【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术涉及用于在线(in-line)、旁线(at-line)、离线(off-line)和/或线上(on-line)监测混浊溶液或悬浮液中的参数的方法，以及其在用于纯化包含蛋白质和其它组分的溶液的方法中的应用。在先申请的交叉引用本申请要求澳大利亚临时申请2022901797和2022903894的优先权，其全部内容各自通过引用并入本文。
技术介绍
0、专利技术背景
1、对纯化的蛋白质如特异性抗体的需求已相当大地增加。这样的纯化的蛋白质可以用于治疗和/或诊断目的。
2、人血浆已在工业上使用了数十年，用于制备广泛建立和接受的血浆蛋白产品，如人白蛋白(hsa)、免疫球蛋白(igg)、凝血因子浓缩物(凝血因子viii、凝血因子ix、凝血酶原复合物等)和抑制物(抗凝血酶、c1抑制物等)。在这样的血浆来源的药物的开发过程中，已经建立了血浆分级分离方法，导致在某些蛋白质级分中富集的中间产物，所述中间产物然后充当一种或多种血浆蛋白产品的起始组合物。通常的方法综述在例如molecularbiology of human proteins(schultze h.e.,heremans j.f.；第i卷:nature andmetabolism of extracellular proteins 1966,elsevier publishing company；第236-317页)中。这些类型的分离技术允许从同一血浆供体池制备几种治疗性血浆蛋白产品。这与从一个供体池仅制备一种血浆蛋白产品相比是经济上有利的，并且因
3、该类分级分离方法的一个实例是血浆的冷乙醇分级分离，其是由e.jcohn和他的团队在第二次世界大战期间首创的，主要用于白蛋白的纯化(cohn ej,等.1946,j.am.chem.soc.62:459-475)。cohn分级分离方法涉及将乙醇浓度从0％分段增加至40％，同时将ph从中性(ph 7)降低至约4.8，导致白蛋白沉淀。尽管cohn分级分离在过去大约70年中已发展起来，但是大多数商业血浆分级分离方法都是基于原始方法或其变体(例如kistler/nitschmann)，利用ph、离子强度、溶剂极性和醇浓度的差异来将血浆分离为一系列主要的沉淀蛋白级分(如cohn中的级分i至v)。
4、已经开发了cohn分级分离方法的变体，目的是提高多价igg回收率。例如oncley和同事使用cohn级分ii+iii作为起始材料，用与cohn描述的那些不同的冷乙醇、ph、温度和蛋白质浓度的组合，来制备活性免疫球蛋白血清级分(oncley等,(1949)j.am.chem.soc.71,541-550)。目前，oncley方法是用于制备多价igg的经典方法。然而，已知大约5％的γ-球蛋白(富集抗体的部分)与级分i共沉淀，并且通过级分ii+iii步骤血浆中存在的总γ-球蛋白的约15％损失(参见表iii，cohn ej等，1946,j.am.chem.soc.62:459-475)。kistler/nitschmann方法旨在通过减少一些沉淀步骤(沉淀物b vs级分iii)的乙醇含量来提高igg回收率。然而，增加的收率是以纯度为代价的(kistler&nitschmann,(1962)vox sang.7,414-424)。
5、最初，源自这些分级分离方法的免疫球蛋白g(igg)制品成功用于各种感染性疾病的预防和治疗。然而，由于乙醇分级分离是相对粗糙的方法，因此，igg产品含有杂质和聚集体，达到了所述igg产品只能肌肉内施用的程度。从那时之后，纯化方法的其他改进产生适合于静脉内(称作ivig)和皮下(称作scig)施用的igg制品。
6、据估计2010年全世界处理大约3000万升血浆，提供一系列治疗性产品，包括约500吨的白蛋白和100吨的ivig。ivig市场占整个血浆分级分离市场的约40-50％(p.robert,worldwide supply and demand of plasma and plasma derived medicines(2011)j.blood and cancer,3,111-120)。因此，随着对ivig的需求保持强劲(以及对scig的需求增加)，仍然需要提高来自血浆和相关级分的免疫球蛋白回收率。优选地，这必须以确保不会不利地影响其他血浆来源的治疗性蛋白质的回收率的方式来实现。
7、从商业角度来看，初始分级分离过程对于与治疗性蛋白质、特别是血浆来源的蛋白质的制备相关的总制备时间和成本至关重要，因为随后的纯化步骤将取决于这些初始级分内的感兴趣的一种或多种蛋白质的收率和纯度。虽然为血浆来源的蛋白质已开发了冷乙醇分级分离方法的几种变体，以在较低操作成本下提高蛋白质收率，但是较高的蛋白质收率通常与较低的纯度相关。
8、需要用于在血浆处理期间确定复杂溶液中各种分析物的浓度的新的和/或改进的方法，以提高下游效率、减少废物和/或提高最终产物收率。由于血浆来源的产品溶液和悬浮液的异质性，关键化学组分(如蛋白质)的定量是复杂的，并且迄今为止，仅通过使用需要取样工作和通常几天的分析前置时间的离线分析方法来实现。因此，需要新的分析方法来确定混浊的、特别是高度混浊的溶液或悬浮液中分析物的浓度。
9、本说明书中提及任何现有技术并不是承认或暗示该现有技术形成任何司法管辖区中的公知常识的一部分，或者该现有技术可以合理地预期被本领域技术人员理解、认为是相关的和/或与其他件现有技术组合。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、在一个方面，本专利技术提供了用于确定从处理血液来源的血浆获得的样品中分析物浓度的方法，所述方法包括：
