新型抗微生物肽制造技术

本发明专利技术提供了能够有效抑制各种革兰氏阳性菌的生长和／或增殖的新型抗微生物肽。具体说，所述肽能有效对抗变异链球菌，变异链球菌是一种常见口腔病原体，可导致龋齿。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型抗微生物肽相关申请的交叉参考本申请要求2007年1月16日提交的USSN 60/880,783的优先权，其全部内容通过参考结合于此。国立资助的研究与开发下进行的专利技术权利的声明本专利技术部分地得到国立卫生研究院(National Institute of Health)的资助，授 权号为MD01831。政府在本专利技术中拥有一定的权益。专利
本专利技术涉及抗微生物化合物领域。具体说，本专利技术涉及能够有效对抗变 异链球菌0^"印tococc^ m"tora)及其他细菌的新型抗微生物肽的鉴别。专利技术背景近年来，由于抗微生物肽(AMPs)具有针对包括耐药菌在内的广谱菌属的 强效杀伤活性而成为抗生素替代品的最前沿。AMPs是在单细胞和多细胞生命 型中发现的一类具有内在免疫性的遗传共同分子(Tossi等，(2000) 55: 4-30; Diamond (2001) fi/o/og/W (London) 48: 209-212; Lehrer和Ganz (2002) C群.(9一. /麗腳/. 14: 96-102; Brogden等，(2003) M. J.愈/w/cr凌 」ge;^ 22: 465-478)。虽然它们在肽序列和翻译后修饰(线性，环状等)方面存 在显著不同，大多数AMPs能够通过破坏脂质膜而杀伤细菌，虽然该机制的细 节似乎存在很大差异(Shai (2002) 5/o; o(yme" 66: 236-248; Brogden (2005) Ato. T ev. M/croWo/. 3: 238-250)。过去的研究已经证明AMP功能中基本疏水和正 电荷特性的关键作用，包括在许多AMPs中发现的芳族Trp和正电荷Arg残基 的显著贡献(Chan等，(2007) S/o/ /zj^51(4): 1351-1359; Wei等，(2006) 乂 5"cfe〃》/. 188: 328-334)。虽然AMP较小(大多数AMP不到50个氨基酸)，但其二级结构似乎也对其活性发挥重要作用。某些线性AMP与类 似细菌膜的疏水环境(例如去污剂或脂质囊泡)相互作用时可能采取OC-螺旋或P-折叠构型，提示这种构型变化是抗微生物功能所必需的(Kiyota等，(1996)35: 13196-13204; Wei等，(2006) 188: 328-334;Wimmer等，(2006) 5/oc/ em/^o; 45: 481-497)。此外，膜-活性a-螺旋(及其他 结构)似乎要求残基的两性空间排列，即在肽表面两侧的疏水性梯度(Kiyota 等，(1996) 35: 13196-13204; Shai (1999)历ocA/m 5/0;7/y^1462: 55-70; Lee(2002)C^r尸/zwmZ)^ 8: 795-813)。过去，抗微生物肽的合理设计主要集中在改变现有的天然序列，或者通 过大型组合文库开发新型肽(Kiyota等，(1996) 5/oc/zem/Wo; 35: 13196-13204; Blondelle禾卩Lohner (2000)所opo/jwe" 55: 74-87; Hong等，(2001)尸e/ "tfey 22: 1669-1674; Sawai等，(2002)尸她/" 15: 225-232)。这些努力提供了 关于AMP构效关系的有价值信息。变异链球菌是一种常见的口腔病原体，可导致龋齿，即使不断努力去除 或根除，它们仍然保留在牙齿上，甚至越发繁茂。非常需要对抗该生物体的新 型治疗剂，因为饮食中糖的存在使得变异链球菌成为牙齿表面的顽固菌落，即 使专用机械去除(刷牙)和一般抗菌努力，它们仍然保留在口腔微生物群(称为牙 菌斑)中(Keene和Shklair (1974) i 仏53: 1295)。专利技术概述本专利技术涉及新型抗微生物肽的发现。在某些实施方式中，这些肽具有对 抗革兰氏阳性菌的显著活性，尤其是对抗口腔中的革兰氏阳性菌(》/7， ^异链 五，熟。这些肽可用于配制各种抗微生物组合物和/或用于与预防或减少龋齿的 发生。