【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗原制备，具体涉及一种尘螨重组抗原及其在过敏原检测试纸条中的应用。
技术介绍
1、过敏性疾病的病情呈复杂化趋势，研究表明单一过敏的儿童超五成存在进展成多重过敏的可能性，早期发生食物过敏或特应性皮炎的儿童将来可能发生其他更加难治性的过敏性疾病。针对过敏性疾病，who提出“四位一体”疗法：避免接触过敏原，对症药物治疗，特异性免疫治疗，医生及患者教育。其中，避免接触过敏原是指在查明过敏原的基础上，做好环境防控，尽量避免接触过敏原。在过敏性疾病的治疗过程中很好地避免接触过敏原不仅可以降低患者发生过敏的概率，还可提高药物疗效，帮助患者尽快脱敏。特异性免疫治疗，即脱敏治疗，是唯一可影响过敏性疾病自然进程，改变免疫应答机制的“对因”疗法，其通过对患者使用逐渐增加剂量的过敏原，提高患者对该过敏原的耐受性，减轻由暴露于该过敏原而引发的症状，最终达到耐受乃至免疫耐受的目的。可见，明确过敏原是防治过敏性疾病的关键，避免接触过敏原并开展特异性免疫治疗都离不开过敏原诊断。
2、过敏原种类繁多，尘螨属于其中的吸入性过敏原，广泛存在于人类生活和工作环境中，其排泄物、代谢物及螨体均具有较强的变应原性，尘螨已成为诱发过敏性疾病的重要过敏原。粉尘螨过敏原der f 1（简称derf1）和der f 2（简称derf2）是最主要的致敏组分，但缺乏derf1和derf2组分的粉尘螨浸液仍能诱发哮喘，说明其他组分在致敏的过程中也发挥了重要作用，比如粉尘螨过敏原der f 3（简称derf3）也能够介导机体产生过敏反应，目前对其研究相对较少。p>
3、不同的过敏症患者可能对不同的粉尘螨过敏原（比如derf1、derf2或derf3）过敏，这就需要确定患者对哪种粉尘螨过敏原过敏，才能采取针对性的治疗，比如采用不同药物进行脱敏治疗，才能真正实现患者对特定粉尘螨过敏原的耐受。但是现有的过敏原检测试纸条，通常把尘螨过敏原全部放在一条检测线同时检测，无法区分患者具体是由哪种尘螨过敏原引起的过敏反应，对后期治疗非常不利。
4、因此，急需找到一种能同时区分derf1、derf2和derf3三种过敏原的ige抗体的检测方法，从而帮助需要脱敏治疗的患者能够对症有效治疗。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种尘螨重组抗原及其在过敏原检测试纸条中的应用，通过构建derf1、der f2和der f3重组抗原，并对其氨基酸序列进行优化设计，尤其是其中的derf3，突变了其中的d58p、s106d、g231c位点，从而制备了能同时检测并区分三种重组抗原的试纸条，有效解决了同时检测时出现derf3的检测结果错误、假阳性等问题，实现在试纸条中三种粉尘过敏原的ige抗体的同时检测，避免出现交叉影响的问题，为尘螨过敏的患者，在脱敏治疗前给出直接的过敏原种类判断，方便对症进行更有效的脱敏治疗。
2、一方面，本专利技术提供了一种derf3重组抗原，所述derf3重组抗原基于野生型derf3蛋白序列并具有突变位点，所述突变位点包括d58p、s106d、g231c中的任意一种或多种。
3、本专利技术针对野生型derf3蛋白（seq id no.8），取其成熟蛋白的氨基酸序列，位于野生型derf3蛋白的第28位至259位氨基酸，并对其进行突变，希望通过突变位点使derf3蛋白内形成盐桥、疏水键或二硫键，增加derf3蛋白稳定性，从而使其能具有较高稳定性，增强识别抗体的能力，用于检测的derf3过敏原的ige抗体时能提高检测灵敏度和特异性。可以理解的是，derf3蛋白在d58p、s106d、g231c三个突变位点中的任意一种或多种发生突变，都具有提高derf3蛋白构象稳定性的效果。
4、其中d58p能够获得更优的信号肽序列，并能形成新的静电相互作用，导致新的盐桥对形成，s106d增加了空间的疏水性，g231c增加了derf3蛋白抗原表位的稳定性。
5、进一步地，所述derf3重组抗原包括d58p、s106d、g231c突变位点的组合。
6、同时对d58p、s106d、g231c三个突变位点进行组合突变，具有协同提高derf3蛋白构象稳定性的效果，改变了空间构象，有更多的抗原表位暴露出来，使derf3重组抗原特异性识别抗体的能力达到最优。
7、进一步地，所述derf3重组抗原的氨基酸序列如seq id no.3所示。
8、本专利技术中，这种同时进行d58p、s106d和g231c组合突变的derf3突变体命名为derf3 02，derf3 02的氨基酸序列如seq id no.3所示，氨基酸序列相对应的编码核苷酸序列如seq id no.6所示。
9、研究证明，derf3 02作为重组抗原，能显著提高derf3过敏原的ige抗体的捕获能力。
10、再一方面，本专利技术提供了一种检测尘螨抗体的试纸条，所述试纸条设有检测线和质控线，所述检测线包括derf3检测线，所述derf3检测线包被derf3重组抗原；所述derf3重组抗原的氨基酸序列如seq id no.3所示。
11、进一步地，所述检测线还包括derf1检测线和/或derf2检测线，所述derf1检测线、derf2检测线分别包被derf1重组抗原、derf2重组抗原；所述derf1、derf2重组抗原的氨基酸序列分别如seq id no.1、seq id no.2所示。
