【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物繁殖，具体为一种羊精液稀释液配方及其冷冻方法。
技术介绍
1、在现代畜牧生产中，提高繁殖效率和优化遗传品质是关键目标，对于优质种公羊的精液，其有效的管理和长期保存技术是实现这一目标的重要手段，精液稀释液配方和冷冻方法的研究与应用，不仅能够确保精液的品质与活力，还能够为遗传资源的长期保存和广泛传播提供技术支持，近年来，随着生殖生物学、生物化学以及冷冻技术的快速发展，精液稀释液成分的优化和冷冻保存工艺的改进成为了研究的热点。
2、传统的羊精液稀释液配方和冷冻方法存在诸多不足，一方面，传统稀释液成分较为简单，缺乏针对性的功能性成分，无法满足精子在稀释和冷冻过程中的营养需求，容易导致精子活力下降、存活率降低，另一方面，传统冷冻方法往往缺乏精确的温度控制和振动调节，导致冷冻过程中产生冰晶，损伤精子结构，影响其受精能力，此外，传统技术对于冷冻保护剂的选择和使用也存在一定的盲目性，可能引发精子细胞膜破裂、dna损伤的不利后果。
3、因此，鉴于传统羊精液稀释液配方和冷冻方法存在的缺陷，开发一种羊精液稀释液配方与冷冻方法，通过这些改进，有望显著提高羊精液的冷冻保存效果，为畜牧业的遗传改良和繁殖效率提升提供有力支持。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是为了弥补现有技术的不足，提供了一种羊精液稀释液配方及其冷冻方法，该配方精心配比了功能性氨基酸、生物活性肽、缓冲剂和渗透压调节剂，旨在优化精液的保存环境，通过特定浓度的精氨酸、瓜氨酸的组合，以及昆乳铁蛋白肽、g
2、本专利技术为解决上述技术问题，提供如下技术方案：一方面，一种羊精液稀释液配方，每100ml稀释液的配方为：
3、功能性氨基酸0.28g，生物活性肽0.07g，缓冲剂0.30g，渗透压调节剂4.12g，余量为超纯水
4、所述功能性氨基酸由精氨酸，瓜氨酸，半胱氨酸，甲硫氨酸组成；
5、所述生物活性肽由昆乳铁蛋白肽，gnrha，发胰岛素样生长因子-1组成；
6、所述缓冲剂是tris-hcl缓冲液；
7、所述渗透压调节剂由蔗糖和氯化钠组成。
8、进一步地，所述功能性氨基酸中精氨酸在精子生成和代谢中是能量代谢的关键参与者能够提高精子活力，浓度为5-10mmol/l，瓜氨酸通过精氨酸代琥珀酸合成酶和精氨酸代琥珀酸裂解酶的作用在体内高效转化为精氨酸为精子提供能量底物，浓度为3-8mmol/l，且精氨酸与瓜氨酸的二者比例约为2：1，半胱氨酸通过二硫键的形式参与精子细胞膜蛋白的合成和修饰，增强细胞膜的稳定性，浓度为2-5mmol/l，甲硫氨酸参与精子中多种重要蛋白质的构建，浓度为3-6mmol/l。
9、更进一步地，所述生物活性肽中昆乳铁蛋白肽具有广谱抗菌活性，通过与细菌细胞膜上的特定靶点相互作用，破坏细胞膜的完整性，导致细菌内容物泄漏，从而杀死细菌，浓度为0.5-1mg/ml，gnrha能够促进精子的成熟和发育，提高精子的活力和受精能力，浓度为50-100ng/ml，发胰岛素样生长因子-1能够刺激精子细胞的增殖和分化，提高精子的代谢活性和运动能力，浓度为50-100ng/ml。
10、更进一步地，所述缓冲剂中的tris-hcl缓冲液能够稳定稀释液的酸碱度，抵抗精液中代谢产物和外界因素引起的ph变化，为精子提供一个稳定的生存环境，浓度为20-30mmol/l，ph值在7.2-7.4之间。
11、更进一步地，所述渗透压调节剂中的蔗糖的浓度为80-120mmol/l氯化钠的浓度为100-150mmol/l，共同调节稀释液的渗透压，使其与羊精液的渗透压相近，防止精子因渗透压差异而发生失水或吸水，保持精子的正常形态和功能。
12、另一方面，一种羊精液冷冻方法，该冷冻方法的具体步骤为：
13、s100，精液采集与预处理：通过采精器采集种公羊的精液，将采集到的精液置于32℃的保温容器中，并对精液进行品质检查，完成品质检查后，通过离心机对精液进行离心处理，离心速度为500-800转/分钟，离心时间为10-15分钟，离心过程中保持温度在30-32℃，离心完成后收集沉淀的精子，将精液加入到通过上述权利要求1-5一种羊精液稀释液配方配置的稀释液中，使用旋转混匀器，以30-40转/分钟的速度混匀5-8分钟，使精子均匀分散在稀释液中；
14、s200，冷冻设备准备：准备可编程冷冻仪，冷冻仪的温度控制精度为±0.05℃，范围内控温为-200℃至50℃，振动功能方面，振动频率1-1000hz之间，能够以1hz的精度调节，振幅在0.1-5mm范围内，以0.1mm的精度调整，容量为50-100l的双层真空绝热结构的液氮罐；
15、s300，精液冷冻：将稀释后的精液分装至1.5-2.0ml的塑料冷冻管中，每管分装1.0-1.2ml，放入冷冻仪启动冷冻程序，同时开启低频振动，预先添加在稀释液中的蔗糖和氨基酸类在精子周围形成稳定的渗透压环境，低频振动促进冷冻保护剂在精液中的均匀扩散，使精子接触更充分地，防止冰晶在局部过度聚集，减少精子的脱水损伤，冷冻仪以1-2℃/分钟的速率从30-32℃开始降温，当温度降至-5到-8℃时，用注射泵向每个冷冻管缓慢加渗透性冷冻保护剂溶液，添加完成后继续冷冻，当精液温度接近-0.5到-1.5℃时，启动高频振动，高频振动干扰冰晶的成核过程，促使形成更多晶核，使冰晶生长更细小，同时甘油逐渐渗透到精子内部，发挥保护细胞内结构的作用；
