【技术实现步骤摘要】
本申请属于微生物，具体涉及动物细胞，更具体地，本申请涉及一类新型肾小管上皮间充质转化的调控方法。
技术介绍
1、肾小管上皮间充质转化（epithelial-to-mesenchymal transition，emt）是慢性肾病（chronic kidney disease，ckd）进展中的关键病理过程，肾间质纤维化（renalinterstitial fibrosis，rif）的重要机制，也是肾功能下降并最终导致终末期肾病的主要原因之一。研究表明，emt过程中，肾小管上皮细胞失去其上皮特性，转变为具有间充质细胞特性的肌成纤维细胞，这些细胞能够产生和分泌大量细胞外基质（extracellular matrix，ecm），最终导致肾间质纤维化的发生，这一过程与肾脏疾病的病理进程密切相关。阻断emt在肾脏纤维化中的作用已被证明可以显著减少纤维化病变，这表明emt在肾间质纤维化中具有重要意义。因此，针对emt的调控成为治疗ckd和肾间质纤维化的重要策略。针对emt的药物研发为ckd的治疗提供了新的思路。例如，一些药物可以通过抑制emt过程中的关键信号通路（如tgf-β/smad、wnt/β-catenin等）来阻断emt的发生。此外，一些中药也显示出了对emt过程的干预作用，如黄芪、冬虫夏草等，从而为肾纤维化的治疗提供了潜在的药理学途径。
2、芳香烃受体（ahr）在心脏、肝、肺的纤维化过程中发挥复杂的调控作用。ahr−/−小鼠在ang ii输注诱导的心脏纤维化中发生左心室肥厚的可能性更高，与野生型小鼠相比，c-jun/hif
3、二噁英类化合物是ahr的外源性激动剂，其中2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英（tcdd）对ahr的激活作用为最强。ch223191是一种有效且特异的ahr拮抗剂，优先拮抗tcdd等卤代芳烃类ahr激动剂。这些药物在实验中被广泛用于调节ahr信号通路的活性，为研究基于ahr的肾小管上皮emt调控方法提供了工具。
4、在以下实施例中，通过使用ahr信号通路活性的调节剂，我们检测了一系列肾小管上皮间充质转化标志物，以评估emt效应的强度变化，发现tcdd或ch223191可以激活或抑制肾小管上皮细胞hkc细胞中的ahr信号通路，同时调控一些特定的emt标志物的表达，这些标志物在许多文献中被认为是emt病理进程中的关键因素。因此，本专利技术实现了通过调节ahr信号通路的活性来调控体现emt效应强度的特定标志物的表达，提供了一种新的调控肾小管上皮间充质转化的方法，为开发新的抗emt药物提供新的思路和策略。
技术实现思路
1、本申请要解决的技术问题是：如何研究肾小管上皮间充质转化的机理以及如何获得研究肾小管上皮间充质转化机理的细胞模型。
2、为解决上述技术问题，本申请提供上调、提高或增加肾小管上皮细胞中的纤维化标志基因的表达的方法，所述方法包括使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体（ahr）的激动剂进行接触，以上调、提高或增加所述肾小管上皮细胞中的纤维化标志基因的表达。
3、本申请还提供制备纤维化标志基因的表达上调、提高或增加的目的肾小管上皮细胞的方法，所述方法包括使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体（ahr）的激动剂进行接触，获得目的肾小管上皮细胞。
4、本申请中，所述纤维化标志基因也可称为上皮间充质转化标志基因。
5、所述纤维化标志基因的表达上调、提高或增加的目的肾小管上皮细胞中所述纤维化标志基因的表达水平高于所述离体的肾小管上皮细胞。
6、进一步地，所述肾小管上皮细胞中的纤维化标志基因包括但不限于fibronectin（ncbi reference sequence: nm_001365522.2，更新时间：2024-11-12）、mmp9（ncbireference sequence:nm_004994.3，更新时间：2024-10-29）和il-6（ncbi referencesequence:nm_001318095.2，更新时间：2024-11-12）。
7、进一步地，所述的方法中，所述芳香烃受体（ahr）的激动剂为二噁英。
8、进一步地，所述二噁英为2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英（tcdd）。
9、进一步地，所述的方法中，使所述肾小管上皮细胞和芳香烃受体（ahr）的激动剂进行接触的体系中2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英的含量为10-10m、10-9m、10-8m或10-7m。
10、进一步地，所述2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英的含量为10-8m。
11、该方法可用于制备具有间充质细胞特性的肾小管上皮细胞。所述具有间充质细胞特性的肾小管上皮细胞可用于筛选新的抗emt药物（抗肾小管上皮间充质转化（epithelial-to-mesenchymal transition，emt）的药物）。
12、所述具有间充质细胞特性的肾小管上皮细胞可为上述纤维化标志基因的表达上调、提高或增加的目的肾小管上皮细胞。
