【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药的质量检测，特别涉及一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法。
技术介绍
1、樟头红c.reticulate‘zhangshuensis’作为陈皮的栽培变种之一，是江西洲上红桔与当地酸橙天然杂交的良种，属江西樟树市地方性特有陈皮品种。樟头红陈皮于2020年被列入“赣食十味”名单，为药食同源道地药材，既可入药，又能作为茶饮，具有理气健脾，燥湿化痰的功效，市场前景巨大。
2、中药化学成分极其复杂，化学结构多样、极性分布范围广，传统的显微鉴别和理化分析难以表征中药的质量，而多成分的常规定性定量质量控制需要开发多个分析方法、成本高、实施困难。近年来关于樟头红陈皮的uplc指纹图谱和多个黄酮类成分含量测定的文献未有相关报道，目前还没有文献公开将定量指纹图谱方法应用于樟头红陈皮的质量控制中，尚未建立较为系统的质量控制方法，严重制约了樟头红陈皮的产业发展。
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术目的在于提供一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，旨在解决现有技术中开发指纹图谱和多指标成分定量通常需要开发多个分析方法，导致操作方法成本高、推广困难等问题。定量指纹图谱利用一个分析方法同时实现指纹图谱和多指标成分含量测定，显著提高检测效率、降低检测成本。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，具体包括步骤s11至s15。
4、s11：对照品溶液的制
5、s12：供试品溶液的制备：取樟头红陈皮样品适量，精密称定，至具塞锥形瓶中，加入体积浓度为50％～100％甲醇溶剂或体积浓度为50％～100％乙醇溶剂，料液比(样品与甲醇溶剂或乙醇溶剂的比)为1：25～1：500g/ml(优选为1：100～1：150g/ml)，超声或回流处理10～60min，用溶剂补足损失重量，摇匀、离心、取上清液滤过，即得樟头红陈皮供试品溶液；
6、s13：超高效液相色谱(uplc)分析：按照步骤2方法制备3个以上(优选10个以上，更优选20个以上)不同批次樟头红陈皮供试品溶液，分别吸取对照品溶液及供试品溶液，分别注入超高效液相色谱仪，，分别记录对照品和供试品的液相色谱图，并记录对照品与供试品中橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素、5-去甲基川陈皮素的峰面积；
7、s14：指纹图谱的建立：将至少3个以上(优选10个以上)不同批次樟头红陈皮供试品液相色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》，匹配共有峰，得到对照指纹图谱，对共有峰进行指认，建立樟头红陈皮指纹图谱；
8、s15：含量测定方法的建立：根据s13记录得到的各成分的峰面积，通过外标法(其中ai表示样品中的待测成分峰面积，rf表示校正因子，m表示样品称样量)计算樟头红陈皮样品中橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素、5-去甲基川陈皮素的含量；
9、进一步，步骤s11中所述混合对照品溶液浓度分别为每1ml含橙皮苷200～300μg、甜橙黄酮1～10μg、川陈皮素20～60μg、橘皮素10～40μg、5-去甲基川陈皮素1～10μg；
10、进一步，步骤s13中所述超高效液相色谱条件为：色谱柱为zorbax sb-c18(2.1×100mm，1.8μm)，柱温为30～40℃，流速为0.3～0.5ml/min，进样量为0.5～2μl，检测波长为283nm、330nm，以乙腈为流动相a，以体积百分比浓度为0.1～1.0％的甲酸为流动相b进行梯度洗脱，洗脱梯度条件为：0～2min，8％ a；2～10min，8％～18％ a；10～15min，18％～22％a；15～20min，22％～37％ a；20～28min，37％a；28～30min，37％～90％a。
11、进一步，所述步骤s14的对照指纹图谱中的共有峰有21个，其中1号峰为3-o-咖啡酰奎宁酸、2号峰为维采宁-2、3号峰为stellarin-2、4号峰为limonin 17-β-d-glucopyranoside、5号峰为芸香柚皮苷、6号峰为橙皮苷、7号峰为二咖啡酰奎宁酸，8号峰为nomilin17-β-d-glucopyranoside、9号峰为二咖啡酰基奎宁酸甲酯、10号峰为香风草苷、11号峰为natsudaidain-3-o-(5-α-glucosyl-hmg)-β-glucoside、12号峰为羟基-三甲氧基黄酮、13号峰为羟基-四甲氧基黄酮、14号峰为甜橙黄酮、15号峰为6-去甲氧基橘皮素、16号峰为川陈皮素、17号峰为4',5,6,7-四甲氧基黄酮、18号峰为3,3',4',5,6,7,8-七甲氧基黄酮、19号峰为5-羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮、20号峰为橘皮素、21号峰为5-去甲基川陈皮素；
12、进一步，所述步骤s14中樟头红陈皮供试品溶液在330nm波长下色谱图应呈现21个特征峰，其中5个峰应与对照品参照峰保留时间相对应，并以21个共有峰进行相似度计算，供试品色谱与对照图谱的相似度不低于0.95。
13、进一步，所述步骤s15中樟头红陈皮供试品溶液中甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素、5-去甲基川陈皮素的含量按外标法以检测波长330nm下的色谱图中峰面积计算，橙皮苷的含量按外标法以检测波长283nm下的色谱图中峰面积计算。
14、进一步，所述步骤s15中樟头红陈皮供试品溶液中橙皮苷(c28h34o15)不得少于2.59％；含甜橙黄酮(c20h20o7)不得少于0.025％；含川陈皮素(c21h22o8)不得少于0.35％；含橘皮素(c20h20o7)不得少于0.17％；含5-去甲基川陈皮素(c20h20o8)不得少于0.043％。
