【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种制备抑制酪氨酸酶苦瓜提取物的方法。
技术介绍
1、黑色素的生成是一个复杂的过程，涉及了大量的酶和各种化学反应，其中酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白在黑色素的合成中起着关键作用。酪氨酸酶是一种广泛分布于不同生物体中的含有多个铜离子的生物酶，在黑色素的生成和酶促褐变过程中发挥着重要的作用，因此，其抑制剂可以作为美白剂在化妆品和医药行业中发挥广泛的作用，同时也可以作为抗褐变化合物应用在食品和农产品中。
2、从植物、细菌和真菌的代谢物中分离得到的天然来源的抗酪氨酸酶活性物质越来越受到关注。许多研究人员更倾向于从天然来源中寻找抑制剂，因为它们的毒性较小并有更好的生物利用度，特别适用于食品、化妆品和药物领域的应用。众所周知，酚类化合物是从植物中提取得到的植物素中最主要的成分，也是植物素之所以有生物活性的主要原因。许多植物提取物具有酪氨酸酶抑制活性，因此成为了寻找新型抗酪氨酸酶化合物的重要源泉。例如，以下植物的抗酪氨酸酶活性已被各种研究者报道：小黄曲霉、黑桑、熊果、阿魏菇、由鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌发酵的藿香、黄花蒿、决明子、红景天、良姜、花椒和花椒花粉、杧果、罗汉松、苦瓜、柠檬香茅、球花红鹃、葡萄叶、欧亚旋覆花等。
3、此外，已有研究者将苦瓜提取物作为化妆品中的有效成分。中国专利“cn200810147317.2苦瓜叶提取物及其在化妆品中的应用”将苦瓜叶提取物加入化妆品中，具有祛痘、美白祛斑的功效。“cn202010316614.6抗皱修复用苦瓜胜肽及其制备工艺”将苦瓜胜肽加入化妆品中，具
4、为了深入研究苦瓜酪氨酸酶抑制提取物的结构与功能乃至实际应用，首先亟待解决的问题就是大量样品的供给。目前，常规的天然酪氨酸酶抑制提取物样品的制备通常采用从天然植物中分离和纯化的方法。其步骤主要是首先制成粗提取液，然后进行分离纯化得到某一类化合物。
技术实现思路
1、针对现有技术中制备苦瓜酪氨酸酶抑制提取物进一步的纯化方法中，本专利技术提供一种制备苦瓜酪氨酸酶抑制提取物的方法，其目的在于：通过简单的分离纯化方法制备酪氨酸酶抑制苦瓜提取物。
2、一种制备酪氨酸酶抑制苦瓜提取物的方法，包括如下步骤：
3、(1)制备苦瓜提取物粗提取液；
4、(2)粗提物浓缩干燥；
5、(3)大孔树脂分离；
6、所述大孔树脂为ab-8，洗脱液为蒸馏水及含量为60％-80％的乙醇；优选的，所述乙醇浓度为70％。
7、(4)用大孔树脂分离柱分离步骤(3)得到的样品洗脱液，浓缩、冷冻干燥后得到苦瓜酪氨酸酶抑制提取物；
8、优选的，步骤(1)具体过程为：取新鲜苦瓜洗净，切片放入烘箱内70℃下干燥，干燥后粉碎过100目筛与含量为70％乙醇混合，料液比为1:20，在55℃、200w超声下提取45分钟，提取完毕后分离沉淀，即得粗提取液；
9、优选的，步骤(2)中具体过程为：向步骤(1)分离沉淀后得到的粗提取液在旋转蒸发仪中55℃下浓缩，将浓缩液去除沉淀后，上清液-80℃冷冻后冷冻干燥。
10、优选的，步骤(3)中具体过程为：将步骤(3)得到的冷冻干燥后的粉末，复溶于蒸馏水中，使其通过ab-8柱，再用蒸馏水快速冲洗，弃去洗脱液，最后用含量为70％的乙醇冲洗，收集流出液。
11、优选的，步骤(3)中：ab-8大孔树脂上样量为1倍量树脂体积(bv)，上样流速为1bv/h，蒸馏水冲洗体积为2倍树脂体积，70％乙醇冲洗体积为3倍柱体积，洗脱流速为2bv/h。
12、优选的，步骤(3)中，
13、所述大孔树脂为ab-8；
14、优选的，所述ab-8的用量比例为柱体积的2/3。新树脂装柱后，用流速为3-5bv/h的蒸馏水冲洗2h，再用体积为2bv的95％乙醇浸泡2h，使树脂充分溶胀，再用体积为2bv的5％hcl冲洗树脂，流速为1.5bv/h，用蒸馏水洗至中性，再用体积为2bv的5％naoh冲洗树脂，流速为1.5bv/h，最后再用蒸馏水冲洗至ph为中性。
15、最后用体积为1bv的95％的乙醇通过树脂层，再用水冲洗至流出液清澈，且置换出乙醇即可待用。
16、优选的，步骤(4)中具体过程为向步骤(3)中收集到的流出液，在旋转蒸发仪中55℃蒸发浓缩，将浓缩液去除沉淀，上清液-80℃冷冻后，冷冻干燥。
