【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开文本涉及基因疗法的。特别地，本公开文本提供了包含(a)至(c)中的一种或两种的重组腺相关病毒(raav)载体：(a)编码芳族l-氨基酸脱羧酶(aadc)的核苷酸序列；(b)编码葡糖脑苷脂酶(gba1)的核苷酸序列；和(c)编码神经营养因子(ntf)如脑多巴胺神经营养因子(cdnf)或胶质细胞源性神经营养因子(gdnf)的核苷酸序列，所述重组腺相关病毒(raav)载体用于治疗神经退行性障碍，特别是帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、戈谢病(gd)、aadc缺乏症(aadcd)和其他蛋白质病。本文还提供了包含所述raav载体的病毒颗粒、包含所述病毒颗粒的药物组合物及其用途。序列表本公开文本包括作为本公开文本的一部分的序列表。
技术介绍
1、当脑或周围神经系统中的神经细胞逐渐丧失功能并最终死亡时，就会发生神经退行性疾病(nd)，从而导致活动性、协调性、力量、感觉和认知的丧失。由于其缓慢且进展的性质以及缺乏合适的治疗来减缓疾病进展或治愈，nd与巨大的社会经济以及个人成本和痛苦相关。衰老是大多数nd的主要风险因素。随着人们的寿命延长，这意味着未来几十年将有更多的人受到nd的困扰，给我们的社会带来巨大的经济负担，并带来巨大的全球公共健康挑战。
2、由中脑多巴胺能传递的变性引起的并且特征在于运动症状(例如，震颤和强直)和非运动症状(例如，智力落后和抑郁)二者的帕金森病(pd)几乎影响了0.3％的普通人群和约1％的60岁以上的人群(de lau,l.m.和m.m.breteler,epidemiology of parki
3、大多数pd病例是散发性的，并且是由未知因素引起的。只有少数病例具有家族史。目前，已经鉴定了六个特定的人基因组基因座，这些基因座含有这样的基因，这些基因的突变可能导致罕见的家族形式的pd的发作(klein,c.和a.westenberger,genetics ofparkinson's disease.cold spring harb perspect med,2012.2(1):第a008888页)。人们普遍认为，pd的病因是由内在因素(像遗传学)与外在环境因素的复杂相互作用引起的。病理变化及其与pd症状的关系确立已久(kouli,a.,k.m.torsney和w.l.kuan,parkinson'sdisease:etiology,neuropathology,and pathogenesis,parkinson's disease:pathogenesis and clinical aspects,t.b.stoker和j.c.greenland编辑2018:brisbane(au))。pd的病理特征在于黑质致密部(snc)中多巴胺能神经元的变性和丧失以及从snc到纹状体(壳核和尾状核)的多巴胺能途径的丧失，导致纹状体中多巴胺水平降低，从而导致运动功能受损。基于这一知识，已经通过不同的方法开发了几种药物来恢复多巴胺水平。
4、pd的另一个病理标志是在患者的脑中形成路易体(lb)，或所谓的“路易病理学”。含有α-突触核蛋白(α-syn)的lb或路易神经突诱导da神经元和其他神经元亚型内的细胞毒性，并且是主要的pd发病机制之一(teil,m.等人,targeting alpha-synuclein for pdtherapeutics:a pursuit on all fronts.biomolecules,2020.10(3))。目前正在研究靶向路易病理学的多种策略，包括稳定α-syn生理构象、减少α-syn表达、抑制α-syn聚集以及增加α-syn清除。此外，路易病理学不限于多巴胺能回路，而是经由α-syn聚集体的细胞间传播延伸到其他脑区，这可能是导致非运动pd症状的机制之一。因此，从理论上讲，解决α-syn聚集的治疗性治疗可能有益于pd患者的运动功能和非运动功能二者。
5、在目前可用的治疗中，l-dopa(左旋多巴)在治疗一些pd患者的运动症状方面是有效的。但是l-dopa在治疗非运动症状或晚期pd患者方面具有有限的效果。此外，已表明当以高剂量服用时l-dopa可能会引起严重的副作用(zahoor,i.,a.shafi和e.haq,pharmacological treatment of parkinson's disease,parkinson's disease:pathogenesis and clinical aspects,t.b.stoker和j.c.greenland编辑2018:brisbane(au))。其他治疗(如深部脑刺激)仅能改善症状，但是不能阻止疾病的进展(dallapiazza,r.f.等人,considerations for patient and target selection in deep brainstimulation surgery for parkinson's disease,parkinson's disease:pathogenesisand clinical aspects,t.b.stoker和j.c.greenland编辑2018:brisbane(au))。因此，迫切需要针对pd的更好的治疗。
6、目前正在研究的生物pd治疗可以分为三种类型。1)通过调节神经元信号传导来修复神经递质失衡。例如，通过病毒载体(例如，aav2-aadc)递送aadc(参与多巴胺合成的酶)的基因疗法(cn 107106689a，在https://clinicaltrials.gov/ct2/show/nct03065192？term＝aa dc&cond＝pd&draw＝2&rank＝8的相关临床试验)和基于慢病毒的基因疗法(prosavin)在早期临床试验中显示出有希望的结果，其中患者的运动功能得到了轻微改善。2)通过表达神经营养因子和再生因子来提高神经元的存活。例如，神经营养因子(gdnf)(在https://clinical trials.gov/ct2/show/nct04167540？term＝gdnf&cond＝pd&draw＝2&rank＝1的临床试验)和神经秩蛋白(nrtn)(在https://clinicaltrials.gov/ct2/show/nct00985517？term＝neurturin&draw＝2&rank＝1的临床试验)有益于多巴胺能中脑中的神经元的存活。3)通过靶向疾病相关基因或基因突变，例如α突触核蛋白(snca)、葡糖脑苷脂酶(gba1)(在https://clinicaltrials.g ov/ct2/show/nct04127578？term＝gba1&cond＝parkinson+disease&draw＝2&rank＝1的临床试验)和富含亮氨酸的重复激酶2(lrrk2)。旨在编辑基因和/或调节基因表达的几种本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含编码第一蛋白质的第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列与编码第二蛋白质的第二核苷酸序列可操作地连接，其中所述第一蛋白质和所述第二蛋白质选自以下组合(a)至(i)：
2.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述第一核苷酸序列在所述第二核苷酸序列的5’上游。