16、s400，深度冷冻与保存：完成高频振动后，继续以2-5℃/分钟的速率降低温度，直至温度降至-80℃，将冷冻管转移至液氮罐中，在液氮面上方保存2-3分钟后，将冷冻管完全浸没在液氮中进行长期保存；
17、s500，冷冻后精子质量检测：定期从液氮中取出冷冻精液样本，使用37-40℃的恒温水浴锅解冻，通过荧光染色法检测精子顶体完整性，同时，进行体外受精实验，评估精子的受精能力。
18、更进一步地，所述s100，精液采集与预处理中精液与稀释液的比例为1：3-1：5。
19、更进一步地，所述s300，精液冷冻中低频振动的振动频率设置为3-7hz，振幅为0.5-1.5mm。
20、更进一步地，所述s300，精液冷冻中渗透性冷冻保护剂溶液为甘油在精液中的浓度达为5-8％v/v。
21、更进一步地，所述s300，精液冷冻中高频振动的频率设置为300-700hz，振幅为0.2-0.8mm，持续时间为3-5分钟。
22、与现有技术相比，该一种羊精液稀释液配方及其冷冻方法具备如下有益效果：
23、一、本专利技术通过精确配比功能性氨基酸、生物活性肽、缓冲剂及渗透压调节剂，显著本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种羊精液稀释液配方，其特征在于，每100mL稀释液的配方为：
2.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所述功能性氨基酸中精氨酸的浓度为5-10mmol/L，瓜氨酸的浓度为3-8mmol/L，且精氨酸与瓜氨酸的二者比例约为2：1，半胱氨酸的浓度为2-5mmol/L、甲硫氨酸的浓度为3-6mmol/L。
3.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所述生物活性肽中昆乳铁蛋白肽的浓度为0.5-1mg/mL，GnRHa的浓度为50-100ng/mL，发胰岛素样生长因子-1的浓度为50-100ng/mL。
4.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所述缓冲剂中的Tris-HCl缓冲液的浓度为20-30mmol/L，pH值在7.2-7.4之间。
5.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所述渗透压调节剂中的蔗糖的浓度为80-120mmol/L氯化钠的浓度为100-150mmol/L。
6.一种羊精液冷冻方法，其特征在于，该冷冻方法的具体步骤为：
7.根据权利要
8.根据权利要求6所述一种羊精液冷冻方法，其特征在于，所述S300，精液冷冻中低频振动的振动频率设置为3-7Hz，振幅为0.5-1.5mm。
9.根据权利要求6所述一种羊精液冷冻方法，其特征在于，所述S300，精液冷冻中渗透性冷冻保护剂溶液为甘油在精液中的浓度达为5-8％v/v。
10.根据权利要求6所述一种羊精液冷冻方法，其特征在于，所述S300，精液冷冻中高频振动的频率设置为300-700Hz，振幅为0.2-0.8mm，持续时间为3-5分钟。
...【技术特征摘要】
1.一种羊精液稀释液配方，其特征在于，每100ml稀释液的配方为：
2.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所述功能性氨基酸中精氨酸的浓度为5-10mmol/l，瓜氨酸的浓度为3-8mmol/l，且精氨酸与瓜氨酸的二者比例约为2：1，半胱氨酸的浓度为2-5mmol/l、甲硫氨酸的浓度为3-6mmol/l。
3.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所述生物活性肽中昆乳铁蛋白肽的浓度为0.5-1mg/ml，gnrha的浓度为50-100ng/ml，发胰岛素样生长因子-1的浓度为50-100ng/ml。
4.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所述缓冲剂中的tris-hcl缓冲液的浓度为20-30mmol/l，ph值在7.2-7.4之间。
5.根据权利要求1所述一种羊精液稀释液配方，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：程明，王莎莎，代永联，刘开东，吕良鹏，戴正浩，娄兰强，
申请(专利权)人：青岛市畜牧工作站青岛市畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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