【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品分析，更具体地，涉及一种基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法。
技术介绍
1、黄曲霉毒素（af）是指黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素。根据荧光颜色、rf值及结构不同等分别命名为黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素b2、黄曲霉毒素g1、黄曲霉毒素g2、黄曲霉毒素m1、黄曲霉毒素m2、黄曲霉毒素p1、黄曲霉毒素r1、黄曲霉毒素gm和黄曲霉毒素毒醇。af可在谷物和油料作物的种子、乳及乳制品、肉类等多类食品中检出。在2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，af被确定为1类致癌物，其中b1是其中致癌作用最强的，可诱发动物肝癌，对某些动物在浓度10 μg/kg时就可能引起其急性中毒致死。因此，国内食品检测中以afb1作为污染指标，对食品受af污染程度进行检测。
2、目前，针对于食品中的黄曲霉毒素的检测方法，可以分为化学分析法、仪器分析法、免疫分析法以及其他检测方法。免疫层析试纸检测技术兼具了免疫分析技术和层析技术的优势，两种技术的融合使得免疫层析技术具有高效、简便、低成本等优点。目前，该法已广泛应用于食品安全检测领域。且与纳米材料和生物免疫的结合，使得更多具备多重检测功能的免疫试纸条被不断开发，免疫层析试纸条的发展前景广阔。
3、因此，亟需一种基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，以解决上述现有技术
2、本专利技术提供了一种基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其中，包括：
3、制备aupdcu纳米复合材料；
4、利用aupdcu纳米复合材料标记黄曲霉毒素b1单克隆抗体，制作aupdcu纳米显色探针；
5、利用aupdcu纳米显色探针，采用免疫层析法测定黄曲霉毒素b1的浓度。
6、如上所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其中，优选的是，所述制备aupdcu纳米复合材料，具体包括：
7、准确称取0.1 mg cucl2，加入10 ml超纯水中，制备成质量浓度为1% 的cucl2溶液备用；
8、准确称取0.1 mg na2pdcl4粉末，加入到5 ml超纯水中，制备成质量浓度为1% 的na2pdcl4溶液备用；
9、准确称取0.1 mg柠檬酸三钠固体，加入到10 ml超纯水中，制备成质量浓度为1%的柠檬酸三钠溶液备用；
10、将体积为200 μl、质量浓度为 1%的haucl4溶液、体积为100 μl、质量浓度为1%的cucl2溶液和体积为200 μl、质量浓度为 1%的na2pdcl4溶液加入到50 ml的烧杯中，加入20ml超纯水；
11、将烧杯中的混合溶液在搅拌下加热至沸腾，加入体积为1.6 ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，继续搅拌至溶液逐渐转变为黑色，将烧杯以煮沸状态搅拌20 min，直到颜色变成稳定的黑色；最后将所得的aupdcu纳米复合材料溶液定容至10 ml，放在4℃冰箱中避光备用。
12、如上所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其中，优选的是，所述利用aupdcu纳米复合材料标记黄曲霉毒素b1单克隆抗体，制作aupdcu纳米显色探针，具体包括：
13、称取8.0 g nacl、2.9 g na2hpo4·12h2o、0.2 g kcl和0.2 g kh2po4，加入800 ml超纯水，再加入浓盐酸调节ph至7.4，最后定容至1 l，配制成磷酸盐缓冲溶液备用；
14、将aupdcu纳米复合材料溶液用浓度为0.01 mol/l的磷酸盐缓冲溶液进行稀释，其中，aupdcu纳米复合材料溶液与磷酸盐缓冲液的体积比为1:2；
15、吸取20 μl的aupdcu稀释溶液，加入到1.5 ml的离心管中，再加体积为2.0 μl、质量浓度为0.1 μg/ml的黄曲霉毒素b1单克隆抗体，静置30 min；
16、将获得溶液与质量浓度为10%的牛血清白蛋白溶液混合，使溶液中牛血清白蛋白的最终浓度为1%，静置30 min，制成探针aupdcu-mab；
17、将获得的探针溶液置于4℃冰箱中，避光备用。
18、如上所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其中，优选的是，所述利用aupdcu纳米显色探针，采用免疫层析法测定黄曲霉毒素b1的浓度，具体包括：
19、利用乙腈-水溶液和磷酸盐缓冲溶液对待测物进行处理，得到样品提取液；
20、吸取5μl~20μl的探针aupdcu-mab，加入到1.5 ml的离心管中；
