【技术实现步骤摘要】
本申请属于体外免疫诊断领域，具体涉及一种单通道检测血清κ-flc和λ-flc比值的试剂盒及方法。
技术介绍
1、多发性骨髓瘤是一种克隆性浆细胞异常增殖的恶性疾病，并伴有单克隆免疫球蛋白增多现象，是血液系统第二大常见恶性肿瘤。其临床表现为血钙增高、肾功能损伤、贫血、溶骨性损伤等。
2、免疫球蛋白由两条轻链和两条重链经过二硫键连接而成，其中轻链分为kappa和lambda两个型别，人体内两者正常比例为2:1。轻链的分子量小于重链，因此，在人体中轻链合成速度略快于重链。轻链除了与重链结合组成免疫球蛋白以外，会有部分的轻链未能与重链结合，处于游离状态，即游离轻链。游离轻链可迅速被肾清除和代谢，游离轻链的浓度取决于浆细胞的合成分泌与肾脏清除两者间的动态平衡，在正常人的游离轻链含量较少。但在多发性骨髓瘤体内游离轻链水平可升高至正常人的数30-40倍，超过了肾脏的代谢能力，则游离轻链的κ/λ比值异常。临床数据显示，96％的多发性骨髓瘤患者都有血清κ-flc或λ-flc异常，或者flcκ/λ比率异常；正常flcκ/λ的比值在0.26～1.65之间，若flcκ/λ＜0.26或flcκ/λ＞1.65，则提示患者体内产生过量的游离轻链。
3、多发性骨髓瘤多发于中老年人，而随着老年化推进，未来血清游离轻链(flc)检测将成为血液检测常规项目。血清游离轻链(flc)是国内外推荐的临床诊断和诊疗多发性骨髓瘤的重要指标，具有较高的敏感性和特异性，并且已经纳入国家多发性骨髓瘤诊疗指南。
4、现有技术中采用两步法-胶乳增强免疫
技术实现思路
1、针对现有技术中的两步法检测κ-flc和λ-flc比值成本高、通量低的不足，本专利技术提供一种单通道检测κ-flc和λ-flc比值的试剂盒。
2、本专利技术选用可以同时识别λ-flc和κ-flc两种抗原的多克隆抗体和仅识别其中一种抗原的单抗，实现一步法检测多发性骨髓瘤技术，来达到提升通量和降低成本。
3、第一方面，本专利技术提供一种单通道检测κ-flc和λ-flc比值的试剂盒，试剂盒中包括试剂1，试剂2，和校准品试剂；其中，
4、试剂1中包含，包被了λ-flc和κ-flc多克隆抗体的乳胶微球和第一缓冲液；
5、试剂2中包含，flc单克隆抗体、第二缓冲液和0.1～1wt％的第二表面活性剂；
6、校准品试剂中包含，第三缓冲液和κ-flc抗原与λ-flc抗原比值不同的校准品。
7、优选地，试剂1中，所述λ-flc和κ-flc多克隆抗体为鼠抗人λ-flc和κ-flc多克隆抗体；
8、和/或，试剂1中包被了λ-flc和κ-flc多克隆抗体的乳胶微球的浓度为0.01-1wt％，优选为0.05-0.1wt％；
9、和/或，试剂1中包被了λ-flc和κ-flc多克隆抗体的乳胶微球的粒径为80～120nm，优选粒径为100nm。
10、优选地，试剂1中第一缓冲液或试剂2中第二缓冲液或校准品试剂中第三缓冲液的ph值独立地为6～9；
11、和/或，试剂1中第一缓冲液或试剂2中第二缓冲液或校准品试剂中第三缓冲液的浓度各自独立地为10mmol/l～100mmol/l，优选为20mmol/l～50mmol/l；
12、和/或，试剂1中第一缓冲液或试剂2中第二缓冲液或校准品试剂中第三缓冲液独立地为mes缓冲液、硼酸缓冲液、mops缓冲液、磷酸缓冲液或甘氨酸缓冲液中的一种或两种以上的组合。
13、优选地，试剂1中还包含0.1wt％～5wt％第一稳定剂，和/或，0.1wt％～1wt％第一表面活性剂，和/或，0.1wt％～10wt％第一防腐剂；
14、优选地，试剂1中的第一稳定剂为牛血清白蛋白、甘露醇、氯化镁、硫酸氢钠的一种或两种以上的组合，优选为牛血清白蛋白；和/或，试剂1中第一稳定剂浓度为0.5wt％～3wt％；
15、优选地，试剂1中第一表面活性剂选自吐温、tx-100、briji-35和十二烷基糖苷中的一种或两种以上的组合；和/或，试剂1中第一表面活性剂浓度为0.1wt％～0.5wt％，优选为0.3wt％；
16、优选地，试剂1中第一防腐剂选自叠氮铵、苯酚、对羟基苯甲酸、2-苯氧乙醇、proclin 300中的一种或两种以上的组合，优选为2-苯氧乙醇；和/或，试剂1中第一防腐剂为0.1wt％～1wt％。
17、优选地，试剂2中第二表面活性剂为十二烷基糖苷，或，十二烷基糖苷与如下所述物质中的一种或两种以上的组合：吐温、tx-100、briji-35、甘露醇；
18、和/或，试剂2中第二表面活性剂浓度为0.1wt％～0.5wt％，优选为0.3wt％；
19、优选地，试剂2中的第二表面活性剂中十二烷基糖苷与甘露醇的质量比为(1～3)：1。
20、优选地，试剂2中还含有0.05wt％～10wt％的电解质，和/或，0.01wt％～1wt％反应促进剂，和/或，0.1wt％～5wt％第二防腐剂；
21、优选地，试剂2中电解质选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中的一种或两种以上的组合；和/或，试剂2中电解质的质量百分比为0.05wt％～1wt％；
22、优选地，试剂2中反应促进剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇8000中的一种或两种以上的组合，优选地，所述反应促进剂为聚乙二醇8000；和/或，试剂2中反应促进剂的质量百分比为0.01wt％～0.5wt％。
