【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及砷形态的检测方法，具体涉及全血中多种形态砷的hplc-icpms检测方法。
技术介绍
1、砷(arsenic，as)是一种有毒的非金属元素，是确认的人类致癌物，职业暴露者可致肺癌和皮肤癌。其在自然界中常见的形态有亚砷酸盐[as(iii)]、砷酸盐[as(v)]、一甲基砷(mma)、二甲基砷(dma)、砷甜菜碱(asb)、砷胆碱(asc)和砷糖(ass)等，其毒性与存在的化学形态密切相关。随着现代工业和科学技术的发展，砷矿的开采和冶炼、半导体材料的制造和含砷农药的生产使砷职业接触者成为易暴露人员。职业性砷暴露的主要途径为呼吸道吸收和皮肤吸收，人体吸收后，以不同化学形态存在于人体内，血液作为人体的重要组成部分，可以直接反映毒物的内暴露信息。内暴露可直接建立砷与健康效应的联系，结合人体摄入砷的渠道和时间等信息，可以更科学的评价其暴露风险和预期结果。
2、血中砷形态分析包括各形态砷的分离和各形态砷的检测。目前，国内外报道常采用高效液相色谱(hplc)进行分离，原子荧光光谱(afs)进行检测。由于血液样品基质复杂、样品量少和含量低等特殊性，血样砷形态检测过程中，对形态砷提取方法的选择、形态的分离和检测提出了更高的要求。电感耦合等离子体质谱(icp-ms)相比于afs，具有检出限低、动态线性范围宽、分析速度快及稳定性好等优点，hplc与icp-ms联用进行元素形态分析已成为发展趋势。目前，hplc-icpms用于砷职业接触者血中6种形态砷的检测鲜有报道，且迄今为止，国内外没有职业接触者血中形态砷的正常参考值范围和生
3、为了解决上述问题，本专利技术中提出了全血中多种形态砷的hplc-icpms检测方法。
技术实现思路
1、(1)要解决的技术问题
2、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，适应现实需要，提供全血中多种形态砷的hplc-icpms检测方法，以解决上述技术问题。
3、(2)技术方案
4、为了实现本专利技术的目的，本专利技术所采用的技术方案为：
5、一种全血中多种形态砷的hplc-icpms检测方法及内暴露水平监测，包括以下步骤：
6、步骤一、制备构建六种砷形态校准曲线的标准溶液；
7、步骤二、构建六种砷形态的校准曲线；
8、步骤三、采集全血样品并采集样品空白；
9、步骤四、取0.30ml所述步骤三中采集的全血样品，添加0.30ml提取溶液，得到血样溶液；
10、步骤五、将步骤四中所述血样溶液涡旋振荡2min，以12000r/min的速度离心10min，取0.2ml上清液，在60℃条件氮吹至近干，加入0.2ml纯水复溶，涡旋振荡2min，以12000r/min的速度离心10min，取上清液后得到待测液；
11、步骤六、选用ag7保护柱和as7色谱柱，流动相a：5mmol/l碳酸铵；流动相b：100mmol/l碳酸铵，流动相a比例为0-3min为100％，3-6min为0％，6-12min为100％，进样体积为50μl，流速1.2ml/min作为条件梯度洗脱，对待测液中的目标化合物进行分离，得到目标化合物；
12、步骤七、利用电感耦合等离子体质谱仪对步骤六中所述目标化合物进行检测。
13、进一步地，所述步骤一具体包括：制备砷形态标准中间溶液(1.00ug/ml，以as计)：分别准确称取一定量的亚砷酸根离子(as(iii))、砷酸根离子(as(v))、一甲基砷(mma)、二甲基砷(dma)、砷甜菜碱(asb)、砷胆碱(asc)于10ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度；
14、分别准确吸取一定量浓度为1.00ug/ml的as(iii)、as(v)、mma、dma、asb和asc混合标准中间溶液，用水稀释配制成浓度为0.0ng/ml、0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.0ng/ml、5.0ng/ml、10.0ng/ml、20.0ng/ml和50.0ng/ml的标准系列。
15、进一步地，所述步骤二具体包括：用调谐液调整仪器各项指标，使仪器灵敏度、氧化物、双电荷、分辨率等各项指标符合测定要求。测定浓度为10.0ng/ml的砷形态混合标准溶液，确定各砷形态的分离度符合要求后，将as(iii)、as(v)、mma、dma、asb和asc混合标准系列溶液按质量浓度由低到高分别注入液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪中，得到色谱图，以保留时间定性；
16、以形态砷的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到六种砷形态的校准曲线。
17、进一步地，所述步骤三具体包括：用肝素钠抗凝采血管采集静脉血2.00ml，置于清洁容器中冷藏运输，置于-70℃条件下保存备用；
18、用采血针抽取2.00ml超纯水到采血管作为样品空白，置于清洁容器中冷藏运输，置于-70℃条件下保存备用。
19、进一步地，所述步骤四中提取溶液为甲醇乙腈溶液(v/v＝7:3)，所述步骤四具体包括：取0.30ml全血样品，加0.30ml甲醇乙腈溶液(v/v＝7:3)，形成血样溶液。
20、(3)有益效果：
21、本专利技术，通过选用ag7保护柱和as7色谱柱，流动相a：5mmol/l碳酸铵；流动相b：100mmol/l碳酸铵，流动相a比例为0-3min为100％，3-6min为0％，6-12min为100％作为条件，提高六种形态砷的分离效果和并节约分离时间，通过用甲醇乙腈溶液(v/v＝7:3)作为提取溶液，提高样品提取效果，利用hplc与hplc-icpms技术对样品的预处理、形态砷的hplc分离和icp-ms检测等过程进行优化。
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1.一种全血中多种形态砷的HPLC-ICPMS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的全血中多种形态砷的HPLC-ICPMS检测方法，其特征在于：所述步骤一具体包括：
3.如权利要求1所述的全血中多种形态砷的HPLC-ICPMS检测方法，其特征在于：所述步骤二具体包括：
4.如权利要求1所述的全血中多种形态砷的HPLC-ICPMS检测方法，其特征在于：所述步骤三具体包括：
5.如权利要求1所述的全血中多种形态砷的HPLC-ICPMS检测方法，其特征在于：所述步骤四中提取溶液为甲醇乙腈溶液(V/V＝7:3)，所述步骤四具体包括：
【技术特征摘要】
1.一种全血中多种形态砷的hplc-icpms检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的全血中多种形态砷的hplc-icpms检测方法，其特征在于：所述步骤一具体包括：
3.如权利要求1所述的全血中多种形态砷的hplc-icpms检测方法，其特征在于：所述步...
【专利技术属性】
技术研发人员：张飞，李娜，杨松，游钒，雍莉，郭璟黎，
申请(专利权)人：四川省疾病预防控制中心四川省预防医学科学院，
类型：发明
国别省市：
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