【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及临床诊断领域，特别是抗血小板因子4(抗-pf4)抗体的测定，其允许例如诊断非肝素相关的血栓性血小板减少症，例如疫苗诱发的血栓性血小板减少症(vitt)。
技术介绍
1、针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)的疫苗接种是抗击当前covid-19大流行的最重要的对策。欧洲药品管理局批准的首批疫苗之一是重组黑猩猩腺病毒[chadox1-s]载体，该载体编码sars-cov-2的刺突糖蛋白，covid-19疫苗阿斯利康[也称为chadox1 ncov-19、azd1222、vaxzevria]，其是基于腺病毒载体的疫苗。
2、不幸的是，几个国家已报道健康个体在chadox1 ncov-19疫苗接种后出现脑静脉窦血栓形成(cvst)病例和内脏静脉血栓形成病例，组合有中度至重度血小板减少症。这种新型疾病“疫苗诱发的免疫性血栓性血小板减少症(vitt)”与针对阳离子血小板趋化因子，血小板因子4(pf4；cxcl4)的高滴度免疫球蛋白g类抗体相关。这些抗体经由血小板fcγiia受体有效激活血小板，其中pf4大大增强血小板激活。另一种基于腺病毒的疫苗，covid-19疫苗janssen(johnson&&jonson)似乎也与抗pf4抗体的形成相关。
3、pf4调理病原体的多聚阴离子表面，这促进抗pf4抗体的结合。这可能是一种古老的进化免疫防御机制，因为几乎在所有个体体内，甚至包括在新生儿脐带血中都可以发现产生抗pf4的b细胞。然而，强烈的抗pf4抗体反应当被误引导时成为血栓
4、除vitt之外，还观察到了与肝素无关的其他血栓事件(favaloro et al,2022“antibodies against platelet factor 4and their associated pathologies:fromhit/hitt to spontaneous hit-like syndrome,to covid-19,to vitt/tts”doi:10.3390/antib1101000)。新的血栓事件还包括动脉系统中的血管闭塞。导致所述病况的因素在很大程度上是未知的，但尽管如此，它们的诊断难度与vitt相同。因此，这些病况在目前的临床方案中诊断不足，所述方案主要包括使用快速hit测定或商业抗pf4 elisa测定和肝素依赖性抗体的功能测定。
5、目前，几种商业免疫测定法可用于诊断hit，为经典的igg特异性和多特异性elisa测定法(例如，asserachrom hpia igg、lifecodes pf4 igg、hyphen biomed zymutest hiaigg、aeskulisa hit ii)以及快速测定法(例如，acustar hit-lgg(pf4-h)、hit-ab(pf4-h)、diamed pagia凝胶、stic expert)两者。所有测定法均使用与肝素或肝素替代物(如聚乙烯硫酸酯)复合的pf4蛋白来检测疑似患有hit的患者中由肝素引发的抗pf4抗体(抗pf4/h抗体)。然而，所述可用测定法不适用于诊断vitt。先前的研究表明，快速测定对vitt诊断的灵敏度非常差，这使得它们不适合用于诊断这种特殊病况。另一方面，现有技术的抗pf4/肝素或抗pf4/pvs elisa测定只检测出一些vitt病例，并且似乎无单一elisa方法检测出所有vitt病例(platton et al,“evaluation of laboratoryassays for anti-platelet factor 4antibodies after chadox1 ncov-19vaccination”.doi:10.1111/jth.15362)。最成问题的是，即使是那些识别某些vitt样抗体的测定也识别肝素依赖性hit样抗体，使得所述测定无法区分两种抗体特异性。这促使专家推荐，当elisa结果为阴性时，则在临床上强烈怀疑vitt的情况下应考虑进行第二次elisa或血小板激活测定，一种使诊断显著复杂化的常规方法。如果功能测试是用肝素增强而不是pf4增强进行的，那么甚至此步骤导致假阴性结果。然而，在诊断实验室中更广泛可用的elisa测定的长周转时间为至少6到8小时，并且只有少数实验室能够进行血小板激活测定。
6、另一个问题是，可用的免疫测定法设计为测量抗pf4/h抗体的存在，因此，它们对患有vitt的患者内发现的抗pf4抗体不具有特异性。因此，这些免疫测定法无法区分hit和vitt患者(若它们完全检测到vitt)。因此，在接受肝素的患者中，无法区分血栓事件已经由肝素还是由另一种原因(例如疫苗接种或其他未知原因)触发的。相对于hit对vitt的差异诊断的此种缺乏使得不可能辨别哪些患者可以进一步施用肝素以及哪些患者必须中断施用肝素，通常用不同的、远更昂贵的抗血栓药物代替。
7、此外，越来越多的患者被认为患有不依赖于肝素或疫苗接种的存在的血栓性疾病。在这些患者的一些中，鉴定出可变比例的肝素依赖性和肝素非依赖性抗pf4抗体。目前，这些抗体可以通过功能性测定来区分。需要新的并且广泛适用的可以区分这些各种抗pf4疾病的测定法，以系统性地评估这些不同患者群体的患病率。这在临床上是相关的，因为抗pf4肝素非依赖性抗体需要辅助措施(除抗凝外)来降低触发大量高凝状态(massivehypercoagulability)的fcγriia依赖性细胞激活。
8、因此，迫切需要提供灵敏且特异的测定法来检测抗pf4肝素非依赖性抗体，以诊断vitt和其他不是由肝素或疫苗接种诱发的血栓事件，该测定法经济高效、快速且易于在临床实践中实施。
