【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗球虫药的检测方法，尤其涉及一种液-质联用检测禽类产品中抗球虫药的方法。
技术介绍
1、球虫病主要寄生于宿主肠道(鸡、鸭、鸽、牛、羊等)，肝脏(兔)，肾脏(鹅)等位置对其造成不同程度的损伤，是禽类养殖业的重大疾病之一，每年会造成上亿美元的损失。抗球虫药主要用于球虫病的预防用药，有提高饲料利用率，降低继发疾病风险，促生长等作用，难免会有不法商家利用此特性谋取更多的利益，导致抗球虫药的滥用。但是抗球虫药物有较大的的毒性，会随着食物链进入人体，也引起了极大的重视。
2、饲料中多药都是高效液相色谱-串联质谱检测，由于质谱仪的基质效应比较复杂，并且预混料中原料药的含量较高经多次稀释后检测，过程中难免造成药物的损失，影响最终检测结果的准确性，并且质谱检测方法较复杂对仪器要求较高。而超声萃取、hlb固相萃取柱净化前处理结合超高效液相色谱串联质谱技术uplc-ms/ms具有应用范围广、分离效率高、特异性强和灵敏度高等优点，目前已成为有机物预处理和分析的重要方法之一。
3、但现有的超声萃取、hlb固相萃取柱净化前处理结合超高效液相色谱串联质谱用于畜禽粪便中抗球虫药的检测时，大多由于提取方法、提取溶剂选用不合适，或固相萃取前处理条件、液相色谱条件和/或质谱条件选择不当，或多或少存在着检测结果不稳定、干扰多、检测抗生素数量和回收率有限等问题。
4、因此，急需一种检测结果稳定，干扰因素少的液-质联用检测禽类产品中抗球虫药的方法。
技术实现思路
1、本专利技
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种液-质联用检测禽类产品中抗球虫药的方法，包括以下步骤：
4、(1)配制混合标准溶液；将每种抗球虫药分别溶于乙腈-甲酸-水提取液中得到标准储备液，再将各种标准储备液溶于乙腈水溶液得到混合标准工作液，利用液相色谱-质谱法检测混合标准工作液中每种抗球虫药的含量，得到相应的线性方程；
5、(2)配制样品溶液：将禽类产品样品溶于乙腈-甲酸-水提取液中进行超声提取，然后通过hlb净化柱，淋洗、洗脱后，得到洗脱液，接着将洗脱液氮气吹干，最后用10％乙腈水溶液溶解，过滤后得到样品溶液；
6、(3)采用液相色谱-串联质谱仪测定样品溶液中抗球虫药，结合线性方程，得到每种抗球虫药的含量；
7、步骤(3)中，液相色谱条件为：色谱柱：c18色谱柱，100mm×2.1mm，1.6μm；流动相a：0.1％乙酸铵-0.5％甲酸-水的混合溶液；流动相b：甲醇；流速：0.3～1ml/min；进样量：2～20μl；柱温：30～50℃。
8、进一步的，步骤(3)中，质谱条件为：采用电喷雾离子源负离子扫描模式和多反应监测模式；离子源温度为100～200℃，离子化溶剂的温度为400～600℃，离子化气体流量为1000l/h，去溶剂气体：氮气，碰撞气：氩气，毛细管电压：1～5kv，锥孔电压：20～40v，锥孔气流速：30～60l/h。
9、进一步的，步骤(1)中，所述抗球虫药包括地克珠利、托曲珠利、托曲珠利砜和尼卡巴嗪；
10、所述禽类产品包括鸡蛋。
11、进一步的，每种标准储备液的质量浓度独立的为0.5～1.5mg/ml；所述混合标准溶液的质量浓度为1～500ng/ml。
12、进一步的，步骤(1)和(2)中，所述乙腈-甲酸-水提取液独立的由质量分数为30％的乙腈、质量分数为0.5％的甲酸和余量的水组成。
13、进一步的，步骤(2)中，所述超声提取的时间为10～20min。
14、进一步的，步骤(2)中，所述淋洗的试剂为5％甲醇水溶液，所述洗脱的试剂为90％乙腈和10％甲醇的混合溶液，洗脱试剂的流速为1～2ml/min。
15、进一步的，步骤(2)中，所述氮气吹干的温度为35～45℃。
16、进一步的，步骤(2)中，所述样品溶液中的样品与乙腈-甲酸-水提取液的质量体积比为3～10g：5～50ml。
17、进一步的，步骤(3)中，所述液相色谱检测中的梯度洗脱的程序为：
18、0min：10％甲醇；
19、0～2min，不包含0min：10～80％甲醇；
20、2～6min，不包含2min：80～95％甲醇；
21、6～8min，不包含6min：95％甲醇；
22、8～9min，不包含8min：95～10％甲醇；
23、9～10min，不包含9min：10％甲醇。
24、本专利技术的有益效果：
25、本专利技术提供一种以乙腈-甲酸-水提取液作为样品提取液，hlb净化柱进行净化，0.1％乙酸铵-0.5％甲酸-水的混合溶液作为流动相a，甲醇作为流动相b的液相色谱-串联质谱法测定禽类产品中抗球虫药含量的方法。本专利技术的检测方法灵敏度高，前处理简单，重复性好，可以将残留进行定量检测、实用性广，同时还可以快速准确的测定禽类产品中抗球虫药的含量，对加强抗球虫药的安全监测具有重要意义。
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1.一种液-质联用检测禽类产品中抗球虫药的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，质谱条件为：采用电喷雾离子源负离子扫描模式和多反应监测模式；离子源温度为100～200℃，离子化溶剂的温度为400～600℃，离子化气体流量为1000L/h，去溶剂气体：氮气，碰撞气：氩气，毛细管电压：1～5kV，锥孔电压：20～40V，锥孔气流速：30～60L/h。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗球虫药包括地克珠利、托曲珠利、托曲珠利砜和尼卡巴嗪；
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，每种标准储备液的质量浓度独立的为0.5～1.5mg/mL；所述混合标准溶液的质量浓度为1～500ng/mL。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，所述乙腈-甲酸-水提取液独立的由质量分数为30％的乙腈、质量分数为0.5％的甲酸和余量的水组成。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述超声提取的时间为10～20min。p>
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述淋洗的试剂为5％甲醇水溶液，所述洗脱的试剂为90％乙腈和10％甲醇的混合溶液，洗脱试剂的流速为1～2mL/min。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述氮气吹干的温度为35～45℃。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述样品溶液中的样品与乙腈-甲酸-水提取液的质量体积比为3～10g：5～50mL。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述液相色谱检测中的梯度洗脱的程序为：
...【技术特征摘要】
1.一种液-质联用检测禽类产品中抗球虫药的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，质谱条件为：采用电喷雾离子源负离子扫描模式和多反应监测模式；离子源温度为100～200℃，离子化溶剂的温度为400～600℃，离子化气体流量为1000l/h，去溶剂气体：氮气，碰撞气：氩气，毛细管电压：1～5kv，锥孔电压：20～40v，锥孔气流速：30～60l/h。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗球虫药包括地克珠利、托曲珠利、托曲珠利砜和尼卡巴嗪；
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，每种标准储备液的质量浓度独立的为0.5～1.5mg/ml；所述混合标准溶液的质量浓度为1～500ng/ml。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)和...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘淼，王明君，房建村，封硕，崔明宇，张云超，
申请(专利权)人：东营市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：
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