【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术一般涉及血管内皮生长因子c(vegf-c)突变蛋白，其对血管内皮生长因子受体3(vegfr-3)具有相对于血管内皮生长因子受体2(vegfr-2)的选择性结合。本专利技术还涉及一种通过向受试者施用有效量的vegf-c突变蛋白或其功能片段来诱导有需要的受试者中的淋巴管生成的方法。本专利技术还涉及一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的vegf-c突变蛋白或其功能片段。
技术介绍
0、背景
1、由于缺乏淋巴引流，中枢神经系统中对病原体和肿瘤的免疫监视被认为是有限的。已显示可以操纵脑膜淋巴脉管系统来产生更好的针对脑肿瘤的免疫反应。当肿瘤局限于中枢神经系统时，由cd8 t细胞介导的对胶质母细胞瘤抗原的免疫力非常有限，导致肿瘤生长不受控制。然而，血管内皮生长因子c(vegf-c)的异位表达促进了引流颈部深层淋巴结中cd8 t细胞的增强启动、cd8 t细胞向肿瘤的迁移、胶质母细胞瘤的快速清除和持久的抗肿瘤记忆反应。此外，表达vegf-c的mrna构建体的转染与检查点阻断疗法协同作用以根除现有的胶质母细胞瘤。
2、血管内皮生长因子c(vegf-c)与血管内皮生长因子受体-2(vegfr-2)结合，促进血管生长(血管生成)并调节血管通透性，并与血管内皮生长因子受体-3(vegfr-3)结合，促进淋巴管生长(淋巴管生成)。vegf-c主要通过vegfr-3作用于淋巴管内皮细胞(lec)，从而促进其存活、生长和迁移。血管生成是原发性肿瘤和转移性肿瘤生长的必要条件。需要在促进淋巴
技术实现思路
0、专利技术概述
1、下面描述了本专利技术的各种非限制性方面和实施方案。
2、在一个方面，本文提供了一种分离的血管内皮生长因子c(vegf-c)突变蛋白或其功能片段，其中与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白相比，vegf-c突变蛋白或其功能片段具有降低的或没有刺激血液内皮细胞增殖的能力，但保留了刺激淋巴管内皮细胞增殖的能力。
3、在一个方面，本文提供了一种分离的血管内皮生长因子c(vegf-c)突变蛋白或其功能片段，其中vegf-c突变蛋白或其功能片段(i)与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白相比具有降低的对血管内皮生长因子受体-2(vegfr-2)的结合亲和力，(ii)具有结合血管内皮生长因子受体-3(vegfr-3)并通过其产生信号传导的能力，并且(iii)包含与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列。
4、在上述任何方法的一些实施方案中，与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白相比，vegf-c突变蛋白或其功能片段产生减少的或不产生通过vegfr-2的信号传导。在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段不产生通过vegfr-2的信号传导。在上述任何方法的一些实施方案中，通过测量血液内皮细胞中vegfr-2依赖的akt磷酸化和/或erk磷酸化水平、通过伤口愈合测定、通过增殖测定或通过血管生成测定来确定通过vegfr-2的信号。在上述任何方法的一些实施方案中，通过测量淋巴管内皮细胞中vegfr-3依赖的akt-磷酸化和/或erk-磷酸化水平、通过伤口愈合试验(划痕试验)、通过增殖试验或通过血管生成试验来确定通过vegfr-3的信号传导。
5、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段不诱导血管生成。
6、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白是包含seq id no：4的氨基酸111-211的野生型vegf-c蛋白的突变蛋白，或由另一物种的野生型vegf-c蛋白内的相应位置定义的多肽的突变蛋白。在上述任何方法的一些实施方案中，野生型vegf-c蛋白包含seq id no：4的氨基酸111-211。
7、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段包含选自残基t112、l115、d119、q126、t144、n145、k149、n163、s164、e165、i184、v186、l188和p192处的突变的一个或多个突变，其中所述残基的位置相对于seq id no：4定义，或选自另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应残基处的突变的一个或多个突变，或在残基t116、l119、d123、q130、t148、n149、k153、n167、s168、e169、i188、v190、l192和p196处的一个或多个突变，其中所述残基的位置相对于seq id no：1定义。
8、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段还包含残基c133处的突变，其中所述残基的位置相对于seq id no：4定义，或包含另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应残基处的突变。在一些实施方案中，残基c133处的突变为c133a突变。
9、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白是包含seq id no：1的氨基酸115-215的野生型vegf-c蛋白的突变蛋白，或另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应位置定义的多肽的突变蛋白。在一些实施方案中，野生型vegf-c蛋白包含seq id no：1的氨基酸115-215。
10、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段包含选自残基t116、l119、d123、q130、t148、n149、k153、n167、s168、e169、i188、v190、l192和p196处的突变的一个或多个突变，其中所述残基的位置相对于seq id no：1定义。
11、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段还包含残基c137处的突变，其中所述残基的位置相对于seq id no：1定义，或包含另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应残基处的突变。在一些实施方案中，残基c137处的突变为c137a突变。
12、在上述任何方法的一些实施方案中，残基l119处的突变为l119e突变或l119m突变；残基d123处的突变为d123n突变；残基q130处的突变为q130k突变；残基n167处的突变为n167r突变、n167i突变、n167q突变或n167h突变；残基s168处的突变为s168g突变或s168r突变；残基v190处的突变为v190t突变；和/或残基l192处的突变为l192i突变。
13、在上述任意方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段包含选自残基n167、s168和/或l192处的突变的一个或多个突变。
