【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，尤其是涉及一种逆分化为真皮乳头样细胞的方法及应用。
技术介绍
1、毛发作为皮肤的附属器官，在控制体温和保护皮肤等方面起着重要作用。疾病和药物治疗都会导致脱发，虽然脱发不会直接威胁人类的生命，但会使患者的心理和生活质量造成一定的困扰。
2、目前对于脱发的治疗目前主要采用药物治疗和自体毛囊移植两种方法。市场上获得治疗脱发的药物虽然具有一定的效果，但是并不能促进新的毛囊的形成，故治标不治本。随着再生医学的发展，基于细胞的毛囊再生提供了一种替代疗法。人真皮乳头细胞是一群特殊的真皮成纤维细胞，起源于毛囊底部。它们可以重新启动与功能性角质形成细胞的上皮-间质相互作用，对于毛囊形态发生、毛发周期的调节和毛囊稳态的维持是必不可少的。因此，人类毛囊再生很大程度上依赖于培养扩增的真皮乳头细胞。
3、然而，传统的真皮乳头细胞体外培养技术面临着巨大的挑战，包括真皮乳头细胞增殖受限以及真皮乳头细胞的毛发诱导潜力在较长时间内逐渐降低。
4、因此，获得大量具有毛发诱导能力的真皮乳头样细胞对于有效的毛囊再生至关重要。
技术实现思路
1、本申请的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种逆分化为真皮乳头样细胞的方法及应用。
2、为实现上述目的，本申请采取的技术方案为：
3、本申请提供了一种逆分化为真皮乳头样细胞的方法，包括以下步骤：
4、提取、扩增及培养人原代包皮成纤维细胞，加入含有作用浓度为1～10μm的selumetini
5、在本申请的技术方案中，本申请通过加入作用浓度为1～10μm的selumetinib诱导，使人原代包皮成纤维细胞逆分化为真皮乳头样细胞，获得的真皮乳头样细胞与原代人头皮毛囊真皮乳头细胞具有高度的生物分子表达相似性，有利于毛囊再生。
6、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述selumetinib的作用浓度为5～10μm。
7、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述selumetinib的作用浓度为10μm。
8、采用上述优选作用浓度的selumetinib，可以更好地使人原代包皮成纤维细胞逆分化为真皮乳头样细胞，有利于毛囊再生，适用于具有脱发症状的人群。
9、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述selumetinib采用二甲基亚砜溶液溶解。
10、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述培养基为含有质量浓度为5～15％ fbs的rpmi 1640培养基。
11、优选地，所述培养基为含有质量浓度为10％ fbs的rpmi 1640培养基。
12、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述诱导的时间为6～8天(优选为8天)，每诱导2天更换一次培养基。
13、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述提取、扩增及培养人原代包皮成纤维细胞的步骤，包括：
14、1)使用无菌磷酸盐缓冲液冲洗包皮组织，然后将包皮组织剪碎置于中性蛋白酶ii溶液中消化，分离出真皮组织；
15、2)使用i型胶原酶对真皮组织进行消化处理，进行过滤，再将获得的细胞悬浮在含有胎牛血清和青霉素/链霉素的dmem培养基中，然后置于37℃，5％co2环境下培养。
16、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述人原代包皮成纤维细胞为废弃人的包皮组织中提取的人包皮成纤维细胞。
17、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述真皮乳头样细胞具有标志物碱性磷酸酶表达以及标志性基因表达。
18、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述标志性基因包括alpl、bmp4、lef1、sox2、thy1、vcan和wif1中的至少一种。
19、采用本申请的方法获得的真皮乳头样细胞具有标志物碱性磷酸酶表达以及标志性基因(alpl、bmp4、lef1、sox2、thy1、vcan和wif1)表达，与原代人头皮毛囊真皮乳头细胞具有高度的生物分子表达相似性，具有毛囊再生的效果。
20、作为本申请所述逆分化为真皮乳头样细胞的方法的优选实施方式，所述真皮乳头样细胞为人毛囊真皮乳头样细胞。
21、采用本申请的方法，人原代包皮成纤维细胞逆分化为人毛囊真皮乳头样细胞，可以实现毛囊再生，适用于具有脱发症状的人群。
22、本申请提供了上述逆分化为真皮乳头样细胞的方法在制备毛囊再生产品中的应用。
23、毛囊再生是指基于细胞移植的体内毛囊再生的微创方法，细胞移植主要涉及干细胞或表皮和真皮成分的混合物移植，将含有表皮干细胞和真皮乳头样细胞的混合物注射到裸鼠体内可以诱导具有正确组织结构的新生毛囊。
24、与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：
25、本申请提供了一种逆分化为真皮乳头样细胞的方法及应用，本申请通过加入作用浓度为1～10μm的selumetinib诱导，使人原代包皮成纤维细胞逆分化为真皮乳头样细胞，获得的真皮乳头样细胞具有标志物碱性磷酸酶表达以及标志性基因(alpl、bmp4、lef1、sox2、thy1、vcan和wif1)表达，与原代人头皮毛囊真皮乳头细胞具有高度的生物分子表达相似性，有利于毛囊再生。
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1.一种逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述Selumetinib的作用浓度为5～10μM。
3.如权利要求2所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述Selumetinib的作用浓度为10μM。
4.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述Selumetinib采用二甲基亚砜溶液溶解。
5.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述培养基为含有质量浓度为5～15％FBS的RPMI 1640培养基。
6.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述诱导的时间为6～8天，每诱导2天更换一次培养基。
7.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述真皮乳头样细胞具有标志物碱性磷酸酶表达以及标志性基因表达。
8.如权利要求7所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述标志性基因包括ALPL、BMP4、LEF1、S
9.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述真皮乳头样细胞为人毛囊真皮乳头样细胞。
10.如权利要求1～9任一项所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法在制备毛囊再生产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述selumetinib的作用浓度为5～10μm。
3.如权利要求2所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述selumetinib的作用浓度为10μm。
4.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述selumetinib采用二甲基亚砜溶液溶解。
5.如权利要求1所述的逆分化为真皮乳头样细胞的方法，其特征在于，所述培养基为含有质量浓度为5～15％fbs的rpmi 1640培养基。
6.如权利要求1所述的逆...
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