用于生殖医学和生物学的生物标记制造技术

本发明专利技术涉及生殖医学和生物学，特别是体外受精（ＩＶＦ）结果的新生物标记。本发明专利技术涉及预测ＩＶＦ结果和选择ＩＶＦ对象的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生殖医学和生物学。本专利技术涉及着床失败和成功足月 妊娠的预测性标记，特别是在体外受精之后。
技术介绍
在年轻成年人中，不育的诊断和处理是一种普遍的健康问题。对于不育夫妇来说，正在发展中的体外受精(IVF)技术是大有希望的生育替代方案。然而，体外受精伴有临床并发症增加的风险，所述风险对 于它们在女性中的表现，代表的是缺点，包括多胎生产，异位妊娠自 发流产和早产的风险。考虑到这些临床风险，以及这些高端技术的高经济成本，IVF治疗仍然难以用于大多数不育夫妇。虽然对影响受精和 着床机制的更好了解已经提供了与体外受精成功有关参数的更为精准 的观察，但是搜寻在IVF后，治疗开始之前可以预测妊娠结果(issue) 的生物标记，仍然是一个重大的挑战。大多数预测胚胎着床或流产的 标记(Tong等，2004)是在开始IVF治疗后出现的，因而限制了预测与 妊娠失败有关的压力和临床问题的心理咨询(counselling)。因此，在 优化对不育夫妇增加的需求的医疗响应中，预测不育女性在IVF治疗 后娩出活婴的儿率是一个主要问题。因此，强烈需要可以改善对不育夫妇的心理咨询的标记，其在决 定开始IVF治疗并牵涉到相关的临床并发症之前的阶段，作为与IVF 有关的流产和着床失败的预报物。成功胚胎的着床是通过将具有质量合格的胚胎移植至着床来实施 的。胚胎的能力主要是由胚胎形态学和分裂动力学来得到认识的。将 胚胎培养到胚泡阶段具有几个潜在的优点，其中包括选择最有活力的胚胎并具有最好的着床机会，使胚胎-子宫同步化，在多次着床失败的 情况下评价能够胚胎发育的可能性。人们可以希望在移植具有良好质 量的胚胎时(质量限定为形态学方面和发育速度)，胚胎将会着床并 使得妊娠。对于胚胎释放出一组支持其在子宫内膜内着床的信号的这 种内在能力的评价，尚难以评价。因此，对于能够帮助评估胚胎质量，其存活性及其着床能力的标 记，有着强烈的需求。专利技术概述本专利技术首次提供了允许非侵入性评价和预测IVF结果的生物标 记。除了它的诊断价值之外，该生物标记的重要价值是在女性开始激 素调节治疗之前，对其定剂量的可能性。使用这种生物标记将改善心 理咨询或管理IVF相关的风险，进而为不育女性的健康护理提供结果的益处。另外，本专利技术将MICA(MHCI类链相关蛋白A)鉴定为不育 和妊娠并发症的标记。因此，本专利技术涉及MICA在生殖医学和生物学 中作为生物标记。在第一实施方案中，本专利技术涉及确定体外受精(IVF)结果的方法， 包括体外分析样品中的MICA， MICA水平是IVF结果的指示，特别 是着床失败率，IVF失败和/或流产的指示。优选，样品选自-接受移植胚胎的女性的血液，血浆，血清，子宫内膜活检物， 子宫液，阴道和宫颈分泌物，宫颈粘液，道格拉斯陷凹(Douglas' pouch) 和腹腔镜探査情况下(子宫内膜异位，盆腔粘连，感染性后遗症)的腹膜 液样品；-提供精子的男性的血液，血浆，血清和精液样品； -提供卵母细胞的女性的血液，血浆，血清，子宫内膜活检物， 子宫液，阴道和宫颈分泌物，宫颈粘液，道格拉斯陷凹，卵泡液和腹 腔镜探查情况下的腹膜液(子宫内膜异位，盆腔粘连，感染性后遗症) 样品；禾口8-胚胎上清液或胚胎培养基样品。在第二实施方案中，本专利技术涉及选择IVF对象的方法，包括体外分析样品中的MICA，并选择MICA水平指示IVF成功概率的对象。 优选，样品选自血液，血浆，血清，子宫内膜活检物，子宫液，阴道 和宫颈分泌物，宫颈粘液，道格拉斯陷凹，和腹腔镜探查情况下的腹 膜液(子宫内膜异位，盆腔粘连，感染性后遗症)样品。在第三实施方案中，本专利技术涉及在对象中确定精液或游动精子质 量或者确定男性不育概率的方法，包括体外分析来自对象的血液，血 清，血浆或精液样品中的MICA， MICA水平是精液或游动精子质量或 者男性不育的指示。