14、在上述任何方法的一些实施方案中，残基n167处的突变为n167i突变、n167q突变或n167h突变；残基s168处的突变为s168g突变或s168r突变；和/或残基l192处的突变为l192i突变。
15、在上述任何方法的一些实施方案中，vegf-c突变蛋白或其功能片段包括n本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的血管内皮生长因子C(VEGF-C)突变蛋白或其功能片段，其中与来自同一物种的野生型VEGF-C蛋白相比，VEGF-C突变蛋白或其功能片段具有降低的或没有刺激血液内皮细胞增殖的能力，但保留了刺激淋巴管内皮细胞增殖的能力。
2.一种分离的血管内皮生长因子C(VEGF-C)突变蛋白或其功能片段，其中VEGF-C突变蛋白或其功能片段(i)与来自同一物种的野生型VEGF-C蛋白相比具有降低的对血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的结合亲和力，(ii)具有结合血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)并通过其产生信号传导的能力，并且(iii)包含与来自同一物种的野生型VEGF-C蛋白的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列。
3.权利要求1或权利要求2的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中与来自同一物种的野生型VEGF-C蛋白相比，所述VEGF-C突变蛋白或其功能片段产生减少的或不产生通过VEGFR-2的信号传导。
4.权利要求3的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白或其功能片段不产生通过VEGFR-2的信号传
5.权利要求3或权利要求4的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中通过测量血液内皮细胞中VEGFR-2依赖的AKT-磷酸化和/或ERK-磷酸化水平、通过伤口愈合测定(划痕测定)、通过增殖测定或通过血管生成测定来确定通过VEGFR-2的信号传导。
6.权利要求2-5中任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中通过测量淋巴管内皮细胞中VEGFR-3依赖的AKT-磷酸化和/或ERK-磷酸化水平、通过伤口愈合测定、通过增殖测定或通过血管生成测定来确定通过VEGFR-3的信号传导。
7.权利要求1-6中任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白或其功能片段不诱导血管生成。
8.权利要求1-7中任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白是包含SEQ ID NO：4的氨基酸111-211的野生型VEGF-C蛋白的突变蛋白，或由另一物种的野生型VEGF-C蛋白内的相应位置定义的多肽的突变蛋白。
9.权利要求8的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述野生型VEGF-C蛋白包含SEQID NO：4的氨基酸111-211。
10.权利要求1-9中任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白或其功能片段包含选自残基T112、L115、D119、Q126、T144、N145、K149、N163、S164、E165、I184、V186、L188和P192处的突变的一个或多个突变，其中所述残基的位置相对于SEQ IDNO：4定义，或包含选自另一物种的野生型VEGF-C蛋白内相应残基处的突变的一个或多个突变。
11.权利要求1-10中任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白或其功能片段还包含残基C133处的突变，其中所述残基的位置相对于SEQ ID NO：4定义，或包含另一物种的野生型VEGF-C蛋白内相应残基处的突变。
12.权利要求11中的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中残基C133处的突变是C133A突变。
13.权利要求1-7中任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白是包含SEQ ID NO：1的氨基酸115-215的野生型VEGF-C蛋白的突变蛋白，或另一物种的野生型VEGF-C蛋白内相应位置定义的多肽的突变蛋白。
14.权利要求13的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述野生型VEGF-C蛋白包含SEQID NO：1的氨基酸115-215。
15.权利要求1-7和13-14中任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白或其功能片段包含选自残基T116、L119、D123、Q130、T148、N149、K153、N167、S168、E169、I188、V190、L192和P196处的突变的一个或多个突变，其中所述残基的位置相对于SEQID NO：1定义。
16.权利要求1-7和13-15任一项的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中所述VEGF-C突变蛋白或其功能片段还包含残基C137处的突变，其中所述残基的位置相对于SEQ ID NO：1定义，或包含另一物种的野生型VEGF-C蛋白内相应残基处的突变。
17.权利要求16的VEGF-C突变蛋白或其功能片段，其中残基C137处的突变为C137A突变。
18.权利要求...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的血管内皮生长因子c(vegf-c)突变蛋白或其功能片段，其中与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白相比，vegf-c突变蛋白或其功能片段具有降低的或没有刺激血液内皮细胞增殖的能力，但保留了刺激淋巴管内皮细胞增殖的能力。
2.一种分离的血管内皮生长因子c(vegf-c)突变蛋白或其功能片段，其中vegf-c突变蛋白或其功能片段(i)与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白相比具有降低的对血管内皮生长因子受体-2(vegfr-2)的结合亲和力，(ii)具有结合血管内皮生长因子受体-3(vegfr-3)并通过其产生信号传导的能力，并且(iii)包含与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列。
3.权利要求1或权利要求2的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中与来自同一物种的野生型vegf-c蛋白相比，所述vegf-c突变蛋白或其功能片段产生减少的或不产生通过vegfr-2的信号传导。
4.权利要求3的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段不产生通过vegfr-2的信号传导。
