【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学检测领域，具体涉及一种用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物及试剂盒。
技术介绍
1、人类的肺炎衣原体(c.pneumoniae)感染是世界普遍性的。肺炎衣原体传染途径是通过呼吸道分泌物的人-人传播。因此，在半封闭的环境如家庭、学校、军队以及其他人口集中的工作区域可存在小范围的流行。肺炎衣原体的感染还可能与哮喘、冠心病及动脉粥样硬化的发病、慢性阻塞性肺疾病的急性发作和恶化有关。目前，肺炎衣原体已是继肺炎双球菌和流感嗜血杆菌之后引起社区获得性肺炎的主要病原体，与嗜肺军团菌和肺炎支原体一起成为社区获得性肺炎的三种非典型病原体，占社区获得性肺炎的10％～20％。
2、肺炎支原体(m.pneumonia)是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，常伴有头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。
3、腺病毒(adenovirus，adv)是一群分布十分广泛的具有双螺旋dna基因组的病毒，adv引起的急性传染病，易侵犯呼吸道及消化道黏膜、眼结膜、泌尿道和淋巴结，主要表现为急性上呼吸道感染(急性呼吸道感染由腺病毒引起者占2％～4％)，其次为眼部和胃肠道感染。人群普遍易感，多见于儿童，约半数患者为隐性感染。婴幼儿易患腺病毒肺炎，约占儿童期肺炎的10％，病情重，病死率高，在青年患者中腺病毒肺炎的病死率为
4、目前，已有多家公司获得呼吸道病毒相关检测产品的cfda注册证，涉及多种检测方法，其中使用较为广泛的方法为胶体金法、酶联免疫法、pcr荧光探针法，此外，双扩增法、等温扩增法、化学发光法、磁微粒化学发光法、乳胶法、免疫层析法等方法也有厂家采样。但可同时检测肺炎支原体、肺炎衣原体及呼吸道腺病毒的产品较少，而且灵敏度不高，可能出现假阴性的问题。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术中的不足，在于提供一种检测灵敏度高的用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物及试剂盒。
2、本专利技术的具体技术方案如下：
3、一种用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物，包括引物对和与其对应的探针，所述引物对包括针对肺炎衣原体的引物对1、其核苷酸序列如seq idno.01和seq id no.02所示；针对肺炎支原体的引物对2、其核苷酸序列如seq id no.03和seq id no.04所示；针对呼吸道腺病毒的引物对3、其核苷酸序列如seq id no.05和seq idno.06所示；
4、所述探针包括针对肺炎衣原体的特异性探针1、其核苷酸序列如seq id no.07所示；针对肺炎支原体的特异性探针2、其核苷酸序列如seq id no.08所示；针对呼吸道腺病毒的特异性探针3、其核苷酸序列如seq id no.09所示；seq id no.01：5′-gtggtagcaaatccccaa-3′
5、seq id no.02：5′-tgttttcctagccacctcg-3′
6、seq id no.03：5′-cgcacttcctttgcgtatc-3′
7、seq id no.04：5′-tctctacaacacgaccagc-3′
8、seq id no.05：5′-gtggacagctatgatcccg-3′
9、seq id no.06：5′-cccatgcagtgtctctagg-3′
10、seq id no.07：5′-catcctaatcctaaaatagaa-3′
11、seq id no.08：5′-cgtgaatggtttaccgatggtcc-3′
12、seq id no.09：5′-gttcgtattattgaaaatcatgg-3′。
13、进一步的，所述特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3均连接有荧光标记基团，特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3上的荧光标记基团在pcr过程中所产生的荧光信号不同。
14、进一步的，所述特异性探针1连接fam荧光标记基团，特异性探针2连接joe荧光标记基团，特异性探针3连接cy5荧光标记基团。
15、进一步的，所述特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3的浓度均为0.02～0.06μm。
16、进一步的，所述引物对1、引物对2、引物对3中每条引物的浓度为0.07～0.08μm。
17、进一步的，所述引物对还包括检测人类基因组β-globin的引物对、其核苷酸序列如seq id no.10和seq id no.11所示；所述探针还包括检测人类基因组β-globin的特异性探针、其核苷酸序列如seq id no.012所示；
18、seq id no.10：5′-gcttacatttgcttctgaca-3′
19、seq id no.11：5′-agtaacggcagacttctcc-3′
20、seq id no.12：5′-actagcaacctcaaacagacacc-3′。
21、进一步的，所述检测人类基因组β-globin引物对中每条引物的浓度为0.07～0.08μm，检测人类基因组β-globin特异性探针的浓度为0.02～0.06μm。
