【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种内封有核酸的脂质纳米粒子的冷冻干燥组合物及其制造方法、通过将冷冻干燥组合物进行再水合而制得的内封有核酸的脂质纳米粒子的制造方法、含有冷冻干燥组合物或将冷冻干燥组合物进行再水合而制得的内封有核酸的脂质纳米粒子的药品组合物的制造方法、以及向细胞内或靶细胞内导入核酸的方法。
技术介绍
1、为了将使用sirna等寡核酸的核酸治疗、使用mrna、pdna等的基因治疗实用化，需要一种有效且安全的核酸递送载体。病毒载体为表达效率良好的核酸递送载体，但可更安全地使用的非病毒核酸递送载体的开发也正在进行。
2、由于使用具有季胺的阳离子性脂质的阳离子性的脂质体带正电，因此能够通过静电相互作用与带负电的核酸形成复合物(脂质体复合物，lipoplex)，能够向细胞内递送核酸。由于通过进一步地利用季胺与核酸发生静电相互作用，制作未含有核酸的阳离子性脂质体的冷冻干燥组合物，使用核酸的水溶液进行再水合，也可以由此形成脂质体复合物，因此显示出也能够被用作基因导入试剂(例如参照专利文献1和2)。
3、然而，通过这样的方法制作的脂质体复合物难以控制粒径，此外源自带正电的阳离子性脂质的细胞毒性成为问题。
4、因此，开发出使用分子内具有在酸性条件下带正电、在中性附近不带电的叔胺的离子性脂质的脂质纳米粒子(lipidnanoparticle，或称为lnp)，该脂质纳米粒子现在成为最普遍使用的非病毒核酸递送载体(例如参照非专利文献1)。
5、作为使用分子内具有这样的叔胺的离子性脂质的脂质纳米粒子的示例，已知
6、如上所述已开发出多种非病毒载体，但由于核酸通常为不稳定的化合物，因此在作为制剂的稳定性上还存在问题。
7、现有技术文献
8、专利文献
9、专利文献1：日本特开2008-5801号公报
10、专利文献2：日本特开2001-2565号公报
11、专利文献3：国际公开第2013/073480号
12、专利文献4：国际公开第2017/218704号
13、非专利文献
14、非专利文献1：gene therapy 6：271-281,1999
15、非专利文献2：biol.pharm.bull.41,1291-1294(2018)的supplementarymaterials
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、然而，作为提升作为制剂的稳定性的1个方法，尝试将包封有核酸的脂质纳米粒子冷冻干燥，使用时再水合，将脂质纳米粒子重新构成(例如参照专利文献4和非专利文献2)。针对这一点，需要在将包封有核酸的脂质纳米粒子冷冻干燥时，即使经过冷冻干燥工序、保管后的再水合工序，粒子的物性、基因递送效率也不发生变化。
3、例如，在非专利文献2中公开了使用t-buoh作为脂质的溶剂，与ph4.0苹果酸缓冲液混合而配制脂质纳米粒子，进行冷冻干燥的方法。
4、此外，例如在专利文献4中公开了使用etoh作为脂质的溶剂配制脂质纳米粒子后，替换为ph7.4的缓冲液后，进一步地添加两亲性聚合物进行冷冻干燥的方法。
5、然而，在非专利文献2和专利文献4的任意的示例中均未进行冷冻干燥前的脂质纳米粒子的基因递送效率与保管、再水合后的基因递送效率的比较。即保持冷冻干燥前后的基因递送效率的技术尚不存在。此外，由于因构成脂质纳米粒子的离子性脂质和其他构成成分的比率不同，脂质纳米粒子的物性也大不相同，因此需要对每种离子性脂质研究冷冻干燥条件。
6、本专利技术鉴于上述课题，目的在于提供一种提升了在现有技术中未能达成的保管稳定性的内封有核酸的脂质纳米粒子的冷冻干燥组合物及其制造方法、含有内封有核酸的脂质纳米粒子的冷冻干燥组合物的药品组合物的制造方法、以及向细胞内或靶细胞内导入核酸的方法。
7、解决问题的手段
8、脂质纳米粒子在酸性条件下与核酸的相互作用较强，另一方面向细胞、生物体给药时，从毒性的观点出发优选为中性。本专利技术人鉴于上述课题深入努力，结果发现在酸性缓冲液中配制内封有核酸的脂质纳米粒子时，通过替换为在ph4.5～6.9具有缓冲区域的其他缓冲液后进行冷冻干燥，可提升保管稳定性，从而完成了本专利技术。
9、即，本专利技术包括以下内容。
10、[1]一种内封有核酸的脂质纳米粒子的冷冻干燥组合物，其含有式(1)表示的离子性脂质且ph为4.5以上、6.9以下：
11、[化1]
12、
13、(式(1)中，
14、r1a和r1b各自独立地表示碳原子数1～6的亚烷基，
15、xa和xb各自独立地表示碳原子数为1～6且叔氨基数为1的非环状的烷基叔氨基、或碳原子数为2～5且叔氨基数为1～2的环状的亚烷基叔氨基，
16、r2a和r2b各自独立地表示碳原子数8以下的亚烷基或氧二亚烷基，
17、ya和yb各自独立地表示酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、醚键或脲键，
