【技术实现步骤摘要】
本申请涉及肿瘤防治领域。具体而言，涉及一种增强免疫治疗t细胞抗肿瘤效能的方法。
技术介绍
1、免疫细胞疗法是一种将免疫细胞(主要为t细胞)注入患者以治疗癌症的免疫疗法，主要类型包括嵌合抗原受体t细胞(chimeric antigen receptors-t cell，car-t)疗法、t细胞受体工程化t细胞(tcr-engineered t cell，tcr-t)疗法、肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，til)疗法和嵌合抗原受体nk细胞(car-nk)疗法等。
2、car-t细胞是指将患者t细胞在体外激活并经嵌合抗原受体(car)基因修饰、扩增后回输到患者体内，通过t细胞表达的特异性受体，靶向性识别肿瘤细胞，并显示较强的杀伤活性。目前国内外已有多款car-t细胞疗法上市，用于治疗白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等血液瘤。
3、tcr-t疗法即是通过钓取针对肿瘤细胞的特异性tcr，应用基因工程技术体外改造t细胞，回输体内从而达到治疗肿瘤的目的，其制备过程类似于car-t疗法，其中最大的区别在于car-t疗法所识别的靶抗原均为细胞表面蛋白，而tcr-t疗法能识别组织相容性复合物(mhc)分子呈现的细胞内的抗原片段，因此tcr-t疗法具有更广泛的靶点。
4、目前，包括car-t、tcr-t等在内的多种疗法尽管表现出优越的治疗前景，但用于接受改造的免疫细胞多为终末分化的t细胞，易发生耗竭、失能和衰老等改变，在体内难以长期存活，致使制备的免疫细胞多处于终末耗竭状态，极大
5、maf bzip转录因子g(mafg)蛋白隶属于maf家族的小maf蛋白，是一类含有碱性结构域和碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper，b-zip)的转录因子，其在胚胎细胞和干性细胞上表达丰富。
技术实现思路
1、为了增强现有t细胞治疗产品肿瘤杀伤、浸润的效能，特提出本申请。
2、本实验室前期实验结果表明mafg在干性记忆t细胞(stem-like memory t cell，tscm)上高表达，且作为转录因子启动干性相关基因tcf7、sox2和nanog的表达。与其他已知的记忆性细胞相比，高表达mafg的tscm细胞具有更高的增殖能力，能在体内长期维持，在抗原的刺激下能迅速产生大量细胞因子。鉴于高表达mafg的免疫细胞具有显著提高的自我增殖能力和体内存活能力，增强并提升免疫细胞中mafg蛋白表达比例将有望弥补目前car-t细胞疗法和tcr-t疗法的缺陷。
3、本申请通过分别在制备car-t(con-car t)细胞、tcr-t(con-tcr t)细胞的对应质粒上插入mafg基因，并通过慢病毒转导方式感染t细胞，分别制备mafg-car t细胞和mafg-tcr t细胞。过表达mafg的免疫治疗t细胞，增殖能力更强，在体内外均表现出更强的持久性和杀伤能力，且肿瘤浸润的数量更多，存活时间更长。
4、在第一方面，本申请涉及一种增强免疫治疗t细胞抗肿瘤效能的方法，所述方法包括以下步骤：
5、将mafg基因导入所述免疫治疗t细胞以表达mafg蛋白；
6、优选地，所述mafg蛋白具有如seq id no：2所示的氨基酸序列：
7、mttpnkgnkalkvkrepgengtsltdeelvtmsvrelnqhlrgls
8、keeivqlkqrrrtlknrgyaascrvkrvtqkeelekqkaelqqev
9、eklasenasmkleldalrskyealqtfartvarspvapargplaaglgplvpgkvaatsvitivksktdars(seq id no：2)。
10、本领域技术人员可通过常规步骤将基因导入细胞，包括但不限于通过慢病毒方法、电穿孔方法、脂质体转染方法等。
11、在具体的实施方案中，本文提及的免疫治疗t细胞是指注入患者用于治疗癌症的免疫疗法中使用的t细胞，包括但不限于car-t细胞和tcr-t细胞。
12、具体地，本申请涉及一种增强免疫治疗t细胞抗肿瘤效能的方法，所述方法包括以下步骤：
13、i)合成构建体，所述构建体包含mafg基因和嵌合抗原受体(car)基因或工程化的t细胞受体(tcr)基因，
14、优选地，所述mafg基因具有如seq id no：1所示的核苷酸序列：
15、atgacgacccccaataaaggaaacaaggccttgaaggtgaagc
16、gggagccgggtgagaatggcaccagcctgacggatgaggagct
17、ggtgaccatgtcggtgcgggagctgaaccagcacctgcggggc
18、ctgtccaaggaggagatcgtccagctgaagcagcgccggcgca
19、cgctcaagaaccgcggctacgctgccagctgccgcgtgaagcgg
20、gtgacgcagaaggaggagctggagaagcagaaggcggagctgc
21、agcaggaggtggagaagctggcctcagagaacgccagcatgaa
22、gctggagctcgacgcgctgcgctccaagtacgaggcgctgcaga
23、ccttcgcccggacggtggcccgcagccccgtggcgccagcccgg
24、ggcccccttgccgccggcctggggcccctcgtcccaggcaaggt
25、ggccgccaccagcgtcatcacaatagtaaagtccaagacggatgcccgatcgtag(seq id no：1)；和
26、ii)将步骤i)合成的构建体导入分离的t细胞中；
27、优选地，所述分离的t细胞源自哺乳动物外周血或肿瘤，
28、更优选地，所述分离的t细胞源自人外周血或肿瘤。
29、如本文所用，分离的t细胞源自哺乳动物外周血或肿瘤，并不意味着本申请的方法中包括从哺乳动物获取外周血或肿瘤的步骤。事实上，根据本申请的方法中使用的分离的t细胞可以获自分离培养的t细胞，或可以通过商购获得。
30、在具体的实施方案中，可以通过慢病毒、电穿孔或脂质体转染将步骤i)合成的构建体导入分离的t细胞中。
31、在另一方面，本申请涉及一种免疫治疗t细胞，其包含：
32、a)mafg蛋白，优选地，所述mafg蛋白具有如s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种增强免疫治疗T细胞抗肿瘤效能的方法，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中：
3.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其中：
5.一种免疫治疗T细胞，其包含：
6.根据权利要求5所述的免疫治疗T细胞，其中与不包含MAFG蛋白相比，所述免疫治疗T细胞具有以下特征中的一种或多种：
7.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-4中任一项所述的方法获得的免疫治疗T细胞、或根据权利要求5或6所述的免疫治疗T细胞，以及一种或多种药学上可接受的载体。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的方法获得的免疫治疗T细胞、或根据权利要求5或6所述的免疫治疗T细胞、或根据权利要求7所述的药物组合物在制备用于治疗受试者的肿瘤的药物中的用途，
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述受试者是人或非人哺乳动物，优选所述受试者是人。
10.MAFG基因或其编码蛋白在制备免疫治疗T细胞中的用途，其中：
【技术特征摘要】
1.一种增强免疫治疗t细胞抗肿瘤效能的方法，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中：
3.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其中：
5.一种免疫治疗t细胞，其包含：
6.根据权利要求5所述的免疫治疗t细胞，其中与不包含mafg蛋白相比，所述免疫治疗t细胞具有以下特征中的一种或多种：
7.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-4中任一项所...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄波，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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