22、本专利技术还涉及一种用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的试剂盒，包括前面所述的用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物。
23、进一步的，所述试剂盒包括pcr反应体系、阳性对照品、阴性对照品和保存液，所述pcr反应体系包括缓冲液、热启动dna聚合酶及所述用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物。
24、进一步的，所述pcr反应体系为冻干品，所述冻干品的冻干步骤如下：
25、pcr反应体系和dna聚合酶经预冷、升华干燥冻干、解析干燥冻干制得pcr扩增试剂冻干品；
26、预冷阶段：预冷温度为-50～-40℃，预冷时间为150～200min；
27、升华干燥冻干阶段：真空度为0～0.1mbar的条件下，于-40～-30℃冻干100～150min，接着升温至-30～-20℃冻干220～260min，再次升温至-20～-10℃冻干150～200min；
28、解析干燥阶段：温度为4～10℃条件下保持30～40min，随后升温至10～20℃保持30～40min。
29、本专利技术从设计的6组特异性引物对和探针中，筛选出最优的引物对和探针组合，满足灵敏度高的要求，检测结果高度准确。由本专利技术所述特异性引物和探针组成的试剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物，其特征在于包括引物对和与其对应的探针，所述引物对包括针对肺炎衣原体的引物对1、其核苷酸序列如SEQ ID NO.01和SEQ ID NO.02所示；针对肺炎支原体的引物对2、其核苷酸序列如SEQ IDNO.03和SEQ ID NO.04所示；针对呼吸道腺病毒的引物对3、其核苷酸序列如SEQ ID NO.05和SEQ ID NO.06所示；
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3均连接有荧光标记基团，特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3上的荧光标记基团在PCR过程中所产生的荧光信号不同。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述特异性探针1连接FAM荧光标记基团，特异性探针2连接JOE荧光标记基团，特异性探针3连接CY5荧光标记基团。
4.根据权利要求1或2或3所述的组合物，其特征在于，所述特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3的浓度均为0.02～0.06μM。
5.根据权利要求1或2或3所述的组合物，其特征在
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述引物对还包括检测人类基因组β-globin的引物对、其核苷酸序列如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示；所述探针还包括检测人类基因组β-globin的特异性探针、其核苷酸序列如SEQ ID NO.012所示；
7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述检测人类基因组β-globin引物对中每条引物的浓度为0.07～0.08μM，检测人类基因组β-globin特异性探针的浓度为0.02～0.06μM。
8.一种用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至7任一项所述的用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR反应体系、阳性对照品、阴性对照品和保存液，所述PCR反应体系包括缓冲液、热启动DNA聚合酶及所述用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系为冻干品，所述冻干品的冻干步骤如下：
...【技术特征摘要】
1.一种用于肺炎衣原体、肺炎支原体及呼吸道腺病毒检测的组合物，其特征在于包括引物对和与其对应的探针，所述引物对包括针对肺炎衣原体的引物对1、其核苷酸序列如seq id no.01和seq id no.02所示；针对肺炎支原体的引物对2、其核苷酸序列如seq idno.03和seq id no.04所示；针对呼吸道腺病毒的引物对3、其核苷酸序列如seq id no.05和seq id no.06所示；
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3均连接有荧光标记基团，特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3上的荧光标记基团在pcr过程中所产生的荧光信号不同。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述特异性探针1连接fam荧光标记基团，特异性探针2连接joe荧光标记基团，特异性探针3连接cy5荧光标记基团。
4.根据权利要求1或2或3所述的组合物，其特征在于，所述特异性探针1、特异性探针2、特异性探针3的浓度均为0.02～0.06μm。
5.根据权利要求1或2或3所述的组合物，其特征在于，所述引物对1、引物对2、引物对3中每条引物的浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：李翔，朱威，
申请(专利权)人：基蛋生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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