【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制参与神经周围网络形成的蛋白质的表达的rna干扰(rnai)寡核苷酸、细胞外囊泡和包含所述rnai寡核苷酸或细胞外囊泡的组合物及其用途。
技术介绍
1、脊髓损伤被认为是一种慢性、不可逆的病症。迄今为止，还没有有效的治疗方法可以导致严重脊髓损伤后的功能恢复。神经元在横断后再生的能力有限，这背后有几种神经机制。这些机制之一是神经元周围网络(pnn)这种细胞外基质，其抑制神经元在成年期的可塑性，从而也限制了它们的再生能力。
2、所述pnn由硫酸软骨素蛋白聚糖糖(cspg)的lectican家族的几种蛋白质组成：神经蛋白聚糖(ncan)、腱生蛋白-r(tnr)、多能蛋白聚糖(vcan)和短蛋白聚糖(bcan)以及聚集蛋白聚糖(acan)，它们高度组织成三元稳定结构。这些蛋白质由神经元合成，以维持成人大脑中的突触稳定。pnn是参与可塑性调节的动态支架。病理学研究表明，在脊髓损伤(sci)后，病损区域处cspg的表达明显增加，这最可能阻碍sci后轴突的再生和可塑性。
3、在中枢神经系统(cns)中使用sirna进行蛋白质抑制需要一种智能递送方法，其可以将sirna携带到靶细胞中并保持其功能。外泌体是小的脂质纳米囊泡，天然用作细胞间的通讯。几项研究表明，外泌体可以被负载并用作治疗剂的载体。
4、guo等，(acs nano.2019；13(9):10015-10028.doi:10.1021/acsnano.9b01892；perets等，nano lett.2019；19(6):3422-
5、已证实了几种方法能够分解pnn，以便研究其功能。pnn分解的最常见策略包括使用软骨素酶abc对pnn进行酶消化(o’dell de,schreurs bg,smith-bell c,wangd.neurobiol learn mem.2021；177(2020年12月):107358.doi:10.1016/j.nlm.2020.107358)。软骨素酶abc(chabc)是一种从名为普通变形杆菌(proteusvulgaris)的细菌中获得的酶，它通过降解cspg的糖胺聚糖侧链起作用。已显示使用chabc可以暂时降解pnn，从而允许损伤后脊髓的神经元再生。然而，chabc不选择性地降解特定的pnn蛋白，并可能通过影响il-10对几种其他机制(例如免疫调节应答)产生一定范围的影响。目前，尚无应对pnn不稳定的有效方法和其他疗法可用。此类方法在脊髓损伤的情况下可能是一种有效的治疗方法，因此非常需要。
技术实现思路
1、本专利技术是基于能够抑制在神经元周围网络(pnn)的形成中发挥重要作用的几种蛋白质的表达的新型rna干扰(rnai)寡核苷酸(例如sirna分子)的开发。具体而言，实现了对神经蛋白聚糖(ncan)、腱生蛋白-r(tnr)或两者的抑制。
2、如前所述，pnn主要在成熟神经元中被观察到，并参与可塑性限制。因此，干扰pnn的形成允许更大的神经可塑性和随后的神经再生。与酶降解不同，基于rna的蛋白质表达抑制更具特异性和可控性。由于pnn是一种基于蛋白质的结构，因此可以通过抑制形成它的蛋白质之一的表达来破坏其结构。衍生自间充质干细胞的细胞外囊泡(ev)(msc-exo)被用作递送系统。这些ev先前被证明了在炎症区域中积聚的天然能力，并且也表现出天然的治疗能力。因此，预计在pnn形成的短期抑制与msc-exo之间存在累加甚至协同效应。本专利技术涉及能够抑制作为pnn基质的一部分的蛋白质的表达的rnai寡核苷酸，特别是抑制选自神经蛋白聚糖(ncan)、腱生蛋白-r(tnr)、聚集蛋白聚糖(acan)、多能蛋白聚糖(vcan)和短蛋白聚糖(bcan)的蛋白质的表达的rnai，涉及包含所述rnai分子或其组合的分离的ev，以及包含所述ev的药物组合物及其在治疗神经系统病症中的用途。
3、根据一个方面，本专利技术提供了一种选自sirna和shrna的rnai寡核苷酸，其包含引导链，并抑制神经元周围网络的蛋白质的表达。根据一些实例，所述神经元周围网络的蛋白质选自神经蛋白聚糖(ncan)和腱生蛋白-r(tnr)。根据实例，本专利技术提供了一种选自sirna和shrna的rna干扰(rnai)寡核苷酸，其包含含有选自seq idno：1-5和30-43的核酸序列的引导链。在一些实例中，包含含有选自seq id no：1-5的核酸序列的引导链的rnai寡核苷酸用于抑制神经蛋白聚糖(ncan)的表达。在一些实例中，包含含有选自seq id no：30-43的核酸序列的引导链的rnai寡核苷酸用于抑制腱生蛋白-r(tnr)的表达。因此，在一些实例中，本专利技术提供了一种选自sirna和shrna的rna干扰(rnai)寡核苷酸，其包含含有选自seq idno：1-5和30-43的核酸序列的引导链，并用于抑制选自神经蛋白聚糖(ncan)和腱生蛋白-r(tnr)的神经元周围网络的蛋白质的表达。
4、根据一些实例，本专利技术提供了一种rna干扰(rnai)寡核苷酸，其包含含有选自seqid no：1-5、11-15和86-95的核酸序列的引导链，其中所述rnai寡核苷酸抑制神经蛋白聚糖的表达。根据一些实例，所述rnai寡核苷酸选自sirna和shrna。根据一些实例，所述rnai寡核苷酸是sirna，并且所述引导链由选自seq id no：1-5、11-15和86-95的核酸序列组成。根据一些实例，所述rnai寡核苷酸包含与所述引导链互补的链，其中所述互补链与所述引导链的至少14、15、16、17、18、19、20或21个连续核苷酸互补。根据一些实例，所述互补链包含14至19个核苷酸。根据一些实例，所述互补链包含选自seq id no：6-10、16-20和96-105的核酸序列。