21、向离心管中加入体积为100μl的样品提取液；
22、将离心管中的两种溶液混匀后，插入预先制作好的免疫层析试纸，5min~30min后利用胶体金检测仪进行颜色强度值读数，得到黄曲霉毒素b1的浓度检测结果。
23、如上所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其中，优选的是，所述利用乙腈-水溶液和磷酸盐缓冲溶液对待测物进行处理，得到样品提取液，具体包括：
24、准确称取5 g样品于离心管中；
25、向离心管中加入10 ml乙腈-水溶液，其中，乙腈-水的体积比例为7:3；
26、利用混匀仪对离心管进行涡旋1 min；
27、对离心管进行水浴超声30 min；
28、过滤；
29、用浓度为0.01 mol/l的磷酸盐缓冲溶液将滤液稀释10倍，得到样品提取液，并保存在4℃冰箱备用。
30、如上所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其中，优选的是，所述免疫层析试纸的制作方法包括：
31、将样品垫和结合垫放在磷酸盐缓冲液中充分浸泡；
32、将用缓冲液浸泡的样品垫和结合垫放在37℃的鼓风干燥箱中放置4小时；
33、裁剪长度和宽度均为20 cm的硝化纤维膜；
34、利用划膜喷金标机在硝化纤维膜上进行试纸条中t线和c线的固化；
35、将样品垫、结合垫、硝化纤维膜和吸收剂垫有序地粘贴在pvc底板上；
36、利用切条机进行试纸条的切割，其中，切割宽度设置为3 mm；
37、使用塑封袋收纳制得的试纸条，并保存在4℃冰箱中以备用。
38、如上所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其中，优选的是，所述利用划膜喷金标机在硝化纤维膜上进行试纸条中t线和c线的固化，具体包括：
39、分别吸取20μl用磷酸盐缓冲溶液稀释的1μg/ml黄曲霉毒素抗原和1μg/m羊抗鼠二抗，并以1μl/cm分配到硝化纤维素膜上作为t线和c线。
40、如上所述的基于aupdc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述制备AuPdCu纳米复合材料，具体包括：
3.根据权利要求1所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述利用AuPdCu纳米复合材料标记黄曲霉毒素B1单克隆抗体，制作AuPdCu纳米显色探针，具体包括：
4.根据权利要求1所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述利用AuPdCu纳米显色探针，采用免疫层析法测定黄曲霉毒素B1的浓度，具体包括：
5.根据权利要求4所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述利用乙腈-水溶液和磷酸盐缓冲溶液对待测物进行处理，得到样品提取液，具体包括：
6.根据权利要求4所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述免疫层析试纸的制作方法包括：
7.根据权利要求6所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免
8.根据权利要求1所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法还包括：确定采用免疫层析法测定黄曲霉毒素B1的检测灵敏度。
9.根据权利要求8所述的基于AuPdCu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述确定采用免疫层析法测定黄曲霉毒素B1的检测灵敏度，具体包括：
...【技术特征摘要】
1.一种基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述制备aupdcu纳米复合材料，具体包括：
3.根据权利要求1所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述利用aupdcu纳米复合材料标记黄曲霉毒素b1单克隆抗体，制作aupdcu纳米显色探针，具体包括：
4.根据权利要求1所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述利用aupdcu纳米显色探针，采用免疫层析法测定黄曲霉毒素b1的浓度，具体包括：
5.根据权利要求4所述的基于aupdcu探针的黄曲霉毒素比色免疫分析方法，其特征在于，所述利用乙腈-水溶液和磷酸盐...
【专利技术属性】
技术研发人员：田海英，韩路，赵学斌，杨晨，王勇，张颖浩，艾丹，楚文娟，高桂园，宋金勇，
申请(专利权)人：河南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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