2、-将近红外光谱中的光源应用于从处理血液来源的血浆获得的测
3、试样品；
4、-测量测试样品在近红外波长范围内的反射率(reflectance)、透射率(transmission)或透反射率(transflectance)，从而产生测试波长光谱，
5、-将测试波长光谱与从具有已知浓度的分析物的参考样品获得的参考波长光谱进行比较，以确定样品中分析物的浓度。
6、通常，nir光谱含有数百个变量，并且因此优选使用某种形式的多变量数据分析方法来分析来自测量的原始数据。这样的多变量数据分析方法是本领域熟知的，并且包括偏最小二乘回归(pls)；pls判别分析(pls-da)；普通最小二乘(ols)回归；mlr(多元线性回归)；opls(正交-pls)；svm(支持向量机)；gld(一般判别分析)；glmc(广义线性模型)；glz(广义线性和非线性模型)；lda(线性判别分析)；分类树；聚类分析；神经网络；和皮尔逊相关。
7、在一个方面，本专利技术提供了用于确定从处理血液来源的血浆获得的样品中分析物浓度的方法，所述方法包括：
8、-将近红外光谱中的光源应用于从处理血液来源的血浆获得的测
【技术保护点】
1.一种用于确定从处理血液来源的血浆获得的样品中分析物浓度的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中对所述测试波长光谱进行多变量数据分析。
3.一种用于确定从处理血液来源的血浆获得的样品中分析物浓度的方法，所述方法包括：
4.一种用于生成模型以确定从血浆处理获得的样品中分析物的浓度的方法，所述方法包括：
5.权利要求2或4中任一项所述的方法，其中所述多变量分析选自偏最小二乘回归(PLS)；PLS判别分析(PLS-DA)；普通最小二乘(OLS)回归；MLR(多元线性回归)；OPLS(正交-PLS)；SVM(支持向量机)；GLD(一般判别分析)；GLMC(广义线性模型)；GLZ(广义线性和非线性模型)；LDA(线性判别分析)；分类树；聚类分析；神经网络；和皮尔逊相关。
6.权利要求3或4所述的方法，其中，所述模型是使用具有已知浓度的所述分析物的样品的经处理的波长光谱的偏最小二乘(PLS)回归生成的模型。
7.权利要求4至6中任一项所述的方法，其中使用以下统计参数判断所述生成的模型：
8.权
9.权利要求8所述的方法，其中所述光谱预处理为一阶导数、矢量归一化或一阶导数、矢量归一化两者的组合。
10.前述权利要求中任一项所述的方法，其中，测量的模式是透反射。
11.前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用适于发射具有近红外范围内的波长的光的探针将所述近红外范围内的光源应用于所述训练样品和/或所述测试样品。
12.权利要求11所述的方法，其中所述探针被配置用于包含在工业蛋白混合、过滤或纯化装置中，用于在线测量所述训练样品在近红外波长的范围内的反射率、透射率或透反射率。
13.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述样品的混合期间将所述近红外范围内的光源应用于所述训练样品和/或所述测试样品。
14.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述光源在所述一种或多种样品的混合期间以与流体流的方向平行的角度或在所述一种或多种样品的混合期间以与流体流的方向成约45°的角度应用于所述一种或多种样品。
15.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分析物为总蛋白质或醇。
16.权利要求15所述的方法，其中所述分析物为总蛋白质。
17.权利要求15所述的方法，其中所述醇为乙醇。
18.权利要求4至17中任一项所述的方法，其中所述训练样品是从血液来源的血浆产品的常规制备获得的。
19.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分析物为蛋白质，并且使用Dumas测定来确定参考或训练样品中蛋白质的浓度。
20.权利要求4至19中任一项所述的方法，其中所述训练样品包括用于测试样品确定的浓度范围内的分析物的浓度。
21.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含分析物的样品是从处理从人血液获得的血液来源的血浆获得的样品。
22.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述样品是从处理血液来源的血浆获得的或衍生的，所述血浆包括新鲜血浆、贫冷血浆或富冷血浆。
23.权利要求22所述的方法，其中所述血浆是从许多捐献者和/或受试者获得的，并且汇集。
24.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述样品是从超免疫血浆获得的或衍生的。
25.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含分析物的样品是从血液来源的血浆获得的沉淀物或糊状物的再悬浮物。
26.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含分析物的样品是沉淀物或糊状物的再悬浮物，或是选自以下的级分：Cohn级分I(Fr I)、Cohn级分II+III(Fr II+III)、Cohn级分I+II+III(Fr I+II+III)、Cohn级分II(Fr II)、Cohn级分III(Fr III)、Cohn级分IV(Fr IV)、Cohn级分V(Fr V)、Kistler/Nitschmann沉淀物A、Kistler/Nitschmann沉淀物B、Kistler/Nitschmann沉淀物C。