5、根据其他实例，本专利技术提供了一种rna干扰(rnai)寡核苷酸，其包含含有选自seqid no：30-43和58-71的核酸序列的引导链，其中所述rnai寡核苷酸抑制腱生蛋白-r(tnr)的表达。根据一些实例，所述rnai寡核苷酸选自sirna和shrna。根据一些实例，所述rnai寡核苷酸是sirna，并且其中所述引导链由选自seq id no：58-71的核酸序列组成。根据一些实例，所述rnai包含与所述引导链互补的链，其中所述互补链与所述引导链的至少14、15、16、17、18、19、20或2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种选自siRNA和shRNA的RNA干扰(RNAi)寡核苷酸，其包含含有选自SEQ ID NO：1-5和30-43的核酸序列的引导链，用于抑制神经元周围网络的蛋白质的表达。
2.根据权利要求1所述的RNAi寡核苷酸，其中所述神经元周围网络的蛋白质选自神经蛋白聚糖(NCAN)和腱生蛋白-R(TNR)。
3.根据权利要求2所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi寡核苷酸抑制神经蛋白聚糖蛋白质的表达，并且所述引导链包含选自SEQ ID NO：1-5的核酸序列。
4.根据权利要求3所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi寡核苷酸抑制神经蛋白聚糖蛋白质的表达，并且所述引导链包含选自SEQ ID NO：11-15和86-95的核酸序列。
5.根据权利要求3或4所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi是siRNA，并且其中所述引导链由选自SEQ ID NO：1-5、11-15和86-95的核酸序列组成。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其包含与所述引导链互补的链，其中所述互补链与所述引导链的至少14、15、
7.根据权利要求6所述的RNAi寡核苷酸，其中所述互补链包含选自SEQ ID NO：6-10的核酸序列，并且其中所述互补链在第1和19位置处包含与所述引导链的序列中相应位置处的核酸互补的核酸。
8.根据权利要求7所述的RNAi寡核苷酸，其中所述互补链包含选自SEQ ID NO：16-20和96-105的核酸序列。
9.根据权利要求3所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi寡核苷酸是包含引导链和互补链的siRNA，其中所述引导链包含选自SEQ ID NO：11-15和86-95的核酸序列，并且所述互补链包含选自SEQ ID NO：16-20和96-105的核酸序列。
10.根据权利要求3所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi是包含引导链和互补链对的siRNA，其中所述对包含核酸序列SEQ ID NO：11和16、SEQ ID NO：12和17或SEQ ID NO：13和18，或由所述核酸序列组成。
11.根据权利要求3所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi寡核苷酸是包含引导链和互补链对的siRNA，其中所述对包含核酸序列SEQ ID NO：86和96、SEQ ID NO：87和77、SEQ IDNO：88和88、SEQ ID NO：89和99、SEQ ID NO：90和100、SEQ ID NO：91和101、SEQ ID NO：92和102、SEQ ID NO：93和103、SEQ ID NO：94和104或SEQ ID NO：95和105，或由所述核酸序列组成。
12.根据权利要求2所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi寡核苷酸抑制腱生蛋白-R(TNR)的表达，并且所述引导链包含选自SEQ ID NO：30-43的核酸序列。
13.根据权利要求12所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi寡核苷酸抑制腱生蛋白-R(TNR)的表达，并且所述引导链包含选自SEQ ID NO：58-71的核酸序列。
14.根据权利要求12或13所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi是siRNA，并且其中所述引导链由选自SEQ ID NO：30-43和58-71的核酸序列组成。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其包含与所述引导链互补的链，其中所述互补链与所述引导链的至少14、15、16、17、18、19、20或21个连续核苷酸互补。
16.根据权利要求15所述的RNAi寡核苷酸，其中所述互补链包含选自SEQ ID NO：44-57的核酸序列，并且其中所述互补链在第1和19位置处包含与所述引导链的序列中相应位置处的核酸互补的核酸。
17.根据权利要求16所述的RNAi寡核苷酸，其中所述互补链包含选自SEQ ID NO：72-85的核酸序列。
18.根据权利要求12所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi是包含引导链和互补链的siRNA，其中所述引导链包含选自SEQ ID NO：44-57的核酸序列，并且所述互补链包含选自SEQ ID NO：72-85的核酸序列。
19.根据权利要求12所述的RNAi寡核苷酸，其中所述RNAi寡核苷酸是包含引导链和互补链对的siRNA，其中所述对包含核酸序列SEQ ID NO：58和72、SEQ ID NO：61和75或SEQ IDNO：62和76，或由所述核酸序列组成。
20.根据权利...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种选自sirna和shrna的rna干扰(rnai)寡核苷酸，其包含含有选自seq id no：1-5和30-43的核酸序列的引导链，用于抑制神经元周围网络的蛋白质的表达。
2.根据权利要求1所述的rnai寡核苷酸，其中所述神经元周围网络的蛋白质选自神经蛋白聚糖(ncan)和腱生蛋白-r(tnr)。
