【技术实现步骤摘要】
本申请涉及组织修复材料的，具体涉及一种猪源肌腱脱细胞材料及其制备方法与应用。
技术介绍
1、前交叉韧带断裂是一种最常见的运动损伤，其发病率也在不断上升。关节镜下重建前交叉韧带手术是目前最常用手术方式，重建所需的韧带来源主要为自体肌腱、同种异体肌腱和人工韧带三种。在大多数情况下，自体肌腱移植物不担心免疫排斥及疾病传播等，但手术时间较长，创伤较大。同种异体肌腱重建后的韧带强度大，术后恢复快，但存在排异的风险。人工韧带以期能避免自体结构缺失和传播疾病，但费用高昂、骨整合能力较弱，远期有极少部分患者会有断裂和松动的风险。因此，如何开发出一款兼具匹配的力学强度、良好的治疗效果且价格低廉的韧带至关重要。
2、最近的研究表明猪源肌腱具有与人的韧带相适配的力学强度，并且猪的韧带来源广泛，成本较低，兼具良好的修复效果，在前交叉韧带断裂修复中具有巨大的应用潜力。然而，相关研究仅处于初级阶段，目前证据并不充分，且工艺并不成熟。因此，亟待深入探究该材料在前交叉韧带断裂修复中的作用。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本申请提供一种猪源肌腱脱细胞材料及其制备方法与应用。
2、第一方面，本申请提供了一种猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，具体包括进行以下步骤：将猪源肌腱样品依次经反复冻融处理、0.5v/v％-1.5v/v％的tritonx-100溶液处理、0.5wt％-1.5wt％的sds溶液处理、1.5v/v％-3v/v％的triton x-100溶液处理、2wt％-3.5wt％的脱
3、本申请通过将猪源肌腱样品依次经反复冻融处理、较低浓度的tritonx-100溶液处理、sds溶液处理、较高浓度的tritonx-100溶液处理、脱氧胆酸钠溶液处理、50-150u/ml的dnasei酶溶液处理、100％异丙醇溶液处理、冷冻干燥后制得猪源肌腱脱细胞材料，该成品材料具有较低含量的dna，且具有优异的力学性能。
4、其中，triton x-100是一种去污剂，可以有效去除细胞膜脂质，进一步去除细胞内容物，该浓度范围被认为可以有效去除细胞膜，且不会对基质产生显著破坏；sds溶液是一种强去污剂，有助于彻底去除细胞膜和细胞内蛋白质，该浓度足以保证去细胞化的彻底性，同时避免对基质的结构造成过度损害；使用更高浓度的triton x-100，可以进一步去除未去除的细胞成分，且避免对猪源肌腱样品的结构造成过度损害；脱氧胆酸钠溶液处理有助于去除膜脂质，增强去细胞效果，该浓度能平衡去脂效果与对基质的影响；dnasei酶溶液处理用于降解细胞内的dna，防止后续处理中的免疫反应，酶的浓度选择依据其在特定时间内有效降解dna的能力，确保效率和安全性；100％异丙醇溶液处理用于去除水分并保持去细胞材料的结构。
5、本申请通过设计并比较不同脱细胞方法，优选出综合性能最佳的脱细胞方式；最终稳定工艺，提高治疗效果，为前交叉韧带撕裂患者提供了另一种价格低廉且治疗效果俱佳的人工韧带；上述技术方案对猪源肌腱样品组织上的细胞进行完全去细胞化处理，且条件温和、快速稳定；所得的脱细胞材料，可以模拟天然的肌腱复合肌肉的分层结构、较好的保留了细胞外基质成分、还具有极低的免疫原性，较强的力学性能等优点，可用于人工韧带修复材料。
6、优选地，所述反复冻融处理的具体步骤为：将样品浸入液氮中3-10min，然后在37℃的纯水中解冻5-15min；重复上述步骤共3-6次。
7、优选地，所述0.5v/v％-1.5v/v％的triton x-100溶液处理的具体步骤为：将样品浸泡在0.5v/v％-1.5v/v％的triton x-100溶液中，摇床中搅拌6-12h，并通过超声清洗样品。
8、优选地，所述0.5wt％-1.5wt％的sds溶液处理的具体步骤为：用0.5wt％-1.5wt％的sds溶液清洗样品，搅拌6-12h，并通过超声清洗样品。
9、在一些具体的实施例中，所述sds溶液的浓度可以为0.5wt％-1.0wt％、1.0wt％-1.5wt％。
10、在一个具体的实施例中，所述sds溶液的浓度还可以为0.5wt％、1.0wt％、1.5wt％。
11、优选地，所述1.5v/v％-3v/v％的tritonx-100溶液处理的具体步骤为：将样品置于1.5v/v％-3v/v％的triton x-100溶液中，搅拌8-12h，并通过超声清洗样品。
12、在一些具体的实施例中，所述tritonx-100溶液的浓度可以为1.5v/v％、2.0v/v％、2.5v/v％、2.8v/v％、3v/v％。
13、在一个具体的实施例中，所述tritonx-100溶液的浓度还可以为1.5-2.0v/v％、1.5-2.5v/v％、1.5-2.8v/v％、2.0-2.5v/v％、2.0-2.8v/v％、2.0-3v/v％、2.5-2.8v/v％、2.5-3v/v％、2.8-3v/v％。
14、经过试验分析可知，本申请利用上述浓度的tritonx-100溶液对样品进行处理，可以获得性能更优异的猪源肌腱脱细胞材料。
15、优选地，所述2wt％-3.5wt％的脱氧胆酸钠溶液处理的具体步骤为：用2wt％-3.5wt％的脱氧胆酸钠溶液处理浸泡样品，搅拌6-24h，并通过超声清洗样品。
16、在一些具体的实施例中，所述脱氧胆酸钠溶液的浓度可以为2-2.5wt％、2-2.8wt％、2-3.1wt％、2.5-2.8wt％、2.5-3.1wt％、2.5-3.5wt％、2.8-3.1wt％、2.8-3.5wt％、3.1-3.5wt％；所述搅拌时间可以6-10h、6-16h、6-20h、10-16h、10-20h、10-24h、16-20h、16-24h、20-24h。