在第四实施方案中，本专利技术涉及确定胚胎质量或选择适合胚胎移 植，体外受精或着床的胚胎的方法，包括体外分析胚胎培养基或上清 液中的MICA， MICA水平是胚胎质量或胚胎适合胚胎移植，体外受精 或着床的指示。在第五实施方案中，本专利技术涉及不育症预后以及在对象中确定妊 娠并发症概率的方法，所述妊娠并发症包括流产，血管型妊娠病(VPD)， 先兆子痫(PE)，合并或不合并先兆子痫的宫内发育迟缓(IUGR)， HELLP综合征，妊娠期脂肪变性，妊娠期肾病或胎死宫内，与自身免 疫病相关的妊娠疾病或不育症，包括体外分析样品中的MICA， MICA 水平指示妊娠并发症的概率。在优选的实施方案中，分析样品中MICA的步骤包括选自下面的 步骤-分析样品中可溶性MICA蛋白； -分析编码MICA的无细胞核酸；和 -分析样品中存在的抗-MICA抗体。在最优选的实施方案中，分析样品中MICA的步骤包括将样品与 抗-MICA抗体相接触，优选单克隆抗体，更优选选自SR99， SR104和 SR116。任选，分析样品中可溶性MICA的步骤能够通过ELISA分析 进行，优选通过夹心ELISA分析。在第六实施方案中，本专利技术涉及在生殖医学和生物学中体外使用 的试剂盒，所述试剂盒包含选自下列的至少一种成分抗-MICA抗体， 编码MICA的核酸特异性的引物组，编码MICA的核酸的特异性探针 和MIC蛋白，优选MICA蛋白。优选，试剂盒用于选择适合IVF的对 象，确定体外受精(IVF)结果，确定精液或游动精子质量，选择适合IVF 的精液或游动精子，确定对象中男性不育的概率，确定胚胎质量，选 择适合胚胎移植，体外受精或着床的胚胎，或鉴别在妊娠期间有高并 发症风险的对象，特别是流产，血管型妊娠病，先兆子痫，合并或不 合并先兆子痫的宫内发育迟缓(IUGR)， HELLP综合征，妊娠期脂肪 变性，妊娠期肾病或胎死宫内的易感对象。优选，抗-MICA是抗体单克隆抗体，优选自SR99，SR104和SR116。 任选，试剂盒还可包含可溶性MICA蛋白。附图说明图1:平均sMIC血清水平在患者中根据着床成功性和IVF结果而 不同。sMIC血清水平评价是在170名不育女性IVF候选者的血清中， 于IVF开始之前周期的卵泡期期间得到的。sMIC是ng/ml的水平。散 点图呈现了 sMIC阳性血样中的中值和中位的25-75四分位范围的误差 棒。使用第4版GmphPad Prism软件获得图。分组代表的是IVF后着 床失败的女性(IMP-)， IVF后出现着床成功的女性(IMP+)， IMP+组进 一步细分为2组IVF后生下新生儿的女性(BBaby)或成功着床后经历 流产的女性(MIS)。产子失败(或因着床失败或因流产)的女性的中位 sMIC值还以IMP-或MIS表示。生育女性对照捐赠组是收集的没有妊娠的血样，所述女性之前已经历过至少2次成功的妊娠，对所述样品也进行MIC评价(Fert Ctl)。图2:参照经历正常妊娠并与孕期相匹配的女性(NP)，发现患有血 管型妊娠病(VPD)女性的MIC+阳性样品中MIC水平高。血管型妊娠病 进一步细分为宫内发育迟缓(IUGR)，先兆子痫(PE)和胎死宫内 (IUFD)。图3:(图3A)先兆子痫组中每天蛋白尿的中位和四分位范围取决 于sMIC状况。使用非参数曼-惠特尼检验(no本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于确定体外受精（ＩＶＦ）结果的方法，包括体外分析样品中的ＭＩＣＡ（ＭＨＣＩ类链相关蛋白Ａ），ＭＩＣＡ水平是ＩＶＦ结果的指示，特别是着床失败率，ＩＶＦ失败和／或流产的指示。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕斯卡尔保罗，索菲卡亚楚克曼，杰拉尔丁波尔库，
申请(专利权)人：地中海大学，法国国家卫生及研究医学协会，巴黎笛卡尔大学，公共事业救济局马赛医院，
类型：发明
国别省市：FR[法国]