23、优选地，试剂2中第二防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、2-苯氧乙醇、proclin 300中的一种或两种以上的组合，优选为2-苯氧乙醇；
24、和/或，试剂2中第二防腐剂的质量百分比为0.1wt％～3wt％。
25、优选地，试剂2中的flc单克隆抗体为λ-flc单克隆抗体或κ-flc单克隆抗体；
26、和/或，试剂2中的flc单克隆抗体为鼠抗人flc单克隆抗体；
27、和/或，试剂2中flc单克隆抗体的质量百分比为0.0005wt％～0.005wt％，优选为0.0007wt％。
28、优选地，校准品试剂中还含有第三稳定剂，和/或，第三防腐剂；
29、优选地，所述第三稳定剂选自牛血清白蛋白、甘露醇、氯化镁和硫酸氢钠中的一种或两种以上的组合，优选为牛血清白蛋白；和/或，校准品中第三稳定剂的质量百分比为0.01wt％～1wt％，优选为0.01wt％～0.5wt％；
30、优选地，所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单通道检测κ-FLC和λ-FLC比值的试剂盒，其特征在于，试剂盒中包括试剂1，试剂2，和校准品试剂；其中，
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，试剂1中，所述λ-FLC和κ-FLC多克隆抗体为鼠抗人λ-FLC和κ-FLC多克隆抗体；
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，试剂1中第一缓冲液或试剂2中第二缓冲液或校准品试剂中第三缓冲液的pH值独立地为6～9；
4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂1中还包含0.1wt％～5wt％第一稳定剂，和/或，0.1wt％～1wt％第一表面活性剂，和/或，0.1wt％～10wt％第一防腐剂；
5.根据权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂2中第二表面活性剂为十二烷基糖苷，或，十二烷基糖苷与如下所述物质中的一种或两种以上的组合：吐温、TX-100、Briji-35、甘露醇；
6.根据权利要求1-5任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂2中还含有0.05wt％～10wt％的电解质，和/或，0.01wt％～1wt％反应促进剂，和/或，0
7.根据权利要求1-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂2中的FLC单克隆抗体为λ-FLC单克隆抗体或κ-FLC单克隆抗体；
8.根据权利要求1-7任一项所述的试剂盒，其特征在于，校准品试剂中还含有第三稳定剂，和/或，第三防腐剂；
9.根据权利要求1-8任一项所述的试剂盒，其特征在于，校准品试剂中λ-FLC的浓度为8.0mg/L～200mg/L，κ-FLC的浓度为4.5mg/L～160mg/L，
10.根据权利要求1-9任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂1中乳胶微球与多克隆抗体偶联颗粒的制备方法包括以下步骤：将乳胶微球与第四缓冲液混合后，添加活化剂，将乳胶微球进行活化；加入游离轻链多克隆抗体，将活化后的乳胶微球与游离轻链多克隆抗体偶联；再使用BSA进行封闭，得到所述中乳胶微球与多克隆抗体偶联颗粒；
...【技术特征摘要】
1.一种单通道检测κ-flc和λ-flc比值的试剂盒，其特征在于，试剂盒中包括试剂1，试剂2，和校准品试剂；其中，
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，试剂1中，所述λ-flc和κ-flc多克隆抗体为鼠抗人λ-flc和κ-flc多克隆抗体；
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，试剂1中第一缓冲液或试剂2中第二缓冲液或校准品试剂中第三缓冲液的ph值独立地为6～9；
4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂1中还包含0.1wt％～5wt％第一稳定剂，和/或，0.1wt％～1wt％第一表面活性剂，和/或，0.1wt％～10wt％第一防腐剂；
5.根据权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂2中第二表面活性剂为十二烷基糖苷，或，十二烷基糖苷与如下所述物质中的一种或两种以上的组合：吐温、tx-100、briji-35、甘露醇；
6.根据权利要求1-5任一项所述的试剂盒，其特征在于，试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：马石金，殷宁宁，曹文刚，宋辉，
申请(专利权)人：湖北擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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