【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生殖，具体涉及预测卵细胞拷贝数变异的标志物及其应用。
技术介绍
1、卵细胞质量是评价妇女生育力的基本指标。不同于其他哺乳类动物，人类卵细胞拷贝数异常的比例偏高，这一现象在高生育年龄的妇女(一般指年龄大于35周岁妇女)中尤为明显。卵细胞染色体拷贝数异常将直接导致受精后胚胎发育异常，引起妊娠失败。临床辅助生殖技术首先通过挑选健康的卵细胞通过体外受精获得可以移植的受精卵，因此，有效的预测卵细胞染色体拷贝数，排除异常卵细胞对于辅助生殖技术成功与否至关重要。当前有研究通过高通量测序极体和pgt可以获得卵细胞或者早期胚胎的染色体异常信息，但操作复杂并且费用昂贵。此外，研究报道卵细胞发育过程中的卵泡微环境对卵细胞发育有重要影响，其中颗粒细胞与卵细胞在空间结构上直接接触，颗粒细胞分泌的信号因子和营养物质直接作用于卵细胞，对于卵细胞正常发育和成熟具有关键作用。颗粒细胞出现异常将会导致其分泌的信号因子失衡，进而影响卵细胞的质量。
2、在anderson,r.a.,et al."cumulus gene expression as a predictor ofhuman oocyte fertilisation,embryo development and competence to establishapregnancy."reproduction 138.4(2009):629-637中，研究人员首先明确了使用颗粒细胞评估卵细胞发育潜能的可行性。实验研究从75名参与icsi的妇女中获得了674个coc样本，进一步将颗粒细
3、在assidi,m.,et al."biomarkers of human oocyte developmentalcompetence expressed in cumulus cells before icsi:a preliminary study."journal of assisted reproduction&genetics 28.2(2011):173-188中，作者首先明确了颗粒细胞的形态学特性可以用来反映卵细胞的质量。这些形态学上良好的coc与其妊娠结局相关。进一步通过基因表达芯片方法确定在成功怀孕和怀孕失败的卵细胞所对应的颗粒细胞中的差异表达基因，并筛选出潜在的能够预测卵细胞质量和妊娠结局的颗粒细胞标志物，并进一步通过qpcr验证了颗粒细胞中dpp8、hist1h4c、ubqln1、calm1、nrp1和psmd6的表达水平能够作为评估卵细胞发育潜能的标志物。该文章同样是通过颗粒细胞来预测卵细胞的发育潜能，采用高通量基因表达芯片的检测方法，解决了潜在的可供筛选的基因数目少的问题，但该研究针对卵细胞发育潜能的检测指标仍然较少，仅从怀孕与否评估卵细胞质量相对片面，对卵细胞的生理状态也不明确，文章并未提出通过颗粒细胞检测卵细胞cnv的方法，也没有阐明具体的颗粒细胞对卵细胞功能影响的分子机制。
4、因此，如何得到预测卵细胞拷贝数异常的标志物，以作为临床女性生育能力的评估指标，仍然是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
技术实现思路
1、基于上述原因，本专利技术提出一种预测卵细胞拷贝数变异的标志物及其应用。具体而言，为了实现本专利技术的目的，本专利技术拟采用如下的技术方案：
2、本专利技术涉及一种预测卵细胞拷贝数变异的标志物，所述标志物包括clec11a、p4hb、efemp2、il32、ftl、flna、col6a3、acpp和apoo蛋白的组合。
3、clec11a：该基因编码c型凝集素超家族的成员(c型凝集素结构域家族11，a型)。编码的蛋白质是分泌的硫酸化糖蛋白，充当原始造血祖细胞的生长因子。
4、p4hb：该基因编码脯氨酰4-羟化酶的β亚基，脯氨酰4-羟化酶是一种高度丰富的多功能酶，属于蛋白质二硫键异构酶家族。