18、za和zb各自独立地表示由碳原子数为3～16、具有至少1个芳香环且可具有杂原子的芳香族化合物衍生的2价基团，
19、na和nb各自独立地为0或1，
20、r3a和r3b各自独立地表示：
21、源自具有羟基的脂溶性维生素与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应物的残基、
22、源自具有羟基的甾醇衍生物与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应物的残基、
23、碳原子数1～40的脂肪族烃基、
24、具有环丙烷环的碳原子数3～40的烷基、
25、式(3)所表示的基团、
26、式(4)所表示的碳原子数50以下的基团、或
27、式(5)所表示的碳原子数50以下的基团，r9-o-co-(ch2)a-*(3)
28、(式(3)中，
29、*表示键合位置，
30、r9表示碳原子数2～20的脂肪族烃基，
31、a表示2～10的整数。)
32、[化2]
33、
34、(式(4)中，
35、*表示键合位置，以及
36、r10表示碳原子数1～20的烷基、碳原子数2～20的烯基、碳原子数2～20的炔基或碳原子数3～12的烃环基，以及r10可被选自由3～14元的杂环基和碳原子数3～12的烃环基构成的群中的取代基取代。)
37、[化3]
38、
39、(式(5)中，
40、*表示键合位置，
41、r11表示碳原子数2～9的亚烷基、碳原子数2～9的烯二基或碳原子数2～9的炔二基，以及r11可被选自由卤素原子、羟基和碳原子数3～12的烃环基构成的群中的取代基取代，
42、r12和r13各自独立地表示碳原本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种内封有核酸的脂质纳米粒子的冷冻干燥组合物，其含有式(1)表示的离子性脂质且pH为4.5以上、6.9以下，
2.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，R3a和R3b各自独立地为：
3.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，所述离子性脂质为下述式中表示的化合物：
4.根据权利要求3所述的冷冻干燥组合物，作为所述离子性脂质，其进一步含有下述式所表示的化合物：
5.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，所述离子性脂质为下述式中表示的化合物：
6.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，所述离子性脂质为下述式中表示的化合物：
7.根据权利要求1～6中任一项所述的冷冻干燥组合物，所述脂质纳米粒子中内封的核酸为mRNA。
8.一种内封有核酸的脂质纳米粒子的冷冻干燥组合物的制造方法，其包括以下工序：
9.一种内封有核酸的脂质纳米粒子的制造方法，其包括以下工序：
10.一种向细胞内导入核酸的方法，其包括在生物体外使以权利要求9所述的方法制造的内封有该核酸的脂质纳米粒子与该细胞接触的工序。>
11.一种向靶细胞内导入核酸的方法，其包括将以权利要求9所述的方法制造的内封有该核酸的脂质纳米粒子向生物体给药的工序。
12.一种药品组合物的制造方法，其包括权利要求8所述的方法。
13.一种药品组合物的制造方法，其包括权利要求9所述的方法。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种内封有核酸的脂质纳米粒子的冷冻干燥组合物，其含有式(1)表示的离子性脂质且ph为4.5以上、6.9以下，
2.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，r3a和r3b各自独立地为：
3.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，所述离子性脂质为下述式中表示的化合物：
4.根据权利要求3所述的冷冻干燥组合物，作为所述离子性脂质，其进一步含有下述式所表示的化合物：
5.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，所述离子性脂质为下述式中表示的化合物：
6.根据权利要求1所述的冷冻干燥组合物，所述离子性脂质为下述式中表示的化合物：
7.根据权利要求1～6中任一项所述的冷冻干...
【专利技术属性】
技术研发人员：丹下耕太，中井悠太，种市樱，北泽优衣，秋田英万，田中浩挥，白根大贵，
申请(专利权)人：日油株式会社，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。