27.权利要求27所述的方法，其中所述包含分析物的样品是沉淀物或糊状物的再悬浮物，或是选自以下的级分：Cohn级分II+III(Fr II+III)、Cohn级分I+II+III(Fr I+II+III)、或Kistler/Nitschmann沉淀物A。
28.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含分析物的样品是...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于确定从处理血液来源的血浆获得的样品中分析物浓度的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中对所述测试波长光谱进行多变量数据分析。
3.一种用于确定从处理血液来源的血浆获得的样品中分析物浓度的方法，所述方法包括：
4.一种用于生成模型以确定从血浆处理获得的样品中分析物的浓度的方法，所述方法包括：
5.权利要求2或4中任一项所述的方法，其中所述多变量分析选自偏最小二乘回归(pls)；pls判别分析(pls-da)；普通最小二乘(ols)回归；mlr(多元线性回归)；opls(正交-pls)；svm(支持向量机)；gld(一般判别分析)；glmc(广义线性模型)；glz(广义线性和非线性模型)；lda(线性判别分析)；分类树；聚类分析；神经网络；和皮尔逊相关。
6.权利要求3或4所述的方法，其中，所述模型是使用具有已知浓度的所述分析物的样品的经处理的波长光谱的偏最小二乘(pls)回归生成的模型。
7.权利要求4至6中任一项所述的方法，其中使用以下统计参数判断所述生成的模型：
8.权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述方法包括对所述波长光谱应用至少一种光谱预处理。
9.权利要求8所述的方法，其中所述光谱预处理为一阶导数、矢量归一化或一阶导数、矢量归一化两者的组合。
10.前述权利要求中任一项所述的方法，其中，测量的模式是透反射。
11.前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用适于发射具有近红外范围内的波长的光的探针将所述近红外范围内的光源应用于所述训练样品和/或所述测试样品。
12.权利要求11所述的方法，其中所述探针被配置用于包含在工业蛋白混合、过滤或纯化装置中，用于在线测量所述训练样品在近红外波长的范围内的反射率、透射率或透反射率。
13.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述样品的混合期间将所述近红外范围内的光源应用于所述训练样品和/或所述测试样品。
14.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述光源在所述一种或多种样品的混合期间以与流体流的方向平行的角度或在所述一种或多种样品的混合期间以与流体流的方向成约45°的角度应用于所述一种或多种样品。
15.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分析物为总蛋白质或醇。
16.权利要求15所述的方法，其中所述分析物为总蛋白质。
17.权利要求15所述的方法，其中所述醇为乙醇。
18.权利要求4至17中任一项所述的方法，其中所述训练样品是从血液来源的血浆产品的常规制备获得的。
19.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分析物为蛋白质，并且使用dumas测定来确定参考或训练样品中蛋白质的浓度。
20.权利要求4至19中任一项所述的方法，其中所述训练样品包括用于测试样品确定的浓度范围内的分析物的浓度。
21.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含分析物的样品是从处理从人血液获得的血液来源的血浆获得的样品。
22.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述样品是从处理血液来源的血浆获得的或衍生的，所述血浆包括新鲜血浆、贫冷血浆或富冷血浆。
23.权利要求22所述的方法，其中所述血浆是从许多捐献者和/或受试者获得的，并且汇集。
24.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述样品是从超免疫血浆获得的或衍生的。
25.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含分析物的样品是从血液来源的血浆获得的沉淀物或糊状物的再悬浮物。
26.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含分析物的样品是沉淀物或糊状物的再悬浮物，或是选自以下的级分：cohn级分i(fr i)、cohn级分ii+iii(fr ii+iii)、cohn级分i+ii+iii(fr i+ii+iii)、cohn级分ii(fr ii)、cohn级分iii(fr iii)、cohn级分iv(fr ...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·比利，T·赫克，
申请(专利权)人：瑞士杰特贝林生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。