本发明专利技术公开了一种布美他尼中亚硝胺杂质N‑亚硝基布美他尼的测定方法，使用高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A采用甲酸溶液，流动相B采用甲醇，梯度洗脱来测定布美他尼中的亚硝胺杂质N‑亚硝基布美他尼的含量。本发明专利技术设计了新的高效液相色谱法，能准确测定布美他尼中的亚硝胺杂质N‑亚硝基布美他尼的含量，填补了目前尚未有对布美他尼原料药中N‑亚硝基布美他尼的测定方法的空白，还进行了分析方法的验证；本发明专利技术提出的布美他尼中亚硝胺杂质N‑亚硝基布美他尼的测定方法重复性好、选择性强、准确度好、精密度和灵敏度高；本发明专利技术可以有效增强对药物的质量控制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，具体涉及一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法。
技术介绍
1、布美他尼(bumetanide)是一种强效利尿药，利尿效果为呋喃苯胺酸(速尿)的40～60倍，起效快，利尿效果好，与呋塞米相比具有高效、速效、短效和低毒的特点。
2、布美他尼化学名称为3-丁氨基-4-苯氧基-5-氨磺酰基苯甲酸，分子式为c17h20n2o5s，结构式为：
3、
4、根据《化学药物中亚硝胺类杂质研究技术指导原则(试行)》，在一定条件下，胺类化合物尤其是仲胺，易与亚硝酸钠(nano2)或其他亚硝化试剂反应产生亚硝胺类杂质。亚硝胺类杂质是一类具有较高致癌风险的化合物，对人体健康构成威胁。因此有必要对原料药中亚硝胺杂质进行风险评估，使实际工艺中所有可能涉及的亚硝胺类杂质的风险得到明确鉴别和控制，从而达到监管期望的有效途径。
5、经风险评估，在布美他尼的粗制品与精制品中均存在仲胺，虽然合成工艺中已避免使用亚硝酸钠与其他亚硝化试剂，但使用了大量纯化水，纯化水中存在亚硝酸盐，有产生亚硝胺杂质的风险。根据fda公布的亚硝胺杂质限度数据：n-亚硝基布美他尼(n-nitroso-bumetanide)的ped为1.5μg/day。布美他尼口服制剂规格为1mg/片，每日最大服用剂量为20mg；注射剂：静脉注射浓度为0.1mg/ml，肌肉注射浓度为0.25～0.5mg/ml，每日最大剂量为10mg。因此控制限度设定为：1.5μg/day÷20mg/day×106ppm＝75ppm。
6、目前未有报道布美他尼原料药中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，特提出本专利技术，以便实现对药物更严格的质量控制。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是克服
技术介绍
的技术缺陷，提供一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法。本专利技术设计了新的高效液相色谱法，能准确测定布美他尼中的亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的含量，填补了目前尚未有对布美他尼原料药中n-亚硝基布美他尼的测定方法的空白，还进行了分析方法的验证；本专利技术提出的布美他尼中亚硝胺杂质的测定方法重复性好、选择性强、准确度好、精密度和灵敏度高；本专利技术可以有效增强对药物的质量控制。
2、本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
3、一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，使用高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相a采用甲酸溶液，流动相b采用甲醇，梯度洗脱来测定布美他尼中的亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的含量；
4、所述布美他尼为3-丁氨基-4-苯氧基-5-氨磺酰基苯甲酸，其化学结构式如下所示：
5、
6、所述n-亚硝基布美他尼的化学结构式如式i所示：
7、
8、优选地，所述布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，包括如下步骤：
9、(1)制备对照品溶液：取亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼对照品，加稀释剂配制成对照品溶液，其中每1ml约含0.3μgn-亚硝基布美他尼；
10、(2)制备样品溶液：取布美他尼原料药，加稀释剂配制成浓度约为4mg/ml的样品溶液；
11、(3)色谱条件：使用高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相a采用甲酸溶液，流动相b采用甲醇，梯度洗脱；梯度洗脱参数设置为：
12、0～20min，流动相a体积比例从70％变为20％，流动相b体积比例从30％变为80％；
13、20～25min，流动相a体积比例为20％，流动相b体积比例为80％；
14、25～25.1min，流动相a体积比例从20％变为70％，流动相b体积比例从80％变为30％；
15、25.1～30min，流动相a体积比例为70％，流动相b体积比例为30％；
16、精密量取上述对照品溶液、样品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用杂质外标法计算布美他尼中的亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的含量；
17、(4)计算方法
