一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物制造技术

技术编号：44429223 阅读：0 留言：0更新日期：2025-02-28 18:42

本发明专利技术提供一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，涉及生物医药和分子生物学技术领域，包括以下步骤：S1、准备材料；S2、细胞损伤模型与干预试验；S3、细胞活性及氧化应激指标检测。本发明专利技术提供了黄芩素联合阿魏酸在制备改善脑缺血后神经功能障碍的药物中的应用，本发明专利技术实施例证实，黄芩素联合阿魏酸可通过降低脑梗死面积、抗氧化、抑制炎症反应等改善脑缺血后神经功能障碍，试验数据表明，相对于模型组，给药组大鼠大脑白色梗死区减少；棕榈酸处理后，黄芩素联合阿魏酸给药组能促进SH‑SY5Y神经细胞增殖；给予黄芩素联合阿魏酸治疗后，受损的细胞内MDA水平显著降低，SOD和GSH水平显著升高，从而发挥二者抗氧化、抑制炎症、保护神经细胞作用。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药和分子生物学，尤其涉及一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物。

技术介绍

1、缺血性脑卒中是由于局部脑缺血及永久性脑梗死(如dwi检查呈阳性)引发的突发神经功能缺损。缺血性脑卒中主要发病原因为动脉粥样硬化、动脉炎、外伤等引起脑血管病变形成的斑块堵塞血管，也与房颤等多种心血管疾病所产生的栓子进入血液，阻塞脑部血管引发有关。

2、脑缺血期间的中心事件是活性氧(ros)的产生，这会引起对脂质、蛋白质和dna的损害。在缺血后再灌注期间，氧气供应增加导致ros过量产生，在脑卒中患者中能观察到氧化应激导致的神经元细胞的死亡。此外，炎症反应也在脑缺血中起作用。炎症可能发生在具有复制能力的神经胶质细胞中，进而加剧神经退行性病变或破坏神经元-神经胶质细胞的结构和功能连接，导致外周炎症因子的流入，加重神经细胞的损伤。这些证据表明氧化应激和炎症是影响缺血性脑卒中介导的脑损伤的重要因素，并为脑损伤细胞提供了治疗方法的潜在靶点。

3、中药在治疗此类复杂疾病时表现出独特优势，多数中药在不同时间段对脑缺血都表现出了良好的治疗作用。但黄芩素或阿魏酸单独使用效果局限、单一，而对二者配伍使用的研究较少，因此，我们提供一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物。

技术实现思路

1、本专利技术的目的是解决现有技术中存在的缺点。

2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：包括以下步骤：

3、s1、准备材料；

4、s2、细胞损伤模型与干预试验；</p>

5、s3、细胞活性及氧化应激指标检测；

6、s4、炎症蛋白与信号通路分析；

7、s5、动物模型实验与脑梗死评估。

8、通过采用上述技术方案：所述步骤s1准备材料中，将sh-sy5y神经细胞，用于棕榈酸诱导的神经细胞损伤模型、棕榈酸、黄芩素、阿魏酸、cck-8试剂、mda、sod、gsh检测试剂盒准备集齐。

9、通过采用上述技术方案：所述步骤s2细胞损伤模型与干预试验中，根据要求，将sh-sy5y神经细胞接种于96孔板或6孔板中，培养至70％～80％融合度，除对照组外，其他组加入100μl50μm棕榈酸处理2小时，以诱导神经细胞损伤。

10、通过采用上述技术方案：所述步骤s2细胞损伤模型与干预试验中，在棕榈酸处理后，给予不同浓度的黄芩素(5、50和100μm)、阿魏酸(5、50和100μm)以及黄芩素与阿魏酸的组合(5μm黄芩素+5μm阿魏酸，10μm黄芩素+10μm阿魏酸)，持续作用12小时。

11、通过采用上述技术方案：所述步骤s3细胞活性及氧化应激指标检测中，采用cck-8方法，在细胞培养基中加入10μlcck-8试剂，于37℃孵育1小时后，通过450nm的吸光度测量细胞活性，评估黄芩素和阿魏酸对棕榈酸诱导损伤的保护效果。

12、通过采用上述技术方案：所述步骤s3细胞活性及氧化应激指标检测中，使用mda、sod、gsh试剂盒，根据说明书操作，测量每孔的光密度(od值)，计算各组mda、sod和gsh的活性，mda水平表示脂质过氧化，sod和gsh为抗氧化指标，用于评估细胞氧化应激状态。

13、通过采用上述技术方案：所述步骤s4炎症蛋白与信号通路分析中，细胞培养结束后，吸去培养基，用pbs清洗3次后，加入裂解液提取蛋白，4℃、12000r/min离心15分钟后取上清，使用westernblot检测细胞中hif-1α、gpx4、p38的磷酸化水平。

14、通过采用上述技术方案：所述步骤s4炎症蛋白与信号通路分析中，westernblot结果显示，棕榈酸诱导了p38的磷酸化，hif-1α和gpx4表达水平降低；而黄芩素联合阿魏酸治疗可显著恢复hif-1α、gpx4的表达并抑制p38的激活。

15、通过采用上述技术方案：所述步骤s5动物模型实验与脑梗死评估中，雄性sd大鼠术前禁食一夜，使用2％戊巴比妥钠进行腹腔麻醉，采用线栓法阻塞大鼠的颈内动脉1小时后拔除，再灌注血液以恢复供血，术后评估大鼠神经功能评分，筛选造模成功的实验动物。

