System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种检测沙门氏菌的SLAMP引物组和试剂盒制造技术_技高网

一种检测沙门氏菌的SLAMP引物组和试剂盒制造技术

技术编号:44445243 阅读:1 留言:0更新日期:2025-02-28 18:52
本申请提出了一种检测沙门氏菌的SLAMP引物组和试剂盒,涉及生物检测技术领域。所述SLAMP引物组为针对沙门氏菌的保守区片段扩增的引物组,为引物对SAL‑SF/SAL‑SR;其中,SAL‑SF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,SAL‑SR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本申请提供的方法或试剂盒无需昂贵的仪器、也无需复杂的操作就可完成对沙门氏菌的快速准确检测,因此,适用于专业程度不高的口岸、社区等地的现场快速检测。本申请所提供的可视化试剂盒将为现场检测提供极大便利,可实现对沙门氏菌快速准确的非诊断目的检测。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物检测,具体而言,涉及一种检测沙门氏菌的slamp引物组和试剂盒。


技术介绍

1、沙门氏菌,属肠杆菌科,革兰氏阴性肠道杆菌,是人兽共患的肠道病原菌,在自然界中普遍存在,能导致诸如伤寒、副伤寒和食物中毒等多种疾病,对工农业以及畜牧业的发展产生直接冲击。沙门菌死亡后所释放的内毒素,能够诱发宿主出现体温升高、白细胞数量减少的现象,一旦毒素剂量过大,还会引发中毒反应甚至休克。因此,针对食物中的沙门氏菌进行定性或定量检测非常重要。

2、现有的检测方法主要包括pcr、dna探针技术等。尽管这些技术能快速检测样品中总的或致病性沙门氏菌的数量,但这些方法依赖于特殊而昂贵的设备,且其操作过程复杂费时(包括dna的分离、杂交、比色以及探针和引物的合成等),只有熟练掌握了其操作技巧的技术人员才能完成测试。因此,以上方法并不适用于现场快速检测,建立一种快速、灵敏、特异的沙门氏菌检测方法迫在眉睫。


技术实现思路

1、本申请的目的在于提供一种检测沙门氏菌的slamp引物组,此slamp引物组具有敏感性高、特异性强的优点。

2、本申请的另一目的在于提供一种检测沙门氏菌的试剂盒,该试剂盒检测速度快、准确性高、使用方便。

3、本申请的再一目的在于提供一种沙门氏菌的检测方法,该检测方法操作简单。

4、为解决上述技术问题,本申请采用的技术方案:

5、一方面,本申请提供一种检测沙门氏菌的slamp引物组,所述slamp引物组为引物对sal-sf/sal-sr;

6、其中,sal-sf的核苷酸序列如seq id no.1所示,sal-sr的核苷酸序列如seq idno.2所示。

7、第二方面,本申请提供一种试剂盒,所述试剂盒的反应体系包括上述slamp引物组。

8、第三方面,本申请提供一种采用上述的试剂盒检测沙门氏菌的方法,包括以下步骤:

9、步骤1:将待检测核酸样本和试剂盒的反应体系混合,制备扩增反应液;

10、步骤2:将上述制得的扩增反应液于60~65℃反应20~80min,根据显色结果判断样品中是否含有沙门氏菌。

11、基于短链颈环介导的核酸恒温扩增技术(short loop mediated isothermalamplification ofnucleic acids,slamp)是专利技术人团队在前期开发的cda技术(中国专利授权号:zl202110473121.8)和日本lamp核酸扩增的方法的基础上,新近改进研发的一种核酸在恒温条件下的扩增技术(中国专利申请号:202411655233.5)。所研发的slamp方法主要利用2个不同的特异性引物识别靶基因的特定区域,在恒温条件进行扩增反应。与常规基因检测手段(如pcr等)相比,slamp反应在恒温水浴箱中便可完成,仪器设备要求低,较传统pcr和培养法操作简单许多,不需要专业人士也可准确完成,且扩增结果可结合金属离子指示剂羟基萘酚兰(hnb),通过肉眼观察颜色变化以实现对结果的判断,使其适用于基层医疗机构及地方检验检疫部门。并且,slamp还可以大大缩短操作时间,减少样品污染机会,适合应用于沙门氏菌的快速诊断。此外,slamp所用关键成环引物约为30bp,较lamp中成环引物40bp短,相关引物设计极为简单,仅需做简单重排,这将极大程度的节约设计时间和开发成本。

12、相对于现有技术,本申请的实施例至少具有如下优点或有益效果:

13、1、本申请通过对沙门氏菌的特异保守区域(genbank:cp163542.1)设计多个引物组,并从中筛选出扩增效率最高的引物组。该引物组由2条引物组成,包括序列内引物对(sal-sf/sal-sr)分别为上下游外部引物。本申请提供的引物组敏感性高、特异性强,由其制成的试剂盒能够快速、准确的检测到待测样品中含有的沙门氏菌。

14、2、由于本申请提供的引物组具有极高的特异性,slamp扩增所需时间短,进一步缩短检测的时间,简化操作。

15、3、本申请提供的方法或试剂盒无需昂贵的仪器、也无需复杂的操作就可完成对沙门氏菌的快速准确检测,因此,适用于专业程度不高的机场、海关、口岸、社区等地的现场快速检测。本申请所提供的可视化试剂盒将为现场检测提供极大便利,可实现对沙门氏菌快速准确的检测。

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【技术保护点】

1.一种检测沙门氏菌的SLAMP引物组,其特征在于,所述SLAMP引物组为引物对SAL-SF/SAL-SR;

2.一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系包括权利要求1所述的SLAMP引物组。

3.根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述SLAMP引物组中,引物CA-SF与引物CA-SR的浓度均为1~2μM。

4.根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系还包括Bst聚合酶、SLAMP反应缓冲液、反应溶剂以及显色剂。

5.根据权利要求4所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述显色剂选自SYBR green I、Eva green、羟基萘酚蓝和铬黑T中的一种。

6.根据权利要求4所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述SLAMP反应缓冲液包括:Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和Triton X-100。

7.根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒反应体系的组成为:2~50mM Tris-HCl pH8.8、2~20mM KCl、2~20mM(NH4)2SO4、2~20mM MgSO4、0.1~0.5%TritonX-100、0.2~1M甜菜碱、1~1.6mM dNTP、5~10U Bst DNA聚合酶、100~150μmol/L显色剂、1~2μM引物SAL-SF以及1~2μM引物SAL-SR;反应溶剂为超纯水。

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【技术特征摘要】

1.一种检测沙门氏菌的slamp引物组,其特征在于,所述slamp引物组为引物对sal-sf/sal-sr;

2.一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系包括权利要求1所述的slamp引物组。

3.根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述slamp引物组中,引物ca-sf与引物ca-sr的浓度均为1~2μm。

4.根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系还包括bst聚合酶、slamp反应缓冲液、反应溶剂以及显色剂。

5.根据权利要求4所述的一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于,所述显色剂选自sybr green i、eva green、羟基...

【专利技术属性】
技术研发人员:郑丁铖毛瑞张艳丽
申请(专利权)人:宁波市第二医院
类型:发明
国别省市:

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