18、杂质含量根据如下公式计算：
19、
20、ai＝样品溶液中杂质的峰面积；
21、astd＝5针对照品溶液中n-亚硝基布美他尼的平均峰面积；
22、mstd＝杂质对照品的称样量，mg；
23、mspl＝样品的称样量，mg；
24、v1＝杂质对照品的稀释体积，ml；
25、v2＝样品的稀释体积，ml；
26、p＝对照品含量。
27、优选地，步骤(1)和步骤(2)中，所述稀释剂的比例为nmp-水(60：40)；更优选地，稀释步骤应先加60％体积nmp充分溶解，加适量水至近刻度线，置冰水浴中快速冷却至室温后，用水定容，摇匀。
28、优选地，步骤(3)中，所述紫外检测器的检测波长为258～262nm，更优选为260nm。
29、优选地，步骤(3)中，所述色谱柱为agilentzorbaxeclipseplus c18，规格为4.6mm×150mm，3.5μm。
30、优选地，步骤(3)中，所述色谱柱的柱温为30～40℃，更优选为35℃。
31、优选地，步骤(3)中，所述流动相a为0.1％甲酸溶液。
32、优选地，步骤(3)中，所述梯度洗脱的流速为0.9～1.1ml/min，更优选为1.0ml/min。
33、优选地，步骤(3)中，所述梯度洗脱参数设置为：
34、0min，流动相a体积比例为70％，流动相b体积比例为30％；
35、20min，流动相a体积比例为20％，流动相b体积比例为80％；
36、25min，流动相a体积比例为20％，流动相b体积比例为80％；
37、25.1min，流动相a体积比例为70％，流动相b体积比例为30％；
38、30min，流动相a体积比例为70％，流动相b体积比例为30％。
39、优选地，步骤(3)中，精密量取对照品溶液、样品溶液各50μl进样。
40、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
41、本专利技术填补了目前尚未有对布美他尼原料药中的亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法的空白；本专利技术设计了新的高效液相色谱法，能准确测定布美他尼中的亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的含量，还进行了分析方法的验证；本专利技术的方法重复性好、选择性强、准确度好、精密度和灵敏度高，可以为布美他尼的质量控制提供可靠数据。
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【技术保护点】
1.一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述稀释剂的比例为NMP：水＝60:40。
3.如权利要求2所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，稀释步骤先加60％体积NMP充分溶解，加适量水至近刻度线，置冰水浴中快速冷却至室温后，用水定容，摇匀。
4.如权利要求1所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述紫外检测器的检测波长为258～262nm。
5.如权利要求4所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，所述紫外检测器的检测波长为260nm。
6.如权利要求1所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述色谱柱的柱温为30～40℃。
7.如权利要求6所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为35℃。
8.如权利要求1所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述梯度洗脱的流速为0.9～1.1ml/min。
9.如权利要求8所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱的流速为1.0ml/min。
10.如权利要求1所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质N-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述梯度洗脱参数设置为：
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【技术特征摘要】
1.一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述稀释剂的比例为nmp：水＝60:40。
3.如权利要求2所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，稀释步骤先加60％体积nmp充分溶解，加适量水至近刻度线，置冰水浴中快速冷却至室温后，用水定容，摇匀。
4.如权利要求1所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述紫外检测器的检测波长为258～262nm。
5.如权利要求4所述的一种布美他尼中亚硝胺杂质n-亚硝基布美他尼的测定方法，其特征在于，所述紫外检测器的检测...
【专利技术属性】
技术研发人员：周涛，王敏超，张鲁峰，孟茹，周海，宋建武，戴圆圆，
申请(专利权)人：宁波大红鹰药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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