16、通过采用上述技术方案：所述步骤s5动物模型实验与脑梗死评估中，将大鼠随机分为正常组、模型组和药物干预组(黄芩素50mg/kg+阿魏酸50mg/kg)，每日灌胃给药，连续7天，采用ttc染色法检测脑梗死区域，新鲜脑组织切片置于ttc染液中，37℃避光孵育30分钟后，观察正常组织(红色)和梗死区域(白色)的分布，使用图像分析软件计算梗死面积，结果显示药物干预组的梗死面积显著减少。

17、与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于，

18、本专利技术提供了黄芩素联合阿魏酸在制备改善脑缺血后神经功能障碍的药物中的应用，本专利技术实施例证实，黄芩素联合阿魏酸可通过降低脑梗死面积、抗氧化、抑制炎症反应等改善脑缺血后神经功能障碍，试验数据表明，相对于模型组，给药组大鼠大脑白色梗死区减少；棕榈酸处理后，黄芩素联合阿魏酸给药组能促进sh-sy5y神经细胞增殖；给予黄芩素联合阿魏酸治疗后，受损的细胞内mda水平显著降低，sod和gsh水平显著升高，从而发挥二者抗氧化、抑制炎症、保护神经细胞作用。

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【技术保护点】

1.一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S1准备材料中，将SH-SY5Y神经细胞，用于棕榈酸诱导的神经细胞损伤模型、棕榈酸、黄芩素、阿魏酸、CCK-8试剂、MDA、SOD、GSH检测试剂盒准备集齐。

3.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S2细胞损伤模型与干预试验中，根据要求，将SH-SY5Y神经细胞接种于96孔板或6孔板中，培养至70％～80％融合度，除对照组外，其他组加入100μL50μM棕榈酸处理2小时。

4.根据权利要求3所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S2细胞损伤模型与干预试验中，在棕榈酸处理后，给予不同浓度的黄芩素、阿魏酸以及黄芩素与阿魏酸的组合，持续作用12小时。

5.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S3细胞活性及氧化应激指标检测中，采用CCK-8方法，在细胞培养基中加入10μLCCK-8试剂，于3

6.根据权利要求5所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S3细胞活性及氧化应激指标检测中，使用MDA、SOD、GSH试剂盒，根据说明书操作，测量每孔的光密度，计算各组MDA、SOD和GSH的活性，MDA水平表示脂质过氧化，SOD和GSH为抗氧化指标，评估细胞氧化应激状态。

7.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S4炎症蛋白与信号通路分析中，细胞培养结束后，吸去培养基，用PBS清洗3次后，加入裂解液提取蛋白，4℃、12000r/min离心15分钟后取上清，使用WesternBlot检测细胞中HIF-1α、GPX4、p38的磷酸化水平。

8.根据权利要求7所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S4炎症蛋白与信号通路分析中，WesternBlot结果显示，棕榈酸诱导p38的磷酸化，HIF-1α和GPX4表达水平降低。

9.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S5动物模型实验与脑梗死评估中，雄性SD大鼠术前禁食一夜，使用2％戊巴比妥钠进行腹腔麻醉，采用线栓法阻塞大鼠的颈内动脉1小时后拔除，再灌注血液以恢复供血，术后评估大鼠神经功能评分，筛选造模成功的实验动物。

10.根据权利要求9所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤S5动物模型实验与脑梗死评估中，将大鼠随机分为正常组、模型组和药物干预组，每日灌胃给药，连续7天，采用TTC染色法检测脑梗死区域，新鲜脑组织切片置于TTC染液中，37℃避光孵育30分钟后，观察正常组织和梗死区域的分布，使用图像分析软件计算梗死面积。

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【技术特征摘要】

1.一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤s1准备材料中，将sh-sy5y神经细胞，用于棕榈酸诱导的神经细胞损伤模型、棕榈酸、黄芩素、阿魏酸、cck-8试剂、mda、sod、gsh检测试剂盒准备集齐。

3.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤s2细胞损伤模型与干预试验中，根据要求，将sh-sy5y神经细胞接种于96孔板或6孔板中，培养至70％～80％融合度，除对照组外，其他组加入100μl50μm棕榈酸处理2小时。

4.根据权利要求3所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤s2细胞损伤模型与干预试验中，在棕榈酸处理后，给予不同浓度的黄芩素、阿魏酸以及黄芩素与阿魏酸的组合，持续作用12小时。

5.根据权利要求1所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤s3细胞活性及氧化应激指标检测中，采用cck-8方法，在细胞培养基中加入10μlcck-8试剂，于37℃孵育1小时后，通过450nm的吸光度测量细胞活性，评估黄芩素和阿魏酸对棕榈酸诱导损伤的保护效果。

6.根据权利要求5所述的一种改善脑缺血后神经功能障碍的药物，其特征在于：所述步骤s3细胞活性及氧化应激指标检测中，使用mda、sod、gsh试剂盒，根据说明书操作，测量每孔的光密度，计...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗开涛，毛晴晴，朱高峰，杨喜兵，沈志方，吴兰，丁滨，
申请(专利权)人：嘉兴市中医医院，
类型：发明
国别省市：

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