3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸分子，所述分离的核酸分子的特征在于：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述第一核苷酸序列和/或所述第二核苷酸序列是野生型编码序列或经密码子优化的编码序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的核酸分子，当所述第一蛋白质是人ADCC时，所述第一核苷酸序列包含或是选自如SEQ ID NO:1-9、11或46中任一个中所示的核苷酸序列的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的分离的核酸分子，其中编码人AADC的所述核苷酸序列是具有如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:46中所示的核苷酸序列的AADC的经密码子优化的编码序列。
<...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含编码第一蛋白质的第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列与编码第二蛋白质的第二核苷酸序列可操作地连接，其中所述第一蛋白质和所述第二蛋白质选自以下组合(a)至(i)：
2.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述第一核苷酸序列在所述第二核苷酸序列的5’上游。
3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸分子，所述分离的核酸分子的特征在于：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述第一核苷酸序列和/或所述第二核苷酸序列是野生型编码序列或经密码子优化的编码序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的核酸分子，当所述第一蛋白质是人adcc时，所述第一核苷酸序列包含或是选自如seq id no:1-9、11或46中任一个中所示的核苷酸序列的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的分离的核酸分子，其中编码人aadc的所述核苷酸序列是具有如seq id no:3、seq id no:9或seq id no:46中所示的核苷酸序列的aadc的经密码子优化的编码序列。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的分离的核酸分子，当所述第一蛋白质或所述第二蛋白质是人gba1时，其中所述第一核苷酸序列或所述第二核苷酸序列包含或是选自如seqid no:12-20、22、45或47中任一个中所示的核苷酸序列的核苷酸序列。
8.根据权利要求7所述的分离的核酸分子，其中编码人gba1的所述核苷酸序列是具有如seq id no:15、seq id no:16、seq id no:20、seq id no:45或seq id no:47中所示的核苷酸序列的gba1的经密码子优化的编码序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的分离的核酸分子，当所述第二蛋白质是人cdnf时，其中所述第二核苷酸序列包含或是选自如seq id no:23-26中任一个中所示的核苷酸序列的核苷酸序列。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码人cdnf的所述核苷酸序列是cdnf的经密码子优化的编码序列，并且在所述经密码子优化的编码序列与如seqidno:26中所示的cdnf的野生型编码序列之间的不同核苷酸不存在于编码cdnf的信号肽的区域中。
11.根据权利要求10所述的分离的核酸分子，其中编码人cdnf的所述核苷酸序列是cdnf的经密码子优化的编码序列，并且与如seq id no:26中所示的cdnf的野生型编码序列相比具有减少的cpg位点或不具有cpg岛。
12.根据权利要求11所述的分离的核酸分子，其中编码人cdnf的所述核苷酸序列是具有如seq id no:23-25中任一个中所示的核苷酸序列的cdnf的经密码子优化的编码序列。
13.根据权利要求12所述的分离的核酸分子，其中编码人cdnf的所述核苷酸序列是具有如seq id no:25中所示的核苷酸序列的cdnf的经密码子优化的编码序列。
14.根据权利要求1-8中任一项所述的分离的核酸分子，当所述第二蛋白质是人gdnf时，其中所述第二核苷酸序列包含或是选自如seq id no:27-30中任一个中所示的核苷酸序列的核苷酸序列。
15.根据权利要求1-8中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码人gdnf的所述核苷酸序列是gdnf的经密码子优化的编码序列，并且在所述经密码子优化的编码序列与如seqidno:30中所示的gdnf的野生型编码序列之间的不同核苷酸不存在于编码gdnf的信号肽或前肽的区域中。
16.根据权利要求15所述的分离的核酸分子，其中编码人gdnf的所述核苷酸序列是gdnf的经密码子优化的编码序列，并且与如seq id no:30中所示的gdnf的野生型编码序列相比具有减少的cpg位点或不具有cpg岛。
17.根据权利要求16所述的分离的核酸分子，其中编码人gdnf的所述核苷酸序列是具有如seq id no:27-29中任一个中所示的核苷酸序列的gdnf的经密码子优化的编码序列。
18.根据权利要求17所述的分离的核酸分子，其中编码人gdnf的所述核苷酸序列是具有如seq id no:29中所示的核苷酸序列的gdnf的经密码子优化的编码序列。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列在框内连接，并且与位于所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列二者的5’上游的启动子可操作地连接。
20.根据权利要求19所述的分离的核酸分子，其中所述启动子选自cbh启动子、ef1α启动子、cag启动子、mbp启动子或其变体。
21.根据权利要求20所述的分离的核酸分子，其中所述启动子是具有seq id no:50-56中任一个的核苷酸序列的ef1α启动子的截短变体。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的分离的核酸分子，所述分离的核酸分子进一步包含在所述第一核苷酸序列与所述第二核苷酸序列之间的接头序列。
23.根据权利要求22所述的分离的核酸分子，其中所述接头序列是自切割肽或内部核糖体进入位点的编码序列。
24.根据权利要求23所述的分离的核酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶冶铮，田幸雪，赵小平，
申请(专利权)人：上海天泽云泰生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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