【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学合成、分子修饰，涉及一种荧光素标记的nrh衍生物、其合成及应用，具体涉及一种能够示踪nrh在细胞内的位置且稳定性较好的化合物、其合成方法及其应用。
技术介绍
1、氢化烟酰胺核糖，简称为nrh，其分子结构式为，是天然存在的一种淡黄色的有机化合物，在谷氨酸棒状杆菌、乳酸杆菌等细菌的代谢物中可少量发现，但含量非常低，低于0.1％。
2、nrh目前主要用作nad+补充剂，其已在生物学和医学检验领域得到非常广泛的应用，但目前nrh在人体内的标记及追踪仍处于探索阶段，研究人员如能通过标记nrh完成对nrh在人体内的追踪，这能够为nrh作用机理研究提供更为准确的依据，故而如何实现nrh在人体内的标记及追踪是当前困扰nrh作用机理研究的一个难题。
3、因此，开发一种能够示踪nrh在细胞内的位置的化合物极具现实意义。
技术实现思路
1、由于现有技术存在上述缺陷，本专利技术提供了，。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、一种荧光素标记的nrh衍生物，其化学结构式如下：
4、；
5、式中，r1为nrh取代基（功能基团），r2为荧光基团，荧光基团的引入是为了增加显色示踪的功能，因此其它带有羧基结构的荧光素应该都是可以的，比如5-羧基荧光素或者6-羧基荧光素。
6、本专利技术未直接将nrh与荧光素连接的原因如下：1）nrh中的伯醇羟基活性低，不管是直接和荧光素实施醇酸缩合成酯，还是和荧光
7、本专利技术在nrh片段及用于显色的荧光素片段之间引入小linker（丙氨酸），将两者连在一起，选择丙氨酸的原因如下：1）新形成的分子并没有把nrh分子结构打开，也没有把荧光素结构打开，完整保存了两者的结构；2）丙氨酸可与底物nrh形成稳定的酯键；3）nrh底物和荧光素如直接通过酯基链接，结构的刚性可能比较大，稳定性差，引入小linker（丙氨酸）后，体系的柔性增加了，会提升结构整体的溶解度和稳定性；4）荧光素和丙氨酸之间形成的是酰胺键，非常稳定，并且形成酰胺键的条件下，荧光素上的酚羟基不会影响反应；5）丙氨酸和荧光素之间是稳定的酯基，但是可以在稍强的碱性溶液下解离，后续实验室也可以根据需要进行解离。
8、作为优选的技术方案：
9、如上所述的一种荧光素标记的nrh衍生物，其化学结构式如下：
10、。
11、本专利技术还提供制备如上所述的一种荧光素标记的nrh衍生物的方法，包括以下步骤：
12、（1）r2-cooh与化合物7b反应制得中间体7，所述化合物7b的结构式为：
13、；
14、（2）烟酰胺核糖氯化物与2,2-二甲氧基丙烷反应制得中间体2；
15、（3）中间体2与碳酸氢钠、乙酸乙酯反应制得中间体3；
16、（4）中间体3与中间体4反应制得中间体5，所述中间体4的结构式为：
17、；
18、当然也可采用常规氨基酸替换中间体4；
19、（5）中间体5与盐酸二氧六环反应制得中间体6，脱除丙氨酸的保护基boc，是在酸性条件下，这不会影响酯基的稳定性；
20、（6）中间体6与中间体7反应制得荧光素标记的nrh衍生物。
21、上述制备方法，工艺简单且反应条件较为温和，应用前景好。
22、作为优选的技术方案：
23、如上所述的方法，步骤（1）中的反应是在有机溶剂中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的催化下进行的，反应条件为25℃、1h；
24、步骤（2）中的反应是在硫酸乙腈混合液中进行的，反应条件为25℃、5h；
25、步骤（3）中的反应是在水溶液中氮气氛围保护下进行的，反应条件为0℃、4h。
26、如上所述的方法，步骤（4）中的反应是在有机溶剂中氮气氛围保护进行的且还添加有4-二甲氨基吡啶和n,n-二环己基碳酰亚胺，反应条件为25℃、12h。
27、如上所述的方法，步骤（5）中的反应是在有机溶剂中进行的，反应条件为25℃、4h。
28、如上所述的方法，步骤（6）中的反应是在有机溶剂中进行的且还添加有n,n-二异丙基乙胺，反应条件为25℃、2h。
29、此外，本专利技术还提供如上所述的荧光素标记的nrh衍生物在化合物标记及追踪中的应用。
30、以上技术方案仅为本专利技术的一种可行的技术方案而已，本专利技术的保护范围并不仅限于此，本领域技术人员可根据实际需求合理调整具体设计。
31、上述专利技术具有如下优点或者有益效果：
32、（1）本专利技术的荧光素标记的nrh衍生物，在nrh片段及用于显色的荧光素片段之间引入小linker（丙氨酸），新形成的分子并没有把nrh分子结构打开，也没有把荧光素结构打开，完整保存了两者的结构；
33、（2）本专利技术的荧光素标记的nrh衍生物，丙氨酸可与底物nrh形成稳定的酯键；
34、（3）本专利技术的荧光素标记的nrh衍生物，引入小linker（丙氨酸）后，体系的柔性增加了，会提升结构整体的溶解度和稳定性；
35、（4）本专利技术的荧光素标记的nrh衍生物，荧光素和丙氨酸之间形成的是酰胺键，非常稳定，并且形成酰胺键的条件下，荧光素上的酚羟基不会影响反应，丙氨酸和荧光素之间是稳定的酯基；
36、（5）本专利技术的荧光素标记的nrh衍生物的制备方法，工艺简单且反应条件较为温和，应用前景好。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种荧光素标记的NRH衍生物，其特征在于，其化学结构式如下：
2.根据权利要求1所述的一种荧光素标记的NRH衍生物，其特征在于，其化学结构式如下：
3.制备如权利要求1~2任一项所述的一种荧光素标记的NRH衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（1）中的反应是在有机溶剂中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的催化下进行的，反应条件为25℃、1h；
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（4）中的反应是在有机溶剂中氮气氛围保护进行的且还添加有4-二甲氨基吡啶和N,N-二环己基碳酰亚胺，反应条件为25℃、12h。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（5）中的反应是在有机溶剂中进行的，反应条件为25℃、4h。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（6）中的反应是在有机溶剂中进行的且还添加有N,N-二异丙基乙胺，反应条件为25℃、2h。
8.如权利要求1~2任一项所述的荧光素标记的NRH衍生物在化合物标记及追踪
...【技术特征摘要】
1.一种荧光素标记的nrh衍生物，其特征在于，其化学结构式如下：
2.根据权利要求1所述的一种荧光素标记的nrh衍生物，其特征在于，其化学结构式如下：
3.制备如权利要求1~2任一项所述的一种荧光素标记的nrh衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（1）中的反应是在有机溶剂中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的催化下进行的，反应条件为25℃、1h；
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：邢雅智，时海波，殷善开，
申请(专利权)人：上海市第六人民医院，
类型：发明
国别省市：
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