13、本领域中，二噁英实际上是二噁英类（dioxins）一个简称，它指的并不是一种单一物质，而是结构和性质都很相似的包含众多同类物或异构体的两大类有机化合物。二噁英包括210种化合物，这类物质非常稳定，熔点较高，极难溶于水，可以溶于大部分有机溶剂，是无色无味的脂溶性物质，所以非常容易在生物体内积累，对人体危害严重。
14、二噁英全称分别是多氯二苯并二噁英（polychlorinated dibenzo-p-dioxin，简称pcdds）和多氯二苯并呋喃（polychlorinated dibenzofuran，简称pcdfs）。由2个氧原子联结2个被氯原子取代的苯环为多氯二苯并二噁英（pcdds）；由1个氧原子联结2个被氯原子取代的苯环为多氯二苯并呋喃（pcdfs）。每个苯环上都可以取代1～4个氯原子，从而形成众多的异构体，其中pcdds有75种异构体，pcdfs有135种异构体。
15、2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英（tcdd）为多氯二苯并二噁英（pcdds）中的一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.上调、提高或增加肾小管上皮细胞中的纤维化标志基因的表达的方法，其特征在于，所述方法包括使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体的激动剂进行接触，以上调、提高或增加所述肾小管上皮细胞中的纤维化标志基因的表达。
2.制备纤维化标志基因的表达上调、提高或增加的目的肾小管上皮细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体的激动剂进行接触，获得目的肾小管上皮细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述芳香烃受体的激动剂为二噁英，
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，使所述肾小管上皮细胞和芳香烃受体（AhR）的激动剂进行接触的体系中2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英的含量为10-10 M、10-9 M、10-8 M或10-7 M，
5.细胞模型，其特征在于，所述细胞模型为按照包括如下步骤的方法获得的目的肾小管上皮细胞：使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体的激动剂进行接触，获得目的肾小管上皮细胞，所述目的肾小管上皮细胞中所述纤维化标志基因的表达水平高于所述离体的肾小管上皮细胞。
6.根据权利要求
7.根据权利要求6所述的细胞模型，其特征在于，使所述肾小管上皮细胞和芳香烃受体的激动剂进行接触的体系中所述2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英的含量为10-10 M、10-9 M、10-8 M或10-7 M，
8.物质的用途，其特征在于，所述物质为调节AhR信号通路的活性的物质，所述用途为所述物质在制备调控肾小管上皮细胞向上皮间充质转化过程的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述物质为芳香烃受体的激动剂和/或所述芳香烃受体的拮抗剂，
10.根据权利要求8或9所述的用途，其特征在于，所述2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英的有效剂量为10-10 M、10-9 M、10-8 M或10-7 M，
...【技术特征摘要】
1.上调、提高或增加肾小管上皮细胞中的纤维化标志基因的表达的方法，其特征在于，所述方法包括使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体的激动剂进行接触，以上调、提高或增加所述肾小管上皮细胞中的纤维化标志基因的表达。
2.制备纤维化标志基因的表达上调、提高或增加的目的肾小管上皮细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体的激动剂进行接触，获得目的肾小管上皮细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述芳香烃受体的激动剂为二噁英，
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，使所述肾小管上皮细胞和芳香烃受体（ahr）的激动剂进行接触的体系中2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英的含量为10-10 m、10-9 m、10-8 m或10-7 m，
5.细胞模型，其特征在于，所述细胞模型为按照包括如下步骤的方法获得的目的肾小管上皮细胞：使离体的肾小管上皮细胞和芳香烃受体的激动剂进行接触，获得目的肾小管上皮细...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢群慧，朱芮弘，赵斌，徐丽，陈旸升，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：
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