【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞工程领域，涉及一种衰老的间充质干细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
1、衰老是生物随着时间推移发生的必然过程，是一种复杂的自然生理现象，宏观表现为身体机能的衰退、适应性及抵抗力减弱等。衰老一直是影响整个人类社会健康发展的重要问题，延缓衰老的药物研究已成为生命科学领域的热点及重点问题。
2、细胞衰老是生物体整体衰老的一大重要表征，具体表现为细胞周期的停滞以及促炎细胞因子的释放。目前用于抗衰老药物评价以及衰老机制探究的衰老细胞模型有限，主要是使用化学药物诱导衰老。具体方法是利用亚致死剂量的阿霉素、博来霉素以及依托泊苷等药物，诱导细胞dna损伤，进而阻滞细胞周期，诱导细胞衰老。化学诱导细胞衰老模型存在诸多不足，首先是机制单一，dna损伤并不是细胞衰老的唯一驱动因素。其次是衰老标志物表达的局限性，p16和p21是共同介导细胞衰老进程且彼此相互独立的通路，化学诱导衰老模型往往不能同时体现p16和p21这两条通路的激活。最后，化学诱导药物的剂量及诱导时间往往难以把握，受细胞自身状态的影响大，这导致该模型的重复性较差。
3、专利技术人发现原代人源间充质干细胞(msc)在体外多次传代后，其增殖分化的自我更新能力会逐渐丢失，自然出现衰老标志物的广泛表达。将msc体外多次自然复制性传代后，msc能表现出多因素驱动的衰老表征。msc的自然衰老无需药物诱导，操作简便，重复性强。因而对人原代msc进行体外连续复制传代，相较于化学诱导细胞衰老，是研究细胞衰老的更理想、更真实的细胞模型。然而mscs在体外传代次数有限
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种衰老的间充质干细胞的制备方法。
2、本专利技术的另一目的是提供按照该方法制备的衰老的间充质干细胞。
3、本专利技术的又一目的是提供该衰老的间充质干细胞的应用。
4、本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
5、一种衰老的间充质干细胞的制备方法，间充质干细胞细胞接种于含10％胎牛血清与100mg/l的青霉素和链霉素的改良d/f12完全培养基，置于co2细胞培养箱，5％co237℃进行培养，待细胞密度达到90％时，进行消化传代，培养至第12代时获得所述的衰老的间充质干细胞；其中，所述的改良d/f12完全培养基为添加复合氨基酸的d/f12完全培养基，所述的复合氨基酸由8种氨基酸组成，包括酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸和半胱氨酸。
6、作为本专利技术的一种优选，所述的8种氨基酸在d/f12完全培养基中的终浓度分别为：44-47mg/l酪氨酸、18-22mg/l亮氨酸、2-3mg/l异亮氨酸、7-8mg/l苯丙氨酸、1-2mg/l天冬氨酸、8-9mg/l苏氨酸、5-6mg/l丝氨酸和6-7mg/l半胱氨酸。
7、作为本专利技术的进一步优选，所述的8种氨基酸在d/f12完全培养基中的终浓度分别为：45.30mg/l酪氨酸、19.68mg/l亮氨酸、2.62mg/l异亮氨酸、7.09mg/l苯丙氨酸、1.11mg/l天冬氨酸、8.02mg/l苏氨酸、5.24mg/l丝氨酸和6.06mg/l半胱氨酸。
8、本专利技术所述的制备方法制备得到的衰老的间充质干细胞。
9、本专利技术所述的衰老的间充质干细胞在制备间充质干细胞衰老模型中的应用。
10、本专利技术所述的衰老的间充质干细胞作为间充质干细胞衰老模型在筛选药物中的应用。
11、本专利技术所述的衰老的间充质干细胞作为间充质干细胞衰老模型在筛选衰老所致疾病的治疗药物中的应用。
12、有益效果：
13、目前常用的衰老细胞模型多为化学药物诱导模型，这些模型存在机制单一、衰老标志物表达的局限、重复性差等缺点，无法全面反映真实衰老进程。相较于化学诱导细胞衰老，人原代msc进行体外连续复制传代，是研究细胞衰老的更理想、更真实的细胞模型。然而mscs在体外传代次数有限，易丧失增殖活性，作为常用衰老细胞模型成本较高。本专利技术中发现含8种氨基酸的间充质干细胞，在相同培养代数下比普通间充质干细胞增殖活力更高，可迭代培养代数更多，大大降低了间充质干细胞作为衰老细胞模型的培养成本，且能在培养后期表现出全面多因素的衰老表征，包括细胞衰老标志物β-半乳糖苷酶、p53、p21、p16及γh2ax的升高，lamin b1和prb的表达降低，衰老相关分泌表型(sasp)分泌增加，活性氧累积，线粒体膜电位降低等。综上所述，本专利技术人提出含8种氨基酸的间充质干细胞可作为新型衰老细胞模型。
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1.一种衰老的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，间充质干细胞细胞接种于含10％胎牛血清与100mg/L的青霉素和链霉素的改良D/F12完全培养基，置于CO2细胞培养箱，5％CO237℃进行培养，待细胞密度达到90％时，进行消化传代，培养至第12代时获得所述的衰老的间充质干细胞；其中，所述的改良D/F12完全培养基为添加复合氨基酸的D/F12完全培养基，所述的复合氨基酸由8种氨基酸组成，包括酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸和半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的8种氨基酸在D/F12完全培养基中的终浓度分别为：44-47mg/L酪氨酸、18-22mg/L亮氨酸、2-3mg/L异亮氨酸、7-8mg/L苯丙氨酸、1-2mg/L天冬氨酸、8-9mg/L苏氨酸、5-6mg/L丝氨酸和6-7mg/L半胱氨酸。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的8种氨基酸在D/F12完全培养基中的终浓度分别为：45.30mg/L酪氨酸、19.68mg/L亮氨酸、2.62mg/L异亮氨酸、7.09mg/L苯丙氨酸、
4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法制备得到的衰老的间充质干细胞。
5.权利要求4所述的衰老的间充质干细胞在制备间充质干细胞衰老模型中的应用。
6.权利要求4所述的衰老的间充质干细胞作为间充质干细胞衰老模型在筛选药物中的应用。
7.权利要求4所述的衰老的间充质干细胞作为间充质干细胞衰老模型在筛选衰老所致疾病的治疗药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种衰老的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，间充质干细胞细胞接种于含10％胎牛血清与100mg/l的青霉素和链霉素的改良d/f12完全培养基，置于co2细胞培养箱，5％co237℃进行培养，待细胞密度达到90％时，进行消化传代，培养至第12代时获得所述的衰老的间充质干细胞；其中，所述的改良d/f12完全培养基为添加复合氨基酸的d/f12完全培养基，所述的复合氨基酸由8种氨基酸组成，包括酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸和半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的8种氨基酸在d/f12完全培养基中的终浓度分别为：44-47mg/l酪氨酸、18-22mg/l亮氨酸、2-3mg/l异亮氨酸、7-8mg/l苯丙氨酸、1-2mg/l天冬氨酸、8-9mg/l苏氨酸、5-6mg/...
【专利技术属性】
技术研发人员：王广基，王婧，
申请(专利权)人：江苏睿源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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