【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药领域，尤其是涉及一种自启动的焦亡诱导剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、焦亡是一种程序性细胞死亡的方式，属于炎症性细胞死亡的范畴。其主要特征是依赖于炎症小体的激活和炎症性半胱天冬酶(如半胱天冬酶-1)的活化，最终导致细胞膜破裂并释放细胞内容物，从而引发炎症反应。在焦亡过程中，活化的半胱天冬酶切割gasdermin，释放出的n-端片段转移到细胞膜，形成孔洞，导致细胞膨胀和溶解。作为一种免疫原性的细胞死亡形式，肿瘤细胞的焦亡促使肿瘤抗原和促炎性损伤相关分子模式(damps)，如hmgb1和atp等释放，增加了抗原呈递机会，并有助于逆转肿瘤的免疫抑制微环境。因此，焦亡在激发抗肿瘤免疫反应的研究中展现出巨大的潜力。
2、放疗和化疗可以通过gsdme途径诱导焦亡，然而，此种情况下，细胞在经历焦亡时，通常与凋亡相关的半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-8也会被激活，而伴随的凋亡过程并不具备焦亡的特异性，也难以引发强烈的免疫反应，因此这种焦亡诱导方式效果并不理想。此外，通过半胱天冬酶-1和gsdmd介导的经典途径虽然是一种常见的焦亡诱导机制，但该途径依赖模式识别受体(prrs)，如tlr和nlrp3的激活，而这些受体主要在免疫细胞中表达，在肿瘤细胞中的表达较为有限，因此，导致这一经典途径在肿瘤细胞中的焦亡诱导效率低下。因此，如何有效地在肿瘤细胞中诱导焦亡以强效激发抗肿瘤免疫反应，仍然是一个重大挑战。
3、除了经典的半胱天冬酶-1的切割外，gsdmd还可以通过非经典途径，由半胱天冬酶-4/5(小鼠中对应半胱天
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对上述问题，提供一种自启动焦亡诱导剂；
2、提供自启动焦亡诱导剂的制备方法；
3、并提出自启动焦亡诱导剂在制备抗肿瘤免疫疗法药物的应用。
4、一种自启动焦亡诱导剂，包括二氧化锰纳米酶(mnnz)和将二氧化锰纳米酶包覆的外膜囊泡(omv)。
5、在上述的自启动焦亡诱导剂中，所述的二氧化锰纳米酶为尖刺状，所述外膜囊泡被包覆在尖刺状二氧化锰纳米酶的表面。
6、在上述的自启动焦亡诱导剂中，所述的外膜囊泡从大肠杆菌中提取，且膜内含有脂多糖(lps)；
7、使用油酸还原高锰酸钾得到所述的尖刺状二氧化锰纳米酶。
8、在上述的自启动焦亡诱导剂中，所述的外膜囊泡的平均尺寸为(28±2)nm，且最大不超过35nm，最小不低于20nm；
9、所述的二氧化锰纳米酶的平均尺寸为(157±5)nm，且最大不超过165nm，最小不低于150nm。
10、在上述的自启动焦亡诱导剂中，自启动焦亡诱导剂的尺寸为(200±5)nm，且最大不超过210nm，最小不低于190nm。
11、所述的自启动焦亡诱导剂在制备抗肿瘤免疫疗法药物的应用。
12、在上述的自启动焦亡诱导剂在抗肿瘤免疫疗法药物的应用中，抗肿瘤免疫疗法所对抗的肿瘤细胞具有高水平的谷胱甘肽，高于1毫摩尔每升；
13、抗肿瘤免疫疗法所对抗的肿瘤细胞具有高水平的过氧化氢，高于100微摩尔每升。
14、在上述的自启动焦亡诱导剂在抗肿瘤免疫疗法药物的应用中，自启动焦亡诱导剂启动抗肿瘤免疫的机制如下：
15、自启动焦亡诱导剂被给药至肿瘤组织并被肿瘤细胞内吞后响应于肿瘤细胞内的高水平谷胱甘肽而被降解；
16、在谷胱甘肽的作用下，自启动焦亡诱导剂释放锰离子和外膜囊泡组分；
17、锰离子催化活性氧的生成从而触发nf-κb向肿瘤细胞核内转移；
18、nf-κb向肿瘤细胞核内转移诱导半胱天冬酶-4/5/11的基因表达；
19、与此同时，被表达的半胱天冬酶-4/5/11被先前释放的外膜囊泡组分激活；
20、激活的半胱天冬酶-4/5/11切割gsdmd蛋白，引发肿瘤细胞焦亡。
21、一种自启动焦亡诱导药物的制备方法，该方法包括：
22、从大肠杆菌中提取外膜囊泡；
23、将外膜囊泡包覆在尖刺状二氧化锰纳米酶的表面得到能够自启动焦亡的焦亡诱导剂。
24、在上述的自启动焦亡诱导药物的制备方法中，具体包括：
25、使用油酸还原高锰酸钾得到平均尺寸为(157±5)nm的所述尖刺状二氧化锰纳米酶；
