【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物检测，更具体地，涉及一种基于qtrap质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法。
技术介绍
1、麻醉剂是指能使整个机体或机体局部暂时、可逆性失去知觉及痛觉的药物。随着我国经济持续发展，人民生活水平不断提高，人们对优质、安全、健康水产品的需求提出了更高的要求。为了使水产品保活保鲜，运输和暂养过程中开始广泛使用渔用麻醉剂来降低水产品的代谢强度、抑制应激反应，以延缓损伤，延长其存活时间。
2、当前，我国对水产品使用麻醉剂的关注不够，水产品麻醉剂的限量标准、监管法律方面均存在空白，不法商家为了牟取暴利，在养殖、捕捞到加工流程，就会违禁添加麻醉剂。而当前对水产品中麻醉剂及其代谢物的检测方法研究还处在起步阶段，相关检测方法主要有液相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-串联质谱法。由于水产品基质复杂，蛋白质、脂肪、磷脂等含量较高，且水产品中麻醉剂及其代谢物含量较低，样品前处理要求较高，而当前检测方法中多采用固相萃取法进行样品前处理，步骤繁琐、耗时耗力且影响部分目标物的回收率。因此，重新建立一种水产品中多种麻醉剂的快速、准确、灵敏的检测方法迫在眉睫。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种基于qtrap质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，本研究通过prime hlb柱净化，并结合qtrap质谱灵敏度高、定量定性准确性好的优点，建立了水产品中12种麻醉剂及其代谢物的监测方法。该方法快速、简便、绿色环保、净化效果好，能有
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种基于qtrap质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，包括以下步骤：
4、(a)配制系列基质标准工作溶液：
5、以甲醇为溶剂，配制含间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐、苯佐卡因、氯普鲁卡因、普鲁卡因胺、利多卡因、辛可卡因、布比卡因、丙胺卡因、罗哌卡因这9种麻醉剂浓度均为250ng/ml且含间氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸剂、对乙酰氨基苯甲酸这3种麻醉剂代谢物浓度均为2500ng/ml的混合标准中间工作液；
6、分别移取不同量的混合标准中间工作液，各自加入阴性水产品基质提取液500μl并用10mmol/l甲酸铵溶液定容至1ml，制成系列基质标准工作溶液；
7、(b)样品前处理：
8、取待测样品2.5g，加入由0.1wt％甲酸乙腈溶液与水按80:20的体积比混合的混合溶液10ml，混匀、超声提取、离心；取2ml离心后上清液过prime hlb固相萃取柱，收集流出液，取其中500μl用10mmol/l甲酸铵定容至1ml，得到水产品待测样品溶液；
9、(c)检测：
10、采用mrm-ida-epa模式，通过qtrap质谱法对系列基质标准工作溶液进行测定，获得mrm数据及二级碎片全谱数据，建立水产品中9种麻醉剂及3种麻醉剂代谢物的二级质谱图标准谱库；
11、采用mrm-ida-epa模式，通过qtrap质谱法对水产品待测样品溶液进行测定，通过与二级质谱图标准谱库自动对比进行定性，根据mrm数据峰面积定量，得到水产品待测样品中9种麻醉剂及3种麻醉剂代谢物的含量。
12、进一步的，步骤(a)中所配制各基质标准工作溶液的浓度分别为：9种麻醉剂浓度均为2ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为20ng/ml、9种麻醉剂浓度均为4ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为40ng/ml、9种麻醉剂浓度均为10ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为100ng/ml、9种麻醉剂浓度均为20ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为200ng/ml、9种麻醉剂浓度均为40ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为400ng/ml、9种麻醉剂浓度均为100ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为1000ng/ml。
13、进一步的，步骤(a)中混合标准中间工作液的具体配制方法为：以甲醇为溶剂，先分别配制浓度均为10μg/ml的9种麻醉剂标准储备溶液和浓度均为100μg/ml的3种麻醉剂代谢物标准储备溶液；再吸取9种麻醉剂标准储备溶液和3种麻醉剂代谢物标准储备溶液进行混合，用甲醇定容，制成混合标准中间工作液。
14、进一步的，qtrap质谱法检测系列基质标准工作溶液及水产品待测样品溶液的色谱条件均为：
