【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物与医药，特别涉及一种ulbp2特异性嵌合抗原受体、car-t细胞及其应用。
技术介绍
1、胃癌是威胁人类生命健康的重大疾病之一。手术切除治疗是最有效的治疗方式之一，然而大多数患者确诊时已处于中晚期，不适合再进行手术治疗。近年来，分子靶向疗法联合化学疗法已广泛应用于中晚期胃癌的治疗，但仍存在个体疗效差异较大、耐药性等问题。因此，目前很多研究集中在探究胃癌潜在的分子机制，为胃癌的早期诊断和临床治疗提供潜在的分子标志物。
2、ul16结合蛋白（ul16 binding protein-2, ulbp2）是在蛋白组学发展过程中被发现的一个免疫学因子。已有研究显示，ulbp2与多种肿瘤的发生、发展存在密切的关系，ulbp2在早期胃癌、进展期胃癌组织中的表达明显高于慢性胃炎，同时血清ulbp2在早期胃癌、进展期胃癌中的浓度亦明显升高，与临床上常用的血清学肿瘤标志物cea、ca199相比，血清ulbp2无论是对早期胃癌还是进展期胃癌均具有更好的诊断价值。因此，ulbp2是的一种潜在的胃癌诊断和治疗靶点。
3、使用表达嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)的自体t细胞进行肿瘤细胞免疫治疗是一种很有前途的策略，靶向cd19的car-t细胞治疗b细胞恶性肿瘤证明了这一点。car是一种合成的受体，由抗原结合结构域组成，该抗原结合结构域通常是来自单克隆抗体的单链可变片段(single-chain fragment variable，scfv)，通过铰链或间隔子连接到跨膜结构域
4、目前，ulbp2作为靶点在癌症治疗中的研究和应用仍然较少，尤其是结合嵌合抗原受体的应用以及其是否能够以及如何有效应用于更高效地治疗肿瘤和癌症仍待进一步开发。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种ulbp2特异性嵌合抗原受体，其包含ulbp2抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中所述ulbp2抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含分别如seq id no：1、seq idno：2和seq id no：3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含分别如seq id no：5、seq id no：6和seq id no：7所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
2、进一步地，所述ulbp2抗原结合结构域包含如seq id no：4所示的重链可变区和如seq id no：8所示的轻链可变区。
3、进一步地，所述ulbp2抗原结合结构域包含如seq id no：9所示的氨基酸序列。
4、进一步地，所述跨膜结构域具有如seq id no：10所示的氨基酸序列。
5、进一步地，所述胞内信号传导结构域包含4-1bb共刺激信号分子和人cd3ζ信号传导结构域。
6、进一步地，所述4-1bb共刺激信号分子具有如seq id no：11所示的氨基酸序列。
7、进一步地，所述人cd3ζ信号传导结构域具有如seq id no：12所示的氨基酸序列。
8、进一步地，所述嵌合抗原受体还包含连接所述ulbp2抗原结合结构域和跨膜结构域的铰链区。
9、进一步地，所述铰链区具有如seq id no：13所示的氨基酸序列，
10、进一步地，所述嵌合抗原受体在其n端还包含信号肽。
11、进一步地，所述信号肽具有如seq id no：14所示的氨基酸序列。
12、进一步地，所述嵌合抗原受体具有如seq id no：15所示的氨基酸序列。
13、本专利技术还提供了一种分离的核酸分子，其编码如本文所述的ulbp2特异性嵌合抗原受体；
14、进一步地，所述核酸分子包含如seq id no：16所示的核苷酸序列。
15、本专利技术还提供了一种表达载体，其包含如本文所述的核酸分子。
16、进一步地，所述载体包括质粒载体或病毒载体。
17、进一步地，所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺病毒载体中的一种或多种的组合。
18、本专利技术还提供了一种重组慢病毒，其由表达如本文所述的嵌合抗原受体的病毒载体与包装辅助质粒共转染到哺乳动物细胞得到。
19、进一步地，所述包装辅助质粒为pspax2和pmd2.g。
20、进一步地，所述哺乳动物细胞为293t细胞、lenti-x 293t、293t(gp2)。
21、本专利技术还提供了一种宿主细胞，其表达如本文所述的ulbp2特异性嵌合抗原受体，或包含如本文所述的表达载体。
22、进一步地，所述宿主细胞包括免疫细胞。
23、进一步地，所述免疫细胞包括t细胞、b细胞、nk细胞、单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞或其任意组合。