26、从大肠杆菌中提取平均尺寸为(28±2)nm的所述外膜囊泡；
27、使用超声法将所述外膜囊泡包覆在尖刺状二氧化锰纳米酶上形成尺寸为(200±5)nm的所述自启动焦亡诱导药物。
28、本专利技术的优点在于：
29、本方案聚焦于半胱天冬酶-4/5(小鼠中对应半胱天冬酶-11)来诱导肿瘤细胞的焦亡，结果显示其具有较高的效力和特异性，为肿瘤免疫治疗提供了新思路和新方向；
30、本方案提出mnnz和omv的结合，通过omv包覆mnnz来自启动焦亡诱导剂，可保护mnnz在肿瘤细胞摄取前不被清除，从而保证自启动焦亡诱导剂在谷胱甘肽水平较高的肿瘤细胞内才会被分解释放锰离子和omv，保证药物的特异性和强效性；
31、本方案所提供的自启动焦亡诱导剂中，omv本身含有lps等成分，可以直接激活半胱天冬酶-4/5/11，与mnnz催化肿瘤细胞内过氧化氢生成的活性氧ros产生协同效应，高效地诱导肿瘤细胞焦亡；
32、本方案所提供的自启动焦亡诱导剂在进行肿瘤细胞焦亡的过程中不依赖模式识别受体prrs，由其释放的omv来激活半胱天冬酶-4/5/11，因此能够保证激活效率，并且，这一过程利用了肿瘤细胞较高的谷胱甘肽水平，通过一系列的反应上调半胱天冬酶-4/5/11的前体表达，为后续的激活提供物质基础，从而保证焦亡的特异性和强效性。
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1.一种自启动焦亡诱导剂，其特征在于，包括二氧化锰纳米酶和将二氧化锰纳米酶包覆的外膜囊泡。
2.根据权利要求1所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，所述的二氧化锰纳米酶为尖刺状二氧化锰纳米酶，所述外膜囊泡被包覆在尖刺状二氧化锰纳米酶的表面。
3.根据权利要求2所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，所述的外膜囊泡从大肠杆菌中提取，且膜内含有脂多糖；
4.根据权利要求3所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，所述的外膜囊泡的平均尺寸为(28±2)nm，且最大不超过35nm，最小不低于20nm；
5.根据权利要求4所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，自启动焦亡诱导剂的尺寸为(200±5)nm，且最大不超过210nm，最小不低于190nm。
6.权利要求1-5任意一项所述的自启动焦亡诱导剂在制备抗肿瘤免疫疗法药物的应用。
7.根据权利要求6所述的自启动焦亡诱导剂在抗肿瘤免疫疗法药物的应用，其特征在于，抗肿瘤免疫疗法所对抗的肿瘤细胞具有高水平的谷胱甘肽；
8.根据权利要求7所述的自启动焦亡诱导剂在抗肿瘤免疫疗法药物
9.一种自启动焦亡诱导药物的制备方法，其特征在于，该方法包括：
10.根据权利要求9所述的自启动焦亡诱导药物的制备方法，其特征在于，具体包括：
...【技术特征摘要】
1.一种自启动焦亡诱导剂，其特征在于，包括二氧化锰纳米酶和将二氧化锰纳米酶包覆的外膜囊泡。
2.根据权利要求1所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，所述的二氧化锰纳米酶为尖刺状二氧化锰纳米酶，所述外膜囊泡被包覆在尖刺状二氧化锰纳米酶的表面。
3.根据权利要求2所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，所述的外膜囊泡从大肠杆菌中提取，且膜内含有脂多糖；
4.根据权利要求3所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，所述的外膜囊泡的平均尺寸为(28±2)nm，且最大不超过35nm，最小不低于20nm；
5.根据权利要求4所述的自启动焦亡诱导剂，其特征在于，自启动焦亡诱导剂的尺寸...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜阳，王伟林，毛峥伟，丁元，李彦捷，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：
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