【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测技术。
技术介绍
1、新发的人类和动植物疾病是对全球健康和人类文明的主要威胁之一。早期、快速和有效的疾病检测对于最大限度地提高危机管理效率、治疗结果和经济稳定性至关重要。然而，目前人类和动植物病害检测的实践主要局限于集中式实验室。通常，患者或样本被带到医院或检验公司等专业机构进行检测，检测结果需要几天才能返回。快速便捷的核酸检测技术对于提高疫情防控至关重要。此外，在日常的医疗活动领域，核酸检测技术更是起着不可或缺的重大作用。感染性疾病方面，通过核酸检测可以快速确定病原菌种类，及早开始治疗，从而降低感染性疾病相关死亡率及并发症的发生。在慢性病及癌症领域，预后相关的基因检测往往与预后密不可分，决定了后续治疗方案的选择。在动物疫检及植物病害确定过程中，核酸检测同样起着重要作用。开发出快速、便捷、低成本的核酸检测技术亟待解决。
2、成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats，crispr）及其关联的crispr相关蛋白（cas）系统，具有高效的核酸靶向识别能力，已成为新一代的分子诊断技术，尤其在核酸检测领域显示出优越的性能。但是基于crispr的核酸检测技术在多重检测方面存在检测时间长，检测步骤繁琐等不足，一般无法实现对多靶标的单管、单标检测。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案。
3、本专利技术公开了一种基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测方法，其特征在于，所述方法针对目的基因核酸序列，基于crispr设计特异性crrna引物，通过不同浓度的crrna进行编码，实现针对目的基因不同分型的多重基因检测。
4、进一步地，所述方法还包括通过逻辑门运算实现具有逻辑关系的多重基因分型检测。
5、进一步地，所述方法的具体操作步骤包括：
6、步骤1，基于crispr方法，针对目的基因及其基因分型设计特异性crrna引物；
7、步骤2，建立多重基因检测反应体系和条件，进行检测；
8、步骤3，根据荧光扩增曲线计算得到荧光终点值，根据荧光终点值实现对样本基因分型的定性定量检测。
9、更进一步地，所述步骤2中多重基因检测反应体系包括：检测样本、cas12a、reporter、nebuffer r2.1、crrna引物和ddh2o。
10、更进一步地，所述步骤2中多重基因检测反应条件为：37℃下，反应30~45min。
11、本专利技术另一方面公开了一种基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测系统，其特征在于，所述核酸检测系统包括针对待测核酸样品的特异性crrna引物、cas12a、缓冲液和reporter。
12、进一步地，所述系统还包括通过逻辑门运算实现具有逻辑关系的多重基因分型检测。
13、本专利技术第三方面公开了一种基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上述任一项所述的基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测系统。
14、本专利技术第四方面公开了一种上述任一所述的基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测方法或者上述任一项所述的基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测系统或上述所述的基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测试剂盒应用于基因分型检测。
15、进一步地，所述应用通过对crrna的计量编码可以实现单管、单cas酶、单标记的crispr多重基因分型检测。
16、与现有技术比，本专利技术的有益效果如下。
17、本专利技术通过线性浓度和逻辑门运算，对crrna浓度进行计量编码，以实现不同靶标的信号强度区分，从而用于核酸多重检测并用于基因分型。通过对crrna的计量编码可以实现单管、单cas酶、单标记的crispr多重检测。
18、本专利技术不仅可以通过一般的线性crrna编码实现一般的核酸多重检测基因分型，也可以通过逻辑门crrna编码实现具有逻辑关系的核酸多重检测基因分型。
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1.一种基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测方法，其特征在于，所述方法针对目的基因核酸序列，基于CRISPR设计特异性crRNA引物，通过不同浓度的crRNA进行编码，实现针对目的基因不同分型的多重基因检测。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括通过逻辑门运算实现具有逻辑关系的多重基因分型检测。
3.根据权利要求1所述基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测方法，其特征在于，所述方法的具体操作步骤包括：
4.根据权利要求3所述的步骤，其特征在于，所述步骤2中多重基因检测反应体系包括：检测样本、Cas12a、reporter、NEBuffer r2.1、crRNA引物和ddH2O。
5.根据权利要求3所述的步骤，其特征在于，所述步骤2中多重基因检测反应条件为：37℃下，反应30~45min。
6.一种基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测系统，其特征在于，所述核酸检测系统包括针对待测核酸样品的特异性crRNA引物、Cas12a、缓冲液和reporter。
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8.一种基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求6~7任一项所述的基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测系统。
9.一种权利要求1-5任一所述的基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测方法或者权利要求6~7任一项所述的基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测系统或权利要求8所述的基于crRNA计量编码的多重CRISPR核酸检测试剂盒应用于基因分型检测。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用通过对crRNA的计量编码可以实现单管、单Cas酶、单标记的CRISPR多重基因分型检测。
...【技术特征摘要】
1.一种基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测方法，其特征在于，所述方法针对目的基因核酸序列，基于crispr设计特异性crrna引物，通过不同浓度的crrna进行编码，实现针对目的基因不同分型的多重基因检测。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括通过逻辑门运算实现具有逻辑关系的多重基因分型检测。
3.根据权利要求1所述基于crrna计量编码的多重crispr核酸检测方法，其特征在于，所述方法的具体操作步骤包括：
4.根据权利要求3所述的步骤，其特征在于，所述步骤2中多重基因检测反应体系包括：检测样本、cas12a、reporter、nebuffer r2.1、crrna引物和ddh2o。
5.根据权利要求3所述的步骤，其特征在于，所述步骤2中多重基因检测反应条件为：37℃下，反应30~45min。
6.一种基于crrna计量编码的多重crispr核酸检...
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