24、本专利技术还提供了如本文所述的嵌合抗原受体、核酸分子、表达载体或宿主细胞在制备用于预防和/或治疗癌症的药物中的用途。
25、进一步地，所述癌症是过表达ulbp2的癌症。
26、进一步地，所述癌症是胃癌。
27、本专利技术人还令人惊讶地发现，通过靶向ulbp2，还可以显著改善pd-1抑制剂在胃癌治疗中的作用。
28、如本文所用，ulbp2抑制剂可以是抑制ulbp2的任何试剂。优选地，ulbp2抑制剂是如上文所述的抗ulbp2抗体、ulbp2特异性嵌合抗原受体（car）或表达ulbp2特异性嵌合抗原受体或包含表达ulbp2特异性嵌合抗原受体的表达载体的细胞。如本文所用，pd-1抑制剂可以是抑制pd-1的任何试剂。优选地，pd-1抑制剂是抗pd-1抗体。
29、因此，本专利技术还提供了ulbp2特异性嵌合抗原受体、表达ulbp2特异性嵌合抗原受体的核酸分子、包含所述核酸分子的表达载体或表达ulbp2特异性嵌合抗原受体或包含表达ulbp2特异性嵌合抗原受体的表达载体的宿主细胞联合pd-1抑制剂在制备用于预防和/或治疗癌症的药物中的用途。
30、进一步地，所述癌症是过表达ulbp2的癌症。
31、进一步地，所述癌症是胃癌；
32、进一步地，所述ulbp2特异性嵌合抗原受体是如本文所定义的。
33、定义...
【技术保护点】
1.一种ULBP2特异性嵌合抗原受体，其特征在于，其包含ULBP2抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，
2.根据权利要求1所述的ULBP2特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域具有如SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列；
3.根据权利要求1所述的ULBP2特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体具有如SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列。
4.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码根据权利要求1-3中任一项所述的ULBP2特异性嵌合抗原受体；
5.一种表达载体，其特征在于，其包含根据权利要求4所述的核酸分子；
6.一种重组慢病毒，其特征在于，其由表达根据权利要求1-3中任一项所述的ULBP2特异性嵌合抗原受体的病毒载体与包装辅助质粒共转染到哺乳动物细胞得到。
7.一种宿主细胞，其特征在于，其表达根据权利要求1-3中任一项所述的ULBP2特异性嵌合抗原受体，或包含根据权利要求5所述的表达载体。
8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括免疫细胞
9.根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合抗原受体、根据权利要求4所述的核酸分子、根据权利要求5所述的表达载体或根据权利要求7或8所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗癌症的药物中的用途，
10.ULBP2特异性嵌合抗原受体、表达ULBP2特异性嵌合抗原受体的核酸分子、包含所述核酸分子的表达载体或表达ULBP2特异性嵌合抗原受体或包含表达ULBP2特异性嵌合抗原受体的表达载体的宿主细胞联合PD-1抑制剂在制备用于预防和/或治疗癌症的药物中的用途，
...【技术特征摘要】
1.一种ulbp2特异性嵌合抗原受体，其特征在于，其包含ulbp2抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，
2.根据权利要求1所述的ulbp2特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域具有如seq id no：10所示的氨基酸序列；
3.根据权利要求1所述的ulbp2特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体具有如seq id no：15所示的氨基酸序列。
4.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码根据权利要求1-3中任一项所述的ulbp2特异性嵌合抗原受体；
5.一种表达载体，其特征在于，其包含根据权利要求4所述的核酸分子；
6.一种重组慢病毒，其特征在于，其由表达根据权利要求1-3中任一项所述的ulbp2特异性嵌合抗原受体的病毒载体与包装辅助质粒...
【专利技术属性】
技术研发人员：任雯，靳建荣，张文涛，秦龙，郭姝言，
申请(专利权)人：兰州大学第二医院，
类型：发明
国别省市：
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