：
2、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种负载当
3、(二)技术方案：
4、(1)向反应容器中加入水，再加入乳酸和乙醇酸，搅拌，混合，在150-160℃下，在常压下脱水2-3h，再减压到12-14kpa反应2-3h，在1-1.5kpa反应4-5h，生成乳酸-乙醇酸预聚物。
5、(2)将质量比为100:(0.3-0.5)的乳酸-乙醇酸预聚物，催化剂加入反应容器中，加压装置的真空度至100-120pa，反应16-24h后，加入三氯甲烷，过滤、萃取、干燥，得到聚(乳酸-乙醇酸)。
6、(3)将当归粉粹，用乙醇水溶液洗涤，在70-80℃进行热处理，抽滤，真空干燥得当归粉，再将当归粉用热水浸提，在离心机离心20-30min，合并上清液，调节ph至4.5-5，再用离心机离心20-30min，浓缩上清液，加入乙醇水溶液静置，过滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥，得到当归多糖提取物。
7、(4)将当归多糖提取物溶于水中配置成2-3mg/ml的多糖溶液，将聚(乳酸-乙醇酸)溶于二氯甲烷中配置成25-30mg/ml的聚(乳酸-乙醇酸)溶液，将多糖溶液与聚(乳酸-乙醇酸)溶液进行混合，超声间断乳化60-70s，滴加到1-1.5％聚乙烯醇溶液中，继续超声乳化30-40s，搅拌3-5h，在10000-12000r/min的离心机离心10-20min，取出沉淀，洗涤，冷冻干燥，得到聚(乳酸-乙醇酸)包覆当归多糖纳米微球。
8、(5)将聚(乳酸-乙醇酸)包覆当归多糖纳米微球用蒸馏水分散成混悬液后，在150-200r/min磁力搅拌2-4小时，再加入pcl/pda支架，进行冷冻干燥，得到负载当归多糖的生物支架。
9、优选的，所述步骤(2)中，催化剂是摩尔比为1:(0.9-1.2)的甲苯磺酸和氯化亚锡混合而成的混合物。
10、优选的，所述步骤(4)中，多糖溶液与聚(乳酸-乙醇酸)溶液混合的体积比为1:(7.5-8.5)。
11、优选的，所述pcl/pda支架制备方法为:将聚己内酯支架加入到盐酸tris缓冲液，再加入多巴胺盐酸盐，避光搅拌18-24小时后取出支架，用去离子水清洗3-5次后冷冻干燥，得到pcl/pda支架。
12、优选的，所述盐酸tris缓冲液、多巴胺盐酸盐的比例为1l:(1.5-4)g。
13、优选的，所述盐酸tris缓冲液的ph为8.5。
14、优选的，本专利技术能够将生物材料精确加工成匹配解剖结构外形、内部孔隙大小及形状可控的组织工程支架。
15、(三)有益的技术效果：本专利技术通过3d打印技术构造多孔的聚己内酯支架，并采用聚多巴胺对其进行化学改性，增加了支架的亲水性；同时制备聚(乳酸-乙醇酸)纳米微球，用来包裹当归多糖，并与pcl/pda支架结合，形成当归多糖的生物支架用于修复全层软骨缺损。
16、本专利技术由表1-表2所示，实施例的载药率，包封率以及一个月内的药物释放量高于对比例。因为当归多糖能够促进软骨细胞增殖，推动软骨缺损修复的作用，而聚(乳酸-乙醇酸)纳米粒易被细胞吞噬，靶向性强，有助于维持当归多糖的稳定性，二者结合生成聚(乳酸-乙醇酸)包覆当归多糖纳米微球，能增大药物释放量，载药率和包封率；pda是一种具有强黏附性的物质，它能用于对包括超疏水表面在内的各种材料表面进行改性，pda改性的pcl，能够使聚(乳酸-乙醇酸)包覆当归多糖纳米微球与pcl/pda支架黏附在一起，形成当归多糖的生物支架，增加了支架的亲水性，为软骨细胞等在支架上生长、发挥功能营造良好的微环境；当归多糖的生物支架通过借助3d打印技术，能将负载当归多糖的生物支架加工成与需要修复部位的解剖结构外形精确匹配的形态，使其更好地贴合缺损处，为软骨修复提供基础框架，为全层软骨缺损修复材料的发展和技术革新带来了希望。
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1.一种负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
2.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，乳酸和乙醇酸的摩尔比为1:(1-1.2)。
3.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，乳酸-乙醇酸预聚物和催化剂的质量比为100:(0.3-0.5)。
4.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，催化剂是摩尔比为1:(0.9-1.2)的甲苯磺酸和氯化亚锡混合而成的混合物。
5.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，多糖溶液与聚(乳酸-乙醇酸)溶液混合的体积比为1:(7.5-8.5)。
6.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述PCL/PDA支架制备方法为:将聚己内酯支架加入到盐酸tris缓冲液，再加入多巴胺盐酸盐，避光搅拌18-24小时后取出支架，用去离子水清洗3-5次后冷冻干燥，得到PCL/PD
7.根据权利要求2所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述盐酸tris缓冲液、多巴胺盐酸盐的比例为1L:(1.5-4)g。
8.根据权利要求7所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述盐酸tris缓冲液的pH为8.5。
9.根据权利要求1-8所述的当归多糖的生物支架修复全层软骨缺损中的应用，其特征在于，能够将生物材料精确加工成匹配解剖结构外形、内部孔隙大小及形状可控的组织工程支架。
...【技术特征摘要】
1.一种负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
2.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，乳酸和乙醇酸的摩尔比为1:(1-1.2)。
3.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，乳酸-乙醇酸预聚物和催化剂的质量比为100:(0.3-0.5)。
4.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，催化剂是摩尔比为1:(0.9-1.2)的甲苯磺酸和氯化亚锡混合而成的混合物。
5.根据权利要求1所述的负载当归多糖的生物支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，多糖溶液与聚(乳酸-乙醇酸)溶液混合的体积比为1:(7.5-8.5...
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