【技术实现步骤摘要】
专利
本申请属于抗体领域，具体地，本申请提供了靶向冠状病毒的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、冠状病毒(coronavirus,cov)属巢式病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属，为有包膜的单正链rna病毒，基因组全长27-32kb，是已知的最大的rna病毒。目前已知能导致人类感染的冠状病毒有7种：hcov-229e、hcov-oc43、sars-cov、hku-1、hcov-nl63、mers-cov和sars-cov-2。
2、冠状病毒遗传多样性的特点，也使人们更加意识到冠状病毒潜在的跨种属传播的风险。sars-cov、mers-cov和sars-cov-2同属与冠状病毒β属，三者具有较近的系统进化关系、相同的病毒粒子结构，其结构蛋白主要有4种：刺突(spike，s)蛋白，包膜(envelope，e)蛋白，膜(membrane，m)蛋白和核衣壳(nuclecapsid，n)蛋白。其中s蛋白作为冠状病毒重要的囊膜蛋白，以三聚体的形式存在病毒膜表面，在病毒感染宿主细胞过程中发挥着重要作用，是病毒疫苗及相关抗体治疗药物研究设计的重要位点。s可分为s1和s2两个亚单位，s1亚单位上受体结合区(receptor binding domain,rbd)主要介导病毒与宿主细胞表面受体识别，不同冠状病毒的受体不尽相同，mers-cov的受体是dpp4，而sars-cov和sars-cov-2是ace2。s2亚单位是通过构象改变后形成的六股螺旋束来介导病毒与细胞膜融合，从而实现病毒入侵宿主细胞。通常认为冠状病毒的rbd是主要的中
3、虽然sars-cov-2病毒已有疫苗获批使用，但由于冠状病毒变异快，不同疫苗在不同地区和人群的保护效果存在较大差异，人群健康条件及疫苗副反应也成为疫苗接种的限制，疫苗对冠状病毒感染的预防和控制发挥的作用有限。
4、单抗是由单一b淋巴细胞分泌的，只针对一种抗原决定簇的抗体，因具有特异的、潜在靶向治疗药物特性，已在临床肿瘤和免疫系统疾病治疗中得到了广泛的应用。已对于病毒感染的单抗研究，有zmapp对埃博拉病毒(ebola virus)感染在临床上表现出了有效的治疗作用。而冠状病毒感染者恢复期血清中含有大量的中和抗体，也发现具有有效的临床治疗效果，说明中和抗体可作为病毒感染有效、安全的治疗手段。
5、目前，针对冠状病毒中和抗体的研究多靶向受体结合区rbd，这些中和抗体可源于新冠康复患者的记忆性或血浆b细胞、噬菌体、酵母和核糖体文库或来自免疫小鼠、兔、猴和羊驼。但是对非rbd区域，尤其是s2的认知还非常有限，对能够中和多种冠状病毒的抗体研究相对较少，而广谱中和抗体不仅有助于治疗当前的新冠感染患者，也可用于治疗sars、mers等相关冠状病毒的严重感染，对冠状病毒感染的防控具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术通过筛选获得了靶向sars-cov、mers-cov和sars-cov-2的中和性鼠单克隆抗体，并证实对sars-cov、mers-cov和sars-cov-2假病毒表现出显著的中和作用，因其具有广谱性，未来可为冠状病毒预防和治疗的手段提供新的手段。
2、一方面，本申请提供了靶向冠状病毒的单克隆抗体，所述单克隆的重链cdr氨基酸序列为h-cdr1:gftfssya、h-cdr2:isydgsnk、h-cdr3:arapdcsggscsteyfqh；所述单克隆的轻链cdr氨基酸序列为l-cdr1:esvdnyglsf、l-cdr2:aas、l-cdr3:qqskevpwt。
3、进一步地，所述单克隆抗体的重链氨基酸序列为seq id no.2，和/或所述单克隆抗体的轻链氨基酸序列为seq id no.7。
4、除cdr外的轻、重链部分以及抗体中的骨架部分，本领域技术人员可以根据需求，例如人源化或表达生产的需求设计或选用现有部分。
5、另一方面，本申请提供了上述单克隆抗体在制备治疗冠状病毒感染所导致疾病的药物中的应用。
6、进一步地，所述药物为口服或注射剂型。
7、
8、注射剂的例子包括但不限于注射液、粉针剂；口服制剂的例子包括但不限于片剂、胶囊剂、口服液。本领域技术人员可以根据药剂学领域常识选择药学上可接受的辅料，包括但不限于溶剂、助溶剂、稳定剂、分散剂、粘度调节剂、渗透压调节剂、抗氧化剂、甜味剂、粘合剂、填充剂、润滑剂包衣剂、胶囊壳等。
9、另一方面，本申请提供了上述单克隆在制备检测冠状病毒感染的试剂中的应用。
