【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及纳米材料领域，尤其涉及一种金属离子络合mrna递送系统的制备方法及其产品和应用。
技术介绍
1、信使rna(messenger rna，mrna)疗法是一种新兴的基因疗法，具有极大的应用价值。mrna既可以通过编码抑瘤基因直接杀伤肿瘤细胞，又能编码相关抗原翻译成蛋白质，促进dc细胞成熟进而激活抗原特异性t细胞，诱导特定免疫反应。mrna不需要质粒骨架或病毒包装的支持，本身不具有免疫原性，具有更好的安全性。mrna生产周期短，可以避免质粒或病毒整合到宿主基因组的安全性问题。然而，由于mrna极易被核酸酶降解并且难以直接进入细胞，递送mrna至目的细胞受到各种技术上的限制。因此，开发有效的mrna药物靶向递送体系，保护mrna免于降解，对于新型mrna疗法及疫苗的开发具有重要意义。
2、目前应用最广泛的传统递送载体为脂质纳米粒子lnp。如cn118319879a公开了一种脂质纳米粒，包括可离子化脂质分子、甾族脂质分子、中性脂质分子、peg-脂质分子、类胡萝卜素或其衍生物，采用该脂质纳米粒包载核酸分子，得到包载核酸分子的脂质纳米粒。然而lnp利用可电离脂质通过静电相互作用来负载mrna，需要电荷反转来进行溶酶体逃逸，存在胞质释放效率低、细胞外排效应以及高毒性等问题。另外，目前市面上基于lnp的药物需要在低温环境中运输和储存。当lnp在溶液中长时间储存时会发生聚集现象，影响后续mrna的释放及翻译。
3、因此，开发一种稳定的mrna递送系统的制备方法，以摒弃通过静电相互作用的传统基因装载模式，实现高
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种金属离子络合mrna递送系统的制备方法及其产品和应用。该制备方法反应条件温和快速，制备得到的金属离子络合mrna递送系统能够提高mrna胞质递送的效率，实现更安全更有效的mrna递送。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种金属离子络合mrna递送系统的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
4、(1)将mrna与金属离子在10～35℃下于溶剂中混合10～60min，得到纳米颗粒；
5、(2)将纳米颗粒与磷脂膜在10～35℃下混合2～60min，用磷脂膜对所述纳米颗粒进行包裹得到所述金属离子络合mrna递送系统。
6、其中，10～35℃中的具体点值可以选择10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃等，10～60min中的具体点值可以选择10min、20min、30min、40min、50min、60min，2～60min中的具体点值可以选择2min、10min、20min、30min、40min、50min、60min等。
7、本专利技术通过金属离子与mrna混合，二者络合形成络合物纳米颗粒，金属离子一方面能够将原本松散分布的mrna凝结起来以提高载量，另一方面可以通过刺激免疫相关通路起到佐剂的效果。磷脂膜的包裹提高了递送系统的生物相容性，延长了其在体内的循环时间，同时还能够促进递送系统与目标细胞膜之间的融合。此外，将步骤(1)mrna与金属离子的混合温度控制在10～35℃，时间控制在10～60min，反应条件温和快速，制备得到的纳米颗粒粒径均一，能够提高mrna胞质递送的效率，实现更安全更有效的mrna递送。
8、优选地，步骤(1)所述金属离子包括mn2+和/或mo4+。
9、优选地，步骤(1)所述金属离子为mn2+和mo4+。
10、本专利技术通过将mn2+和mo4+复配，能够增强金属离子与mrna的络合稳定性，提高对mrna的包载率，从而提高mrna递送效率。
11、优选地，所述mn2+和mo4+的摩尔比为(1～10):(1～10)。
12、其中，1～10％中的具体点值可以选择1％、3％、5％、7％、9％、10％等。
13、基于mn2+和mo4+在与mrna的络合稳定性方面的潜在相互作用，当两者满足上述特定的比例关系时，能够更好地提高mrna递送效率。
14、优选地，步骤(1)所述mrna与金属离子的质量比为(1～10):(10～100)。
15、其中，1～10中的具体点值可以选择1、2、3、4、5、6、7、8、9、10等，10～100中的具体点值可以选择10、20、30、40、50、60、70、80、90、100等。
16、优选地，步骤(2)所述纳米颗粒中金属离子与磷脂膜的质量比为1:(0.1～10)。
17、其中，0.1～10中的具体点值可以选择0.1、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10等。
18、优选地，步骤(2)所述磷脂膜包括天然膜和/或人工合成脂质膜。
19、优选地，所述天然膜包括内皮细胞膜、人胚肾细胞膜、巨噬细胞膜、乳腺癌细胞膜、结直肠癌细胞膜或黑色素瘤细胞膜中的任意一种或至少两种的组合。
20、优选地，所述人工合成脂质膜的制备原料包括氢化大豆磷脂、胆固醇和peg化脂质。
21、优选地，所述磷脂膜为天然膜。
22、本专利技术创造性地发现，选择天然膜对纳米颗粒进行包裹时，制备得到的金属离子络合mrna递送系统对mrna具有更高的递送效率。
23、优选地，步骤(1)所述溶剂包括水或磷酸盐缓冲液。
24、优选地，步骤(1)所述混合后还包括离心以及对离心后的沉淀进行重悬。
25、优选地，所述离心的转速为1000～20000g，例如可以选择1000g、3000g、6000g、9000g、12000g、15000g、18000g、20000g等。
26、优选地，步骤(2)所述混合的过程中还进行超声。
27、优选地，步骤(2)所述混合后还包括离心以及对离心后的沉淀进行重悬。
28、优选地，所述离心的转速为1000～20000g，例如可以选择1000g、3000g、6000g、9000g、12000g、15000g、18000g、20000g等。
29、第二方面，本专利技术提供一种如第一方面所述的金属离子络合mrna递送系统的制备方法制备得到的金属离子络合mrna递送系统。
30、第三方面，本专利技术提供一种如第二方面所述的金属离子络合mrna递送系统在制备mrna疫苗和/或mrna药物中的应用。
31、本专利技术所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本专利技术不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
32、相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
33、本专利技术通过金属离子与mrna混合，二者络合形成络合物纳米颗粒，金属离子一方面能够将原本松散分布的mrna凝结起来以提高载量，另一方面可以通过刺激免疫相关通路起到佐本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种金属离子络合mRNA递送系统的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述金属离子包括Mn2+和/或Mo4+。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述金属离子为Mn2+和Mo4+；
4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述mRNA与金属离子的质量比为(1～10):(10～100)；
5.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述磷脂膜包括天然膜和/或人工合成脂质膜；
6.根据权利要求1～5任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂包括水或磷酸盐缓冲液。
7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述混合后还包括离心以及对离心后的沉淀进行重悬；
8.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述混合的过程中还进行超声；
9.一种如权利要求1～8任一项所述的金属离子络合mRNA递送系统
10.一种如权利要求9所述的金属离子络合mRNA递送系统在制备mRNA疫苗和/或mRNA药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种金属离子络合mrna递送系统的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述金属离子包括mn2+和/或mo4+。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述金属离子为mn2+和mo4+；
4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述mrna与金属离子的质量比为(1～10):(10～100)；
5.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述磷脂膜包括天然膜和/或人工合成脂质膜；
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