5.权利要求3或权利要求4的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中通过测量血液内皮细胞中vegfr-2依赖的akt-磷酸化和/或erk-磷酸化水平、通过伤口愈合测定(划痕测定)、通过增殖测定或通过血管生成测定来确定通过vegfr-2的信号传导。
6.权利要求2-5中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中通过测量淋巴管内皮细胞中vegfr-3依赖的akt-磷酸化和/或erk-磷酸化水平、通过伤口愈合测定、通过增殖测定或通过血管生成测定来确定通过vegfr-3的信号传导。
7.权利要求1-6中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段不诱导血管生成。
8.权利要求1-7中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白是包含seq id no：4的氨基酸111-211的野生型vegf-c蛋白的突变蛋白，或由另一物种的野生型vegf-c蛋白内的相应位置定义的多肽的突变蛋白。
9.权利要求8的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述野生型vegf-c蛋白包含seqid no：4的氨基酸111-211。
10.权利要求1-9中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含选自残基t112、l115、d119、q126、t144、n145、k149、n163、s164、e165、i184、v186、l188和p192处的突变的一个或多个突变，其中所述残基的位置相对于seq idno：4定义，或包含选自另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应残基处的突变的一个或多个突变。
11.权利要求1-10中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段还包含残基c133处的突变，其中所述残基的位置相对于seq id no：4定义，或包含另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应残基处的突变。
12.权利要求11中的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中残基c133处的突变是c133a突变。
13.权利要求1-7中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白是包含seq id no：1的氨基酸115-215的野生型vegf-c蛋白的突变蛋白，或另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应位置定义的多肽的突变蛋白。
14.权利要求13的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述野生型vegf-c蛋白包含seqid no：1的氨基酸115-215。
15.权利要求1-7和13-14中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含选自残基t116、l119、d123、q130、t148、n149、k153、n167、s168、e169、i188、v190、l192和p196处的突变的一个或多个突变，其中所述残基的位置相对于seqid no：1定义。
16.权利要求1-7和13-15任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段还包含残基c137处的突变，其中所述残基的位置相对于seq id no：1定义，或包含另一物种的野生型vegf-c蛋白内相应残基处的突变。
17.权利要求16的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中残基c137处的突变为c137a突变。
18.权利要求15-17任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中残基l119处的突变为l119e突变或l119m突变；残基d123处的突变为d123n突变；残基q130处的突变为q130k突变；残基n167处的突变为n167r突变、n167i突变、n167q突变或n167h突变；残基s168处的突变为s168g突变或s168r突变；残基v190处的突变为v190t突变；和/或残基l192处的突变为l192i突变。
19.权利要求15-18中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含选自残基n167、s168和/或l192处的突变的一个或多个突变。
20.权利要求19的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中残基n167处的突变为n167i突变、n167q突变或n167h突变；s168残基的突变为s168g突变或s168r突变；和/或l192残基的突变为l192i突变。
21.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167q突变。
22.权利要求21的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：160或seq id no：56的氨基酸序列。
23.权利要求22的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：160或seqid no：56的氨基酸序列组成。
24.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167q突变和s168g突变。
25.权利要求24的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：161或seq id no：57的氨基酸序列。
26.权利要求25的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：161或seqid no：57的氨基酸序列组成。
27.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167q突变和l192i突变。
28.权利要求27的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：162或seq id no：58的氨基酸序列。
29.权利要求28的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：162或seqid no：58的氨基酸序列组成。
30.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167q突变、s168g突变和l192i突变。
31.权利要求30的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：163或seq id no：59的氨基酸序列。
32.权利要求31的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：163或seqid no：59的氨基酸序列组成。