10、进一步地，所述冠状病毒为sars-cov、mers-cov或sars-cov-2。
11、所述冠状病毒感染所导致的疾病包括但不限于呼吸道相关症状，如炎症、咳嗽、呼吸困难等，以及感染并发的细胞因子风暴、神经系统损伤、器官衰竭等。
12、另一方面，本申请提供了编码上述单克隆抗体的核酸，所述核酸的核苷酸序列包含seq id no.1和seq id no.6。
13、另一方面，本申请提供了载体，所述载体包含上述核酸。
14、另一方面，本申请提供了宿主细胞，所述宿主包含上述载体。
15、本申请中的宿主细胞可选各种本领域中可用于抗体表达的各种原核或真核宿主细胞，例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母等，这些不同的宿主，本领域技术人员可以根据已知的密码子偏好性设计不同的核苷酸序列并附以适合的连接、标签等部件。
16、另一方面，本申请提供了制备上述单克隆抗体的方法，所述方法包括培养上述宿主细胞的步骤。
17、重组表达制备抗体的方法中的其他分子生物学操作步骤已经蛋白纯化等步骤本领域技术人员可以常规选择。
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1.靶向冠状病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链CDR氨基酸序列为H-CDR1:GFTFSSYA、H-CDR2:ISYDGSNK、H-CDR3:ARAPDCSGGSCSTEYFQH；所述单克隆抗体的轻链CDR氨基酸序列为L-CDR1:ESVDNYGLSF、L-CDR2:AAS、L-CDR3:QQSKEVPWT。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，所述单克隆的重链氨基酸序列为SEQ ID NO.2，和/或所述单克隆的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.7。
3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备治疗冠状病毒感染所导致疾病的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述药物为口服或注射剂型。
5.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备检测冠状病毒感染的试剂中的应用。
6.根据权利要求3-5任一项所述的应用，所述冠状病毒为SARS-CoV、MERS-CoV或SARS-CoV-2。
7.编码根据权利要求1或2所述的单克隆抗体的核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列包含SEQ ID NO.1
8.载体，其特征在于，所述载体包含根据权利要求7所述的核酸。
9.宿主细胞，其特征在于，所述宿主包含根据权利要求8所述的载体。
10.制备根据权利要求1或2所述的单克隆抗体的方法，其特征在于，所述方法包括培养根据权利要求9所述的宿主细胞的步骤。
...【技术特征摘要】
1.靶向冠状病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链cdr氨基酸序列为h-cdr1:gftfssya、h-cdr2:isydgsnk、h-cdr3:arapdcsggscsteyfqh；所述单克隆抗体的轻链cdr氨基酸序列为l-cdr1:esvdnyglsf、l-cdr2:aas、l-cdr3:qqskevpwt。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，所述单克隆的重链氨基酸序列为seq id no.2，和/或所述单克隆的轻链氨基酸序列为seq id no.7。
3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备治疗冠状病毒感染所导致疾病的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述药物为口服或注射剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢帅，宋文俊，李月，孙宇天，
申请(专利权)人：北京溯本源和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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