17、在一个具体的实施例中，所述脱氧胆酸钠溶液的浓度还可以为2wt％、2.5wt％、2.8wt％、3.1wt％、3.5wt％；所述搅拌时间还可以为6h、10h、16h、20h、24h。
18、经过试验分析可知，本申请利用上述浓度的脱氧胆酸钠溶液对样品进行处理相应的时间，可以获得性能更优异的猪源肌腱脱细胞材料。
19、优选地，所述50-150u/ml的dnasei酶溶液处理的具体步骤为：用50至150u/ml的dnase i酶溶液处理样品6-14h，以去除残留碎片，并通过超声清洗样品。
20、在一些具体的实施例中，所述dnasei酶溶液的浓度可以为50-75u/ml、50-100u/ml、50-125u/ml、75-100u/ml、75-125u/ml、75-150u/ml、100-125u/ml、100-150u/ml、125-150u/ml。
21、在一个具体的实施例中，所述dnasei酶溶液的浓度还可以为50u/ml、75u/m本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，具体包括进行以下步骤：将猪源肌腱样品依次经反复冻融处理、0.5v/v%-1.5v/v%的TritonX-100溶液处理、0.5wt%-1.5wt%的SDS溶液处理、1.5v/v %-3v/v%的TritonX-100溶液处理、2wt%-3.5wt%的脱氧胆酸钠溶液处理、50-150U/mL的DNaseI酶溶液处理、100%异丙醇溶液处理、冷冻干燥后制得。
2.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述反复冻融处理的具体步骤为：将样品浸入液氮中3-10min，然后在37℃的纯水中解冻5-15min；重复上述步骤共3-6次。
3.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述0.5v/v%-1.5v/v%的TritonX-100溶液处理的具体步骤为：将样品浸泡在0.5v/v%-1.5v/v%的TritonX-100溶液中，摇床中搅拌6-12h，并通过超声清洗样品。
4.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述0.5wt%-1.5wt%的
5.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述1.5v/v%-3v/v%的TritonX-100溶液处理的具体步骤为：将样品置于1.5v/v%-3v/v%的Triton X-100溶液中，搅拌8-12h，并通过超声清洗样品。
6.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述2wt%-3.5wt%的脱氧胆酸钠溶液处理的具体步骤为：用2wt%-3.5wt%的脱氧胆酸钠溶液处理浸泡样品，搅拌6-24h，并通过超声清洗样品。
7.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述50-150U/mL的DNaseI酶溶液处理的具体步骤为：用50至150U/mL的DNase I酶溶液处理样品6-14h，以去除残留碎片，并通过超声清洗样品。
8.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述100%异丙醇溶液处理的具体步骤为：将样品浸入100%异丙醇溶液中，在35℃-40℃、200-400rpm条件下脱脂3-6h，并用去离子水超声洗涤。
9.一种猪源肌腱脱细胞材料，其特征在于，利用权利要求1-8任一项所述的制备方法制备得到。
10.权利要求9所述的猪源肌腱脱细胞材料在人工韧带修复材料中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，具体包括进行以下步骤：将猪源肌腱样品依次经反复冻融处理、0.5v/v%-1.5v/v%的tritonx-100溶液处理、0.5wt%-1.5wt%的sds溶液处理、1.5v/v %-3v/v%的tritonx-100溶液处理、2wt%-3.5wt%的脱氧胆酸钠溶液处理、50-150u/ml的dnasei酶溶液处理、100%异丙醇溶液处理、冷冻干燥后制得。
2.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述反复冻融处理的具体步骤为：将样品浸入液氮中3-10min，然后在37℃的纯水中解冻5-15min；重复上述步骤共3-6次。
3.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述0.5v/v%-1.5v/v%的tritonx-100溶液处理的具体步骤为：将样品浸泡在0.5v/v%-1.5v/v%的tritonx-100溶液中，摇床中搅拌6-12h，并通过超声清洗样品。
4.根据权利要求1所述猪源肌腱脱细胞材料的制备方法，其特征在于，所述0.5wt%-1.5wt%的sds溶液处理的具体步骤为：用0.5wt%-1.5wt%的sds溶液清洗样品，搅拌6-12h，并通过超声清洗样品。
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【专利技术属性】
技术研发人员：孔庆俊，黎建波，张耀东，徐倩，
申请(专利权)人：百奥派格重庆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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