17、通过本专利技术提供的方法，能够用简单的步骤找到苦瓜中的天然酪氨酸酶酶抑制物，且进行了纯化分离，提高了酪氨酸酶抑制率，适宜于大规模的生产。
18、显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
19、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
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1.一种制备苦瓜中酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)具体过程为：取新鲜苦瓜洗净，切片放入烘箱内70℃下干燥，干燥后粉碎过100目筛与含量为60％-80％乙醇混合，料液比为1:20，在55℃、200W超声下提取45分钟，提取完毕后分离沉淀，即得粗提取液；优选的，所述乙醇浓度为70％。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中具体过程为：向步骤(1)分离沉淀后得到的粗提取液在旋转蒸发仪中55℃下浓缩，将浓缩液去除沉淀后，上清液-80℃冷冻后，冷冻干燥。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中具体过程为：将步骤(3)得到的冷冻干燥后的粉末，复溶于蒸馏水中，使其通过AB-8柱，再用蒸馏水快速冲洗，弃去洗脱液，最后用含量为60％-80％的乙醇冲洗，收集流出液；优选的，所述乙醇浓度为70％。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中：AB-8大孔树脂上样量为1倍量树脂体积(BV)，上样流速为1BV/h，蒸馏水冲洗体积为1-3倍树脂体积
6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述AB-8柱使用后，用95％的乙醇浸泡24h，蒸馏水洗至没有醇味，再用5％的NaOH浸泡4h，再用蒸馏水冲洗PH至中性，再用5％的HCl浸泡4h，再用蒸馏水洗至PH中性并排除柱中气泡。
7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，
8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中中具体过程为：向步骤(3)中收集到的流出液，在旋转蒸发仪中55℃蒸发浓缩，将浓缩液去除沉淀，上清液-80℃冷冻后，放入冷冻干燥机中干燥。
9.权利要求1至8任一项所述的方法制备得到的抑制酪氨酸酶苦瓜提取物。
10.权利要求9所述的抑制酪氨酸酶苦瓜提取物在制备化妆品、防晒产品、农药或药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种制备苦瓜中酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)具体过程为：取新鲜苦瓜洗净，切片放入烘箱内70℃下干燥，干燥后粉碎过100目筛与含量为60％-80％乙醇混合，料液比为1:20，在55℃、200w超声下提取45分钟，提取完毕后分离沉淀，即得粗提取液；优选的，所述乙醇浓度为70％。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中具体过程为：向步骤(1)分离沉淀后得到的粗提取液在旋转蒸发仪中55℃下浓缩，将浓缩液去除沉淀后，上清液-80℃冷冻后，冷冻干燥。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中具体过程为：将步骤(3)得到的冷冻干燥后的粉末，复溶于蒸馏水中，使其通过ab-8柱，再用蒸馏水快速冲洗，弃去洗脱液，最后用含量为60％-80％的乙醇冲洗，收集流出液；优选的，所述乙醇浓度为70％。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中：ab-...
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