33.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167i突变。
34.权利要求33的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：166或seq id no：62的氨基酸序列。
35.权利要求34的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：166或seqid no：62的氨基酸序列组成。
36.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167i突变和s168g突变。
37.权利要求36的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：167或seq id no：63的氨基酸序列。
38.权利要求37的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：167或seqid no：63的氨基酸序列组成。
39.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167i突变和l192i突变。
40.权利要求39的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：168或seq id no：64的氨基酸序列。
41.权利要求40的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：168或seqid no：64的氨基酸序列组成。
42.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167i突变、s168g突变和l192i突变。
43.权利要求42的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：169或seq id no：65的氨基酸序列。
44.权利要求43的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：169或seqid no：65的氨基酸序列组成。
45.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含s168g突变。
46.权利要求45的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：172或seq id no：68的氨基酸序列。
47.权利要求46的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：172或seqid no：68的氨基酸序列组成。
48.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含s168g突变和l192i突变。
49.权利要求48的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：174或seq id no：70的氨基酸序列。
50.权利要求49的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：174或seqid no：70的氨基酸序列组成。
51.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167h突变。
52.权利要求51的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：184或seq id no：80的氨基酸序列。
53.权利要求52的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：184或seqid no：80的氨基酸序列组成。
54.权利要求20的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述vegf-c突变蛋白或其功能片段包含n167i突变和s168r突变。
55.权利要求54的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白包含seq id no：192或seq id no：88的氨基酸序列。
56.权利要求55的vegf-c突变蛋白，其中所述vegf-c突变蛋白由seq id no：192或seqid no：88的氨基酸序列组成。
57.一种融合蛋白或缀合物，其包含权利要求1-56中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段，其中所述突变蛋白或其功能片段与一个或多个异源部分融合和/或缀合。
58.权利要求57的融合蛋白或缀合物，其中一个或多个异源部分选自免疫球蛋白或其功能片段、白蛋白或其功能片段、白蛋白结合抗体或其功能片段和聚乙二醇(peg)聚合物。
59.权利要求58的融合蛋白或缀合物，其中免疫球蛋白或其功能片段包含igg fc结构域。
60.权利要求59的融合蛋白，其中igg fc结构域被修饰以降低fc效应功能。
61.权利要求60的融合蛋白，其中igg fc结构域包含残基n297处的突变。
62.权利要求61的融合蛋白，其中残基n297处的突变选自n297q、n297a和n297g。
63.一种分离的多核苷酸分子，其编码权利要求1-56中任一项的vegf-c突变蛋白或其功能片段或权利要求57-62中任一项的融合蛋白或缀合物。
64.权利要求63的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸分子包含seq id no：210或seq idno：108的核苷酸序列。
65.权利要求63的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸分子包含seq id no：211或seq idno：109的核苷酸序列。
66.权利要求63的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸分子包含seq id no：212或seq idno：110的核苷酸序列。
67.权利要求63的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸分子包含seq id no：213或seq idno：111的核苷酸序列。
68.权利要求63的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸分子包含seq id no：216或seq idno：114的核苷酸序列。
69.权利要求63的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸分子包含seq id no：217或seq idno：115的核苷酸序列。
70.权利要求63的多...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·宋，A·伊瓦萨基，A·凌，T·周，
申请(专利权)人：耶鲁大学，
类型：发明
国别省市：
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