【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及从硫酸多黏菌素中分离硫酸多黏菌素b1、b2、b3、b1-i的方法，还涉及从中分离杂质m和j(也称为化合物m和j)的方法。
技术介绍
0、技术背景
1、多黏菌素b是由多黏类芽孢杆菌(paenibacillus polymyxa)产生的、由多种氨基酸和脂肪酸组成的一种碱性多肽类抗生素。多黏菌素b是一种混合物，包含有多个结构相似的主成分，称为多黏菌素硫酸多黏菌素b1、b2、b3、b1-i，它们的结构如下：
2、
3、
4、多黏菌素b对于革兰氏阴性菌具有强烈的杀菌作用，由于其具有能够在使细菌不产生耐药性的同时而达到快速杀菌的优点，因此已经成为防治耐药性革兰氏阴性细菌菌株的治疗方法之一。在临床上，多黏菌素b通常采用硫酸盐的形式，主要用于治疗多种由革兰氏阴性菌引起的疾病，包括痢疾、脑膜炎等，并且还可以在不产生耐药性的前体下用于预防革兰氏阴性菌的感染。但是，硫酸多黏菌素b同时也具有毒性和神经肌肉阻滞作用，因而在医药领域的应用受到了极大地限制。
5、为了更加清楚、深入地研究硫酸多黏菌素b的作用机理，包括产生毒性等不利的生理效果的原因，以及满足人们对于该药物在品质和数量方面的需求的日益增加，我们亟需提供一种分离提纯硫酸多黏菌素b的方法，以获得高收率、高纯度的硫酸多黏菌素硫酸多黏菌素b1、b2、b3、b1-i，并且适用于制备型色谱分离中，能够高效大量地产出这些硫酸多黏菌素的纯品。然而，由于这4种硫酸多黏菌素(b1、b2、b3、b1-i)的结构相似、含量差异大，分
6、因此，需要提供一种分离纯化硫酸多黏菌素的方法，其可以适用于制备型色谱法，并且获得的产物具有高的收率和高的纯度，以满足日益增长的市场需求和科学研究的要求。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术的目的在于提供了一种分离硫酸多黏菌素b1、b2、b3和/或b1-i的方法，该方法具有上样量大、分离出的硫酸多黏菌素b1、b2、b3、b1-i的纯度高和收率高，并且可以完全分离除去杂质m和j，以及操作简单、成本低等优点，适用于工业规模。
2、在本专利技术的第一方面，提供一种分离硫酸多黏菌素b1、b2、b3和/或b1-i的方法，其包括：
3、使硫酸多黏菌素通过制备型高效液相色谱仪，以获得硫酸多黏菌素b1、b2、b3和/或b1-i，其中所述制备型高效液相色谱仪包括紫外检测器，流动相a为乙腈，流动相b为三氟乙酸水溶液，所述三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的体积百分比为0.01％-1.0％，优选0.02％-0.5％，更优选0.1％，流动相a与b的体积比为5:95至40:60。
4、与现有技术相比，本专利技术的有益技术效果在于：
5、本专利技术通过采用紫外检测器进行检测，具有操作简单、特异性好、系统稳定性较好、检测范围广等优点，相比之下，蒸发光散色检测器则需要设定多个参数值，例如漂移管温度、载气压力和雾化口温度，并且对于溶剂的选择也有严格的要求；
6、本专利技术通过采用乙腈和三氟乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱，仅需要两步分离纯化，就可以完全分离硫酸多黏菌素b1、b2、b3、b1-i，得到高收率和高纯度的硫酸多黏菌素。
7、此外，本专利技术的制备方法还允许较大质量的上样量，适用于工业规模；而且可以改善硫酸多黏菌素与杂质m、j的分离效果，甚至可以分离出纯度大于95％的杂质m，以及纯度大于85％的杂质j，实现了从硫酸多黏菌素中高效分离高纯度的杂质m和j，为进一步研究杂质对于硫酸多黏菌素的药理和毒理研究提供基础。
8、由此，本专利技术的分离方法具有重要的应用价值，适用于上样量大的制备液相色谱，分离得到的硫酸多黏菌素b1、b2、b3、b1-i因其纯度高可以作为标准品，应用于制备和分析检测方面，也有利于它们的药理作用的研究更加精确，不受其他杂质的干扰；同时，也为建立低投入高产出的大规模色谱分离纯化方法提供了实验基础。
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1.一种分离硫酸多黏菌素B1、B2、B3和/或B1-I的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括对所述硫酸多黏菌素进行粗分以获得粗品B1、B2、B3和/或B1-I，所述粗分采用流动相梯度洗脱，梯度设置如下：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备型高效液相色谱仪中的色谱柱的固定相为8-50μm粒径的十八烷基硅烷键合硅胶。
5.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对粗品B1、B2、B3和/或B1-I进行精制以获得硫酸多黏菌素B1、B2、B3和/或B1-I，所述精制包括：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，粗品B1、B2、B3和/或B1-I的精制包括：
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中获得的硫酸多黏菌素B1、B2、B3和/或B1-I不含或者含有小于1重量％的化合物M和/或化合物J。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还分离得到化合物M和
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括分离化合物M的步骤，所述步骤包括：
10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括分离化合物J的步骤，所述步骤包括：
...【技术特征摘要】
1.一种分离硫酸多黏菌素b1、b2、b3和/或b1-i的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括对所述硫酸多黏菌素进行粗分以获得粗品b1、b2、b3和/或b1-i，所述粗分采用流动相梯度洗脱，梯度设置如下：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备型高效液相色谱仪中的色谱柱的固定相为8-50μm粒径的十八烷基硅烷键合硅胶。
5.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对粗品b1、b2、b3和/或b1-i进行精制以获得硫酸多...
【专利技术属性】
技术研发人员：林立东，冯胜昔，林诗琪，姚柳端，曹夏青，袁竞适，黎晓丽，谷容斌，
申请(专利权)人：广州艾奇西医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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