5、efemp2：即含有egf的纤维蛋白样细胞外基质蛋白2，该基因编码的蛋白质包含四个egf2结构域和六个钙结合egf2结构域。该基因对于弹性纤维的形成和结缔组织的发育是必需的。该基因的缺陷是常染色体隐性皮肤松弛综合征的原因。
6、il32：该基因编码白细胞介素32，是细胞因子超家族的成员。该蛋白含有一个酪氨酸硫酸化位点、3个潜在的n-肉豆蔻酰化位点、多个假定的磷酸化位点和一个rgd细胞附着序列。在有丝分裂原激活t细胞或il-2激活nk细胞后，该蛋白的表达增加。该蛋白可诱导巨噬细胞产生tnfα。
7、ftl：该基因编码铁蛋白的轻链亚基。铁蛋白是原核生物和真核生物中主要的细胞内铁储存蛋白。
8、flna：即细丝蛋白a基因，该基因编码的蛋白质是肌动蛋白结合蛋白，其交联肌动蛋白丝并将肌动蛋白丝与膜糖蛋白连接。编码的蛋白质参与细胞骨架的重塑，以影响细胞形状和迁移的变化。
9、col6a3：该基因编码vi型胶原蛋白α3链，它是vi型胶原蛋白的三个α链之一，vi型胶原蛋白是一种存在于大多数结缔组织中的珠状丝状胶原蛋白。
10、acpp：即酸性磷酸酶3基因，该基因编码一种酶，可催化正磷酸单酯转化为酒精和正磷酸盐。它是在雄激素调节下合成的，并由前列腺上皮细胞分泌。
11、apoo：该基因是载脂蛋白家族的成员。该蛋白质家族的成员参与脂质的运输和代谢。编码的蛋白质与hdl、ldl和vldl脂蛋白相关，其特征是硫酸软骨素糖基化。这种蛋白质可能参与预防肥胖和糖尿病患者心肌中的脂质积累。
12、在本专利技术的一个优选实施方式中，所述标志物是颗粒细胞中的分泌蛋白。本专利技术在辅助生殖过程中，仅需要患者提供的卵细胞，颗粒细胞不参与辅助生殖技术操作流程而被丢弃，因此,通过评估颗粒细胞中的相关分泌蛋白，可以轻松获得并做相关辅助检测工作。针对检测颗粒细胞任何评估与检测都不会影响到卵细胞，因此通过颗粒细胞去评估卵细胞发育潜能是无创的，不会对辅助生殖结局造成任何不良影响。
13、本专利技术另一方面还涉及上述标志物在制备预测卵细胞拷贝数异常的诊断试剂中的应用。
14、在本专利技术的一个优选实施方式中中，所述诊断试剂用于评估颗粒细胞中的分泌蛋白clec11a、p4hb、efemp2、il32、ftl、flna、col6a3、acpp和apoo本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种预测卵细胞拷贝数变异的标志物，所述标志物包括CLEC11A、P4HB、EFEMP2、IL32、FTL、FLNA、COL6A3、ACPP和APOO蛋白的组合。
2.根据权利要求1所述的标志物，所述标志物是颗粒细胞中的分泌蛋白。
3.权利要求1或2所述的标志物在制备预测卵细胞拷贝数异常的诊断试剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述诊断试剂用于评估颗粒细胞中的分泌蛋白CLEC11A、P4HB、EFEMP2、IL32、FTL、FLNA、COL6A3、ACPP和APOO的表达水平。
5.根据权利要求3所述的应用，所述诊断试剂用于评估女性生育能力。
6.根据权利要求5所述的应用，所述女性为35岁以上的女性。
【技术特征摘要】
1.一种预测卵细胞拷贝数变异的标志物，所述标志物包括clec11a、p4hb、efemp2、il32、ftl、flna、col6a3、acpp和apoo蛋白的组合。
2.根据权利要求1所述的标志物，所述标志物是颗粒细胞中的分泌蛋白。
3.权利要求1或2所述的标志物在制备预测卵细胞拷贝数异常的诊断试剂中的应用。
【专利技术属性】
技术研发人员：宋石，张聪，杨铭，闫丽盈，乔杰，
申请(专利权)人：北京大学第三医院北京大学第三临床医学院，
类型：发明
国别省市：
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