3.根据权利要求2所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai寡核苷酸抑制神经蛋白聚糖蛋白质的表达，并且所述引导链包含选自seq id no：1-5的核酸序列。
4.根据权利要求3所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai寡核苷酸抑制神经蛋白聚糖蛋白质的表达，并且所述引导链包含选自seq id no：11-15和86-95的核酸序列。
5.根据权利要求3或4所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai是sirna，并且其中所述引导链由选自seq id no：1-5、11-15和86-95的核酸序列组成。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的rnai寡核苷酸，其包含与所述引导链互补的链，其中所述互补链与所述引导链的至少14、15、16、17、18、19、20或21个连续核苷酸互补。
7.根据权利要求6所述的rnai寡核苷酸，其中所述互补链包含选自seq id no：6-10的核酸序列，并且其中所述互补链在第1和19位置处包含与所述引导链的序列中相应位置处的核酸互补的核酸。
8.根据权利要求7所述的rnai寡核苷酸，其中所述互补链包含选自seq id no：16-20和96-105的核酸序列。
9.根据权利要求3所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai寡核苷酸是包含引导链和互补链的sirna，其中所述引导链包含选自seq id no：11-15和86-95的核酸序列，并且所述互补链包含选自seq id no：16-20和96-105的核酸序列。
10.根据权利要求3所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai是包含引导链和互补链对的sirna，其中所述对包含核酸序列seq id no：11和16、seq id no：12和17或seq id no：13和18，或由所述核酸序列组成。
11.根据权利要求3所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai寡核苷酸是包含引导链和互补链对的sirna，其中所述对包含核酸序列seq id no：86和96、seq id no：87和77、seq idno：88和88、seq id no：89和99、seq id no：90和100、seq id no：91和101、seq id no：92和102、seq id no：93和103、seq id no：94和104或seq id no：95和105，或由所述核酸序列组成。
12.根据权利要求2所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai寡核苷酸抑制腱生蛋白-r(tnr)的表达，并且所述引导链包含选自seq id no：30-43的核酸序列。
13.根据权利要求12所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai寡核苷酸抑制腱生蛋白-r(tnr)的表达，并且所述引导链包含选自seq id no：58-71的核酸序列。
14.根据权利要求12或13所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai是sirna，并且其中所述引导链由选自seq id no：30-43和58-71的核酸序列组成。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的rnai寡核苷酸，其包含与所述引导链互补的链，其中所述互补链与所述引导链的至少14、15、16、17、18、19、20或21个连续核苷酸互补。
16.根据权利要求15所述的rnai寡核苷酸，其中所述互补链包含选自seq id no：44-57的核酸序列，并且其中所述互补链在第1和19位置处包含与所述引导链的序列中相应位置处的核酸互补的核酸。
17.根据权利要求16所述的rnai寡核苷酸，其中所述互补链包含选自seq id no：72-85的核酸序列。
18.根据权利要求12所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai是包含引导链和互补链的sirna，其中所述引导链包含选自seq id no：44-57的核酸序列，并且所述互补链包含选自seq id no：72-85的核酸序列。
19.根据权利要求12所述的rnai寡核苷酸，其中所述rnai寡核苷酸是包含引导链和互补链对的sirna，其中所述对包含核酸序列seq id no：58和72、seq id no：61和75或seq idno：62和76，或由所述核酸序列组成。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的rnai寡核苷酸，其与疏水性分子偶联。
21.根据权利要求20所述的rnai寡核苷酸，其中所述疏水性部分选自甾醇、神经节苷脂、脂质、维生素、脂肪酸、疏水性肽及其组合。
22.根据权利要求21所述的rnai寡核苷酸，其中所述疏水性部分是胆甾醇。
23.根据权利要求1至19中任一项所述的rnai寡核苷酸，其与碳水化合物偶联。
24.根据权利要求23所述的rnai寡核苷酸，其中所述碳水化合物选自葡萄糖和蔗糖。
25.一种分离的细胞外囊泡(ev)，其包含抑制神经元周围网络的蛋白质的表达的选自sirna和shrna的rna干扰(rnai)寡核苷酸。
26.根据权利要求25所述的分离的ev，其中所述蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·阿哈罗诺夫，尼西姆·佩列茨，L·萨尔蒂尔，
申请(专利权)人：诺艾克叟恩生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。