【技术实现步骤摘要】
本申请涉及细胞培养，特别涉及柠檬酸在促进脂肪干细胞成软骨诱导分化方面的应用。
技术介绍
1、软骨是一种在关节中提供缓冲和润滑的功能的结缔组织，其损伤或退变会导致疼痛和运动受限。传统的软骨修复方法存在诸多限制，如自体软骨细胞移植的供体部位损伤和异体移植的免疫排斥问题。因此，寻找一种有效的软骨修复策略是医学研究的重要方向。
2、脂肪干细胞(adscs)因其来源广泛、免疫原性低、多向分化潜能和自我更新能力等优点，成为再生医学领域的研究热点。adscs能够在特定条件下分化成多种细胞系，包括成骨细胞、软骨细胞和成脂细胞等。然而，adscs向软骨细胞的分化效率和质量受到多种因素的影响，其中分化诱导剂的选择尤为关键。在现有的技术中，常用的分化诱导剂包括地塞米松、转化生长因子-β(tgf-β)和骨形态发生蛋白(bmps)等。这些诱导剂在一定程度上能够促进adscs的软骨分化，但也存在一些问题，如分化效率不高。
3、柠檬酸作为一种天然存在的有机酸，广泛存在于柠檬和其他柑橘类水果中。柠檬酸不仅在食品和制药工业中具有广泛的应用，还具有调节细胞代谢、促进细胞增殖和分化的生物学功能。近年来的研究发现，柠檬酸通过影响细胞内ph值、调节代谢途径和激活信号传导等机制，能够促进多种干细胞的分化。柠檬酸能够通过调节细胞内钙离子浓度和ph值，促进间充质干细胞(mscs)向成骨细胞分化。在神经干细胞(nscs)中，柠檬酸通过激活mtor信号通路，促进其向神经元和胶质细胞分化。柠檬酸具有抗氧化性质，能够减少氧化应激对干细胞的损伤，并通过调节炎症因
4、尽管柠檬酸在促进干细胞分化方面的研究取得了一定的进展，但其在促进adscs成软骨分化方面的研究还相对较少。因此，开展柠檬酸促进adscs成软骨分化的机制研究和优化其应用方法，对于开发新的软骨修复策略具有重要的科学意义。如何提高软骨细胞的特异性基因的表达量、进一步提高分化效率，亦成为临床中需要解决的问题。
技术实现思路
1、本申请提出柠檬酸在促进脂肪干细胞成软骨诱导分化方面的应用，其中，所述柠檬酸的化学结构式为
2、本申请还提出促进脂肪干细胞成软骨诱导分化用培养液，所述培养液中含有柠檬酸，所述培养液中柠檬酸的浓度为0.5-2mm。
3、其中，所述培养液中还含有bmp-6、tgf-β1、igf-1，bmp-6的浓度为480-520μg/l，tgf-β1的浓度为9-11μg/l，igf-1的浓度为95-105μg/l。
4、其中，所述培养液还包括6-6.5μg/l胰岛素、48-52nm/l-抗坏血酸、95-105nm/l地塞米松、98-102μg/ml青霉素、98-102μg/ml链霉素、9-11％fbs的高糖dmem培养基。
5、本申请还提出一种促进脂肪干细胞成软骨诱导分化的方法，包括以下步骤：
6、将脂肪干细胞在促进脂肪干细胞成软骨诱导分化的培养基中培养，得到骨分化细胞，所述骨分化细胞为成软骨细胞；
7、所述培养基以成软骨诱导培养基为基础培养基，所述培养基中还包括柠檬酸，所述柠檬酸的浓度为0.5-2mm。
8、其中，所述基础培养基为高糖dmem培养基，所述培养基中培养液还包括6-6.5μg/l胰岛素、48-52nm/l-抗坏血酸、95-105nm/l地塞米松、98-102μg/ml青霉素、98-102μg/ml链霉素、9-11％fbs。
9、其中，所述脂肪干细胞由无菌获取的脂肪组织经消化、清洗、传代培养后获得。
10、其中，当原代细胞的融合度达到80％时，进行传代培养，传代培养时需每3天更换一次培养液，培养至第三代，经计数后采用流式细胞仪检测分析，获取脂肪干细胞。
11、本申请利用含有柠檬酸的培养液培养脂肪干细胞，可使细胞获得充足的营养，有利于细胞增殖和分化，生物相容性好，可降解，延长细胞存活时间，维持细胞形态，提高脂肪干细胞的增殖能力，上调软骨细胞的特异性基因的表达量，提高分化效率。
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1.柠檬酸在促进脂肪干细胞成软骨诱导分化方面的应用，其中，所述柠檬酸的化学结构式为
2.一种促进脂肪干细胞成软骨诱导分化用培养液，其特征在于，所述培养液中含有柠檬酸，所述培养液中柠檬酸的浓度为0.5-2mM。
3.根据权利要求2所述的促进脂肪干细胞成软骨诱导分化用培养液，其特征在于，所述培养液中还含有BMP-6、TGF-β1、IGF-1，BMP-6的浓度为480-520μg/L，TGF-β1的浓度为9-11μg/L，IGF-1的浓度为95-105μg/L。
4.根据权利要求3所述的促进脂肪干细胞成软骨诱导分化用培养液，其特征在于，所述培养液还包括6-6.5μg/L胰岛素、48-52nM/L-抗坏血酸、95-105nM/L地塞米松、98-102μg/mL青霉素、98-102μg/mL链霉素、9-11％FBS的高糖DMEM培养基。
5.一种促进脂肪干细胞成软骨诱导分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的促进脂肪干细胞成软骨诱导分化的方法，其特征在于，所述基础培养基为高糖DMEM培养基，所述培养基中培养
7.根据权利要求5所述的促进脂肪干细胞成软骨诱导分化的方法，其特征在于，所述脂肪干细胞由无菌获取的脂肪组织经消化、清洗、传代培养后获得。
8.根据权利要求7所述的促进脂肪干细胞成软骨诱导分化的方法，其特征在于，当原代细胞的融合度达到80％时，进行传代培养，传代培养时需每3天更换一次培养液，培养至第三代，经计数后采用流式细胞仪检测分析，获取脂肪干细胞。
...【技术特征摘要】
1.柠檬酸在促进脂肪干细胞成软骨诱导分化方面的应用，其中，所述柠檬酸的化学结构式为
2.一种促进脂肪干细胞成软骨诱导分化用培养液，其特征在于，所述培养液中含有柠檬酸，所述培养液中柠檬酸的浓度为0.5-2mm。
3.根据权利要求2所述的促进脂肪干细胞成软骨诱导分化用培养液，其特征在于，所述培养液中还含有bmp-6、tgf-β1、igf-1，bmp-6的浓度为480-520μg/l，tgf-β1的浓度为9-11μg/l，igf-1的浓度为95-105μg/l。
4.根据权利要求3所述的促进脂肪干细胞成软骨诱导分化用培养液，其特征在于，所述培养液还包括6-6.5μg/l胰岛素、48-52nm/l-抗坏血酸、95-105nm/l地塞米松、98-102μg/ml青霉素、98-102μg/ml链霉素、9-11％fbs的高糖dmem培养基。...
【专利技术属性】
技术研发人员：李帅军，商婷，颜学术，
申请(专利权)人：普纳思细胞厦门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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