【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用。
技术介绍
0、技术背景
1、脑卒中，俗称中风，是一种高死亡率和高致残率的神经系统疾病，是全球范围内导致死亡和残疾的第三大原因，其主要治疗目标是在症状出现后尽快恢复血流。当前临床上恢复中风血管通畅的方法主要是静脉溶栓，但是目前这种治疗方法的有效窗口时间很窄，很高比例的患者治疗之后神经功能恢复并不理想，幸存者均有不同程度的后遗症，严重影响生活质量。因此，寻找一种行之有效的治疗方法减少中风后的致死致残率并改善中风后遗症对于提高患者生活质量、减轻社会负担有重要意义。近年来研究已发现外泌体因具有神经保护和神经修复作用，成为潜在的中风诊断和治疗方法。此外，外泌体可以穿过血脑屏障并在外周血和脑脊液中循环，可以作为缺血性脑卒中诊断和预后的极好的非侵入性生物标志物。
技术实现思路
1、基于此，本申请提供了一种脂肪干细胞外泌体中富集mir-221-3p，能够抑制小胶质细胞m1极化，可以减轻中风后的神经元损伤，减少中风梗死面积降低中风后的神经功能损伤，促进中风后肢体协调及运动功能的恢复，改善中风后遗症。
2、一种含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，所述外泌体通过脂肪干细胞过表达mir-221-3p后提取所得。
3、在一种实施方式中，所述外泌体的制备方法如下：
4、步骤1，构建过表达mir-221-3p的脂肪干细胞并培养；p>
5、步骤2，超速离心法提取外泌体。
6、在一种实施方式中，所述步骤1具体为：使用rna-fit转染试剂在p5代脂肪干细胞上转染mir-221-3p mimic以构建过表达mir-221-3p的脂肪干细胞,在转染后24小时更换脂肪干细胞培养基，换为由无外泌体血清配制而成的培养基，继续培养24小时后收取脂肪干细胞上清。
7、在一种实施方式中，所述步骤2具体为：步骤1得到的脂肪干细胞上清先使用500g低速离心10分钟，去除细胞碎屑和大颗粒物，之后使用2000g低速离心30分钟，去除大量细胞碎屑和细胞器，得到粗外泌体沉淀，再使用10000g高速离心60分钟，去除小型碎片和膜片，得到中外泌体沉淀；最后使用121000g超速离心60分钟，得到终外泌体沉淀，以无菌pbs重悬，最后即得到含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体。
8、在一种实施方式中，所述外泌体能够抑制小胶质细胞m1极化，体内可以改善中风后的神经功能损伤。
9、在一种实施方式中，所述产品包括食品、药品或保健品。
10、在一种实施方式中，所述药品包括含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体、药物载体/或药用辅料。
11、在一种实施方式中，所述药物载体包括微囊、微球或纳米粒；所述药用辅料包含赋形剂以及附加剂。
12、在一种实施方式中，所述药用辅料包含抗黏合剂、渗透促进剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、吸收剂、保湿剂、溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、ph值调节剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、整合剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、发泡剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂
13、在一种实施方式中，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
14、有益效果：
15、本方法可对脂肪干细胞外泌体进行基因修饰，即对脂肪干细胞过表达mir-221后提取外泌体，创新性的构建“基因修饰”的脂肪干细胞外泌体(adsc-evsmir-221)，使其具有更强的免疫调节能力，能对中风发挥更好的治疗效果。
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1.一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述外泌体通过脂肪干细胞过表达miR-221-3p后提取所得。
2.根据权利要求1所述的.一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述外泌体的制备方法如下：
3.根据权利要求2所述的.一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述步骤1具体为：使用RNA-fit转染试剂在P5代脂肪干细胞上转染miR-221-3p mimic以构建过表达miR-221-3P的脂肪干细胞,在转染后24小时更换脂肪干细胞培养基，换为由无外泌体血清配制而成的培养基，继续培养24小时后收取脂肪干细胞上清。
4.根据权利要求2所述的.一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述步骤2具体为：步骤1得到的脂肪干细胞上清先使用500g低速离心10分钟，去除细胞碎屑和大颗粒物，之后使用2000g低速离心30分钟，去除大量细胞碎屑和细胞器，得到粗外泌体沉淀，
5.根据权利要求1所述的一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述外泌体能够抑制小胶质细胞M1极化，体内可以改善中风后的神经功能损伤。
6.根据权利要求1所述的一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，所述产品包括食品、药品或保健品。
7.根据权利要求6所述的一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，所述药品包括含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体、药物载体/或药用辅料。
8.根据权利要求7所述的一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述药物载体包括微囊、微球或纳米粒；所述药用辅料包含赋形剂以及附加剂。
9.根据权利要求7所述的一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述药用辅料包含抗黏合剂、渗透促进剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、吸收剂、保湿剂、溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、pH值调节剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、整合剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、发泡剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。
10.根据权利要求6所述的一种含miR-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
...【技术特征摘要】
1.一种含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述外泌体通过脂肪干细胞过表达mir-221-3p后提取所得。
2.根据权利要求1所述的.一种含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述外泌体的制备方法如下：
3.根据权利要求2所述的.一种含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述步骤1具体为：使用rna-fit转染试剂在p5代脂肪干细胞上转染mir-221-3p mimic以构建过表达mir-221-3p的脂肪干细胞,在转染后24小时更换脂肪干细胞培养基，换为由无外泌体血清配制而成的培养基，继续培养24小时后收取脂肪干细胞上清。
4.根据权利要求2所述的.一种含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治疗/缓解中风产品中的应用，其特征在于，所述步骤2具体为：步骤1得到的脂肪干细胞上清先使用500g低速离心10分钟，去除细胞碎屑和大颗粒物，之后使用2000g低速离心30分钟，去除大量细胞碎屑和细胞器，得到粗外泌体沉淀，再使用10000g高速离心60分钟，去除小型碎片和膜片，得到中外泌体沉淀；最后使用121000g超速离心60分钟，得到终外泌体沉淀，以无菌pbs重悬，最后即得到含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体。
5.根据权利要求1所述的一种含mir-221-3p的脂肪干细胞外泌体在治...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐俊，盛兰月，徐佳起，汪光明，杨丹静，罗清清，武柏彤，王舰，王文成，黄超，刘华祥，张红武，
申请(专利权)人：上海思德克索生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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