一种用于组织结核分枝杆菌16S rRNA检测试剂盒及其应用制造技术

技术编号：44351256 阅读：0 留言：0更新日期：2025-02-25 09:36

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，特别涉及一种用于组织结核分枝杆菌16S rRNA检测试剂盒及其应用。本发明专利技术根据结核分枝杆菌16S rRNA为靶点设计得到16条探针，并依据所述探针建立检测结核分枝杆菌的原位杂交方法。该方法相比于临床检测方法而言，具有更高阳性率、灵敏度和特异性，可实现感染患者的早期检测，为有效治疗提供借鉴。

全部详细技术资料下载

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测，特别涉及一种用于组织结核分枝杆菌16s rrna检测试剂盒及其应用。

技术介绍

1、结核病是由结核分枝杆菌(简称结核菌)引起的慢性传染病，目前仍然是危害全球的重大公共卫生问题。准确、持续检测结核菌对于结核病诊断和治疗至关重要。当前，结核病确诊最常用方法是痰液病原学检测。结核菌培养仍然是结核病诊断金标准，但培养需要时间长。分子检测方法如genexpert、tb-dna具有高度敏感性，适合少菌标本。γ-干扰素释放试验(igra)广泛用于全血，但无法区分活动性结核或潜伏感染。尽管上述方法具有重要的诊断效用，但缺乏能持续检测组织内结核菌活菌、死菌及