因此，在某些实施方式中，本专利技术提供了一种抗微生物肽，该肽包含以 下氨基酸基序或以下氨基酸基序的环状变换(1^C'(^tftfcSl^HS(^cS)n，其 中n为1-5并以0.1为单位递增；H1， H2， H3， 114和115独立地选自疏水性或 亲水性氨基酸；C1， C2， C3， d和CS独立地选自不带电的氨基酸、正电荷氨 基酸或负电荷氨基酸；该肽形成a螺旋；并且，该肽能有效杀伤或抑制培养物中变异链球菌的生长和/或增殖。在某些实施方式中，C1、 C2、 C3、 d和(35独 立地选自正电荷氨基酸，或负电荷氨基酸。在某些实施方式中，不带电的氨基 酸独立地选自S， T和Y(或其类似物、衍生物或保守取代)，和/或正电荷氨 基酸独立地选自K， R和H(或其类似物、衍生物或保守取代)，和/或负电荷氨基酸s独立地选自N， Q， D和E(或其类似物、衍生物或保守取代)，和/ 或疏水性或亲水性氨基酸独立地选自L、 I、 V、 W和F (或其类似物、衍生 物或保守取代)。在某些实施方式中，该肽在生理学pH下具有至少+3的净正 电荷。在某些实施方式中，n为1.1;所述肽包含基序 H^cWtfcWHVcSH6,其中HM虫立地选自疏水性氨基酸。示例性的 n=l.l的肽包括但不限于FKKFWKWFRRF (SEQ ID NO:31) (B-33)， LKRFLKWFKRF (SEQ ID NO:32) (B陽34)， KLFKR篮HLFR (SEQ ID NO:33) (B-35)， RLLKRFKHLFK (SEQ ID NO:34) (B-36)， FKTFLKWLHRF (SEQ ID NO:35) (B-37)， IKQLLHFFQRF (SEQ ID NO:36) (B-38)， KLLQTFKQIFR (SEQ ID NO:37) (B陽39)， RILKELKNLFK (SEQ ID NO:38) (B-40)， LKQFVHFIHRF (SEQ ID NO :39) (B-41) ， VKTLLHIFQRF (SEQ ID NO :40) (B-42)， KLVEQLKEIFR (SEQ ID NO:41) (B-43), RVLQEIKQILK (SEQ ID NO:42) (B-44) ， VKNLAELVHRF (SEQ ID NO:43) (B-45) ， ATHLLHALQRF (SEQ ID NO:44) (B-46), KLAENVKEILR (SEQ ID NO:45) (B-47)， RALHEAKEALK (SEQ ID NO:46) (B-48) ， FHYFWHWFHRF (SEQ ID NO:47) (B-49)， LYHFLHWFQRF (SEQ ID NO:48) (B-50), YLFQTWQHLFR (SEQ ID NO:49) (B-51)， YLLTEFQHLFK (SEQ ID NO:50) (B-52)， FKTFLQWLHRF (SEQ ID NO:51) (B-53)， IKTLLHFFQRF (SEQ ID NO:52) (B-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗微生物肽，所述肽包含以下氨基酸基序或以下氨基酸基序的环状排列：　（Ｈ↑［１］Ｃ↑［１］Ｃ↑［２］Ｈ↑［２］Ｈ↑［３］Ｃ↑［３］Ｈ↑［４］Ｈ↑［５］Ｃ↑［４］Ｃ↑［５］）↓［ｎ］　式中，　ｎ为１－５并以０．１为单位递增 ；　Ｈ↑［１］、Ｈ↑［２］、Ｈ↑［３］、Ｈ↑［４］和Ｈ↑［５］独立地选自疏水性或亲水性氨基酸；　Ｃ↑［１］、Ｃ↑［２］、Ｃ↑［３］、Ｃ↑［４］和Ｃ↑［５］独立地选自不带电氨基酸、正电荷氨基酸或负电荷氨基酸；　所述肽形成α螺 旋；　所述肽不含氨基酸序列ＦＫＫＦＷＫＷＦＲＲＦ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３１）；和　所述肽能有效杀伤或抑制培养物中变异链球菌的生长或增殖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：何坚，RH埃克特，齐凤霞，MH安德森，施文元，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，C三剑股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]