技术实现思路
1、本专利技术人开发了一种用于检测肝素非依赖性抗pf4抗体(以下也简称为“抗pf4抗体”)的新方法，该方法克服了上述缺点。本专利技术的方法特异性地检测抗pf4抗体，但不检测肝素依赖性hit样抗体。因此，该新方法允许诊断不由肝素诱发的血栓事件，例如vitt或其他类型。该新方法基于一种试剂，该试剂由能够结合抗pf4抗体的分子和固体支持物构成，所述抗pf4抗体来自正患有或曾经患有不由肝素诱发的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于检测抗PF4抗体的体外方法，所述方法包括：
2.用于诊断不由肝素诱发的血栓事件的体外方法，所述方法包括：
3.根据前述权利要求所述的体外方法，其中所述不由肝素诱发的血栓事件选自VITT和不由疫苗接种诱发的血栓事件。
4.根据前述权利要求所述的体外方法，其用于不由肝素诱发的血栓性事件和肝素诱发的血栓性血小板减少症(HIT)的差异诊断。
5.根据前述权利要求所述的体外方法，其进一步包括确定所述样品中抗PF4肝素依赖性抗体(抗PF4/H)的缺乏。
6.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其进一步包括使从(i)获得的混合物与能够结合所述抗PF4抗体的示踪剂接触。
7.根据前述权利要求所述的体外方法，其中所述示踪剂包括标记的抗人IgG抗体。
8.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其中所述试剂基本上由以下组成：(a)结合分子，所述结合分子选自由PF4、能结合抗PF4抗体的PF4片段、以及抗血小板因子4抗体(抗PF4抗体)的抗独特型抗体组成的组；和(b)固体支持物，其中所述结合分子(a)与所述
9.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其中所述结合分子是PF4，特别是人PF4。
10.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其中所述PF4经由酰胺键与所述固体支持物结合。
11.根据前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述试剂具有以下结构：
12.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其中所述固体支持物是颗粒，特别是微粒或纳米颗粒。
13.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其中所述固体支持物包括磁性金属或基本上由磁性金属组成。
14.用于向疑似患有血栓事件的受试者推荐或启动医疗方案的方法，所述方法包括
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述医疗方案包括降级触发大量高凝状态的FcγRIIa依赖性细胞激活的措施，特别地，所述措施包括施用静脉内免疫球蛋白(IVIG)。
16.根据权利要求14-15中任一项所述的方法，其进一步包括检测所述患者的样品中的抗PF4/H抗体，其中：
17.试剂盒或药盒，其包括：
18.根据前述权利要求所述的试剂盒或药盒，其中所述试剂的固体支持物是颗粒。
19.如权利要求1-6-13中任一项中所定义的试剂或如权利要求17-18中任一项中所定义的试剂盒或药盒用于检测抗PF4抗体，或用于诊断不由肝素诱发的血栓事件，或用于为疑似患有血栓事件的受试者推荐或启动医疗方案的用途。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.用于检测抗pf4抗体的体外方法，所述方法包括：
2.用于诊断不由肝素诱发的血栓事件的体外方法，所述方法包括：
3.根据前述权利要求所述的体外方法，其中所述不由肝素诱发的血栓事件选自vitt和不由疫苗接种诱发的血栓事件。
4.根据前述权利要求所述的体外方法，其用于不由肝素诱发的血栓性事件和肝素诱发的血栓性血小板减少症(hit)的差异诊断。
5.根据前述权利要求所述的体外方法，其进一步包括确定所述样品中抗pf4肝素依赖性抗体(抗pf4/h)的缺乏。
6.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其进一步包括使从(i)获得的混合物与能够结合所述抗pf4抗体的示踪剂接触。
7.根据前述权利要求所述的体外方法，其中所述示踪剂包括标记的抗人igg抗体。
8.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其中所述试剂基本上由以下组成：(a)结合分子，所述结合分子选自由pf4、能结合抗pf4抗体的pf4片段、以及抗血小板因子4抗体(抗pf4抗体)的抗独特型抗体组成的组；和(b)固体支持物，其中所述结合分子(a)与所述固体支持物(b)的表面共价结合，并且其中所述结合分子(a)不包括肝素或肝素替代物。
9.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其中所述结合分子是pf4，特别是人...
【专利技术属性】
技术研发人员：O·埃斯特班托塔加达，A·格林纳彻，R·勒瓦多特，P·杜博茨，K·奥里奇，M·布洛托阿维里斯，
申请(专利权)人：比奥基特研发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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