12、市面购买的derf1、derf2和derf3重组抗原，不仅价格昂贵，用于制备试纸条进行ige抗体检测时，通常会发现，不仅检测准确性和灵敏度不高，而且用于制备同时检测derf1、derf2和derf3三种重组抗原时容易发生交叉影响，检测结果不稳定。
13、为了解决这个问题，本专利技术采用自制derf1、derf2和derf3重组抗原，并对编码核苷酸序列进行密码子优化，制备的重组抗原用于制备试纸条，可实现同时精准检测derf1、derf2和derf3三种重组抗原的ige抗体，提高检测的准确性和灵敏度。
14、本专利技术针对已知的derf1蛋白序列（seq id no.7），取其成熟蛋白的氨基酸序列，位于野生型derf1蛋白的第99位至321位氨基酸，构建derf1重组抗原，并按照真核表达系统密码子偏好性，选择使用频率最高的密码子，重新设计编码序列，获得如seq id no.4所示的derf1重组抗原的编码基因，并人工合成derf1重组抗原（seq id no.1）。
15、本专利技术针对已知的derf2蛋白序列（seq id no.2），取其md-2相关脂质识别（ml）结构域蛋白的全长氨基酸序列，构建derf2重组抗原，并按照真核表达系统密码子偏好性，选择使用频率最高的密码子，重新设计编码序列，获得如seq id no.5所示的derf2重组抗原的编码基因，并人工合成derf2重组抗原（seq id no.2）。
16、针对已知的derf3蛋白序列（seq id 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Derf3重组抗原，其特征在于，基于野生型Derf3蛋白序列并具有突变位点，所述突变位点包括D58P、S106D、G231C中的任意一种或多种。
2.如权利要求1所述的Derf3重组抗原，其特征在于，包括D58P、S106D、G231C突变位点的组合。
3.如权利要求2所述的Derf3重组抗原，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.一种检测尘螨抗体的试纸条，其特征在于，所述试纸条设有检测线和质控线，所述检测线包括Derf3检测线，所述Derf3检测线包被Derf3重组抗原；所述Derf3重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.如权利要求4所述的试纸条，其特征在于，所述检测线还包括Derf1检测线和/或Derf2检测线，所述Derf1检测线、Derf2检测线分别包被Derf1重组抗原、Derf2重组抗原；所述Derf1、Derf2重组抗原的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。
6.如权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括标记垫，标记垫
7.如权利要求6所述的试纸条，其特征在于，所述三条检测线的排列顺序依次为Derf3、Derf1、Derf2检测线，其中Derf3检测线距离所述试纸条的加样垫最近。
8.一种检测尘螨抗体的方法，其特征在于，采用如权利要求4~7任一项所述的试纸条进行检测。
9.一种尘螨重组抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.一种重组抗原用于制备提高血清样品中尘螨过敏IgE抗体检测准确性的试剂的用途，其特征在于，所述重组抗原包括Derf1重组抗原、Derf2重组抗原和Derf3重组抗原，所述Derf1重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Derf2重组抗原的氨基酸序列如SEQID NO.2所示，所述Derf3重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
...【技术特征摘要】
1.一种derf3重组抗原，其特征在于，基于野生型derf3蛋白序列并具有突变位点，所述突变位点包括d58p、s106d、g231c中的任意一种或多种。
2.如权利要求1所述的derf3重组抗原，其特征在于，包括d58p、s106d、g231c突变位点的组合。
3.如权利要求2所述的derf3重组抗原，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.3所示。
4.一种检测尘螨抗体的试纸条，其特征在于，所述试纸条设有检测线和质控线，所述检测线包括derf3检测线，所述derf3检测线包被derf3重组抗原；所述derf3重组抗原的氨基酸序列如seq id no.3所示。
5.如权利要求4所述的试纸条，其特征在于，所述检测线还包括derf1检测线和/或derf2检测线，所述derf1检测线、derf2检测线分别包被derf1重组抗原、derf2重组抗原；所述derf1、derf2重组抗原的氨基酸序列分别如seq id n...
【专利技术属性】
技术研发人员：闵丹，廖丽敏，张晓宇，
申请(专利权)人：英科隆生物技术杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。