15、在本专利技术的具体实施方案中，指认21个共有峰，以21个共有峰进行相似度匹配，生成了樟头红陈皮的对照图谱，结合橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素、5-去甲基川陈皮素等5个黄酮类成分含量测定，建立了樟头红陈皮定量指纹图谱。
16、本专利技术通过一次分析可同时实现樟头红陈皮的指纹图谱检测和含量测定，能够快速、全面、准确的评价樟头红陈皮质量，为樟头红陈皮的质量均一提供技术支撑。
17、本专利技术具有以下优点：
18、1.本专利技术提供的樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，通过一次分析可实现樟头红陈皮的指纹图谱检测和5个黄酮类成分含量测定，能够快速、全面、准确的评价樟头红陈皮质量，为樟头红陈皮的质量均一提供技术支撑；
19、2.本专利技术提供的樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，采用国家药典委提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所测指纹图谱进行构建对照指纹图谱，相似度计算，操作方便、快捷，结论客观、准确；
20、3.本专利技术提供的樟头本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述定量指纹图谱检测方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S11的混合对照品溶液中各成分浓度分别为：含橙皮苷200μg/mL～300μg/mL、甜橙黄酮1μg/mL～10μg/mL、川陈皮素20μg/mL～60μg/mL、橘皮素10μg/mL～40μg/mL、5-去甲基川陈皮素1μg/mL～10μg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S12的固液比＝1：100～1：150。
4.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S13中UPLC分析的条件包括：
5.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S13中所述樟头红陈皮供试品溶液不少于10组。
6.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S14的对照指纹图
7.根据权利要求1或6所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S14中，所述樟头红陈皮供试品溶液在330nm波长下色谱图应呈现21个特征峰，其中5个峰与对照品参照峰保留时间相对应，并以21个共有峰进行相似度计算，供试品色谱与对照图谱的相似度不低于0.95。
8.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S15中，所述樟头红陈皮中甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素、5-去甲基川陈皮素的含量按外标法以检测波长330nm下的色谱图中峰面积计算，橙皮苷的含量按外标法以检测波长283nm下的色谱图中峰面积计算。
9.根据权利要求1或8所述的一种樟头红陈皮UPLC定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤S15中，所述樟头红陈皮样品含橙皮苷(C28H34O15)不得少于2.59％；含甜橙黄酮(C20H20O7)不得少于0.025％；含川陈皮素(C21H22O8)不得少于0.35％；含橘皮素(C20H20O7)不得少于0.17％；含5-去甲基川陈皮素(C20H20O8)不得少于0.043％。
...【技术特征摘要】
1.一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述定量指纹图谱检测方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤s11的混合对照品溶液中各成分浓度分别为：含橙皮苷200μg/ml～300μg/ml、甜橙黄酮1μg/ml～10μg/ml、川陈皮素20μg/ml～60μg/ml、橘皮素10μg/ml～40μg/ml、5-去甲基川陈皮素1μg/ml～10μg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤s12的固液比＝1：100～1：150。
4.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤s13中uplc分析的条件包括：
5.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤s13中所述樟头红陈皮供试品溶液不少于10组。
6.根据权利要求1所述的一种樟头红陈皮uplc定量指纹图谱检测方法，其特征在于，所述步骤s14的对照指纹图谱中的共有峰有21个，其中1号峰为3-o-咖啡酰奎宁酸、2号峰为维采宁-2、3号峰为stellarin-2、4号峰为limonin 17-β-d-glucopyranoside、5号峰为芸香柚皮苷、6号峰为橙皮苷、7号峰为二咖啡酰奎宁酸，8号峰为nomilin 17-β-d-glucopyranoside、9号峰为二咖啡酰基奎宁酸甲酯、10号峰为香风草苷、11号峰为natsudaidain-3...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，金红利，徐鑫，艾嘉浩，甘嘉攀，薛倩倩，邹佳芬，张旗，何思思，
申请(专利权)人：赣江中药创新中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。