15、色谱柱：infinitylab poroshell 120aq-c182.1mm×150mm，2.7μm；流动相a：0.1％甲酸水溶液；流动相b：乙腈；流速：0.30ml/min；进样量：1μl；柱温：40℃；梯度洗脱条件：0-3.0min，流动相a由95％递减至85％，流动相b由5％递增至15％；3.0-6.0min，流动相a由85％递减至60％，流动相b由15％递增至40％；6.0-12.0min，流动相a由60％递减至5％，流动相b由40％递增至95％；12.0-14.0min，流动相a保持5％，流动相b保持95％；14.0-14.1min，流动相a由5％递增至95％，流动相b由95％递增至5％；14.1-17.0min，流动相a保持95％，流动相b保持5％。
16、进一步的，qtrap质谱法检测系列基质标准工作溶液及水产品待测样品溶液的质谱条件均为：
17、电喷雾离子源；离子源温度550℃；电喷雾电压5500v；扫描模式：mrm-ida-epi；气帘气压力：30psi；喷雾器压力55psi；辅助加热器压力：55.0psi；碰撞气：medium；9种麻醉剂及3种麻醉剂代谢物的母离子、子离子及质谱参数如下表所示：
18、
19、表中*为定量离子对。
20、本专利技术的有益效果是：
21、本专利技术建立了一种qtrap质谱快速测定水产品中9种麻醉剂及3种麻醉剂代谢物的检测方法：该方法待测样品前处理简单快捷，采用新型通过式固相萃取柱primehlb净化，结合蛋白质沉淀技术，有效去除水产品样品中的大部分基质干扰，降低后期分析过程中的基质效应；通过多反应监测-信息关联采集-增强子离子扫描(mrm-ida-epa)的扫描模式建立水产品鱼肉基质二级质谱图，能够对未知化合物进行准确定性，同时高选择性和高灵敏度的扫描获得化合物的峰面积信息，进而准确地对化合物进行定量分析。本专利技术方法快速、简便、绿色环保、净化效果好，具有良好的准确度和精密度，能有效应对突发性、大批量水产品中麻醉剂及其代谢物的检测需求，提高了检测效率，并降低了检出限，具有实际应用前景。
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1.一种基于QTRAP质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述一种基于QTRAP质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，其特征在于，步骤(a)中所配制各基质标准工作溶液的浓度分别为：9种麻醉剂浓度均为2ng/mL且3种麻醉剂代谢物浓度均为20ng/mL、9种麻醉剂浓度均为4ng/mL且3种麻醉剂代谢物浓度均为40ng/mL、9种麻醉剂浓度均为10ng/mL且3种麻醉剂代谢物浓度均为100ng/mL、9种麻醉剂浓度均为20ng/mL且3种麻醉剂代谢物浓度均为200ng/mL、9种麻醉剂浓度均为40ng/mL且3种麻醉剂代谢物浓度均为400ng/mL、9种麻醉剂浓度均为100ng/mL且3种麻醉剂代谢物浓度均为1000ng/mL。
3.根据权利要求1所述一种基于QTRAP质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，其特征在于，步骤(a)中混合标准中间工作液的具体配制方法为：以甲醇为溶剂，先分别配制浓度均为10μg/mL的9种麻醉剂标准储备溶液和浓度均为100μg/mL的3种麻醉剂代谢物标准储
4.根据权利要求1所述一种基于QTRAP质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，其特征在于，QTRAP质谱法检测系列基质标准工作溶液及水产品待测样品溶液的色谱条件均为：
5.根据权利要求1所述一种基于QTRAP质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，其特征在于，QTRAP质谱法检测系列基质标准工作溶液及水产品待测样品溶液的质谱条件均为：
...【技术特征摘要】
1.一种基于qtrap质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述一种基于qtrap质谱快速测定水产品中多种麻醉剂及其代谢物的方法，其特征在于，步骤(a)中所配制各基质标准工作溶液的浓度分别为：9种麻醉剂浓度均为2ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为20ng/ml、9种麻醉剂浓度均为4ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为40ng/ml、9种麻醉剂浓度均为10ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为100ng/ml、9种麻醉剂浓度均为20ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为200ng/ml、9种麻醉剂浓度均为40ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为400ng/ml、9种麻醉剂浓度均为100ng/ml且3种麻醉剂代谢物浓度均为1000ng/ml。
3.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡建刚，夏炜芳，李志梅，马嘉俊，沈佳琪，李丹，郑云峰，吴坚，何雨欣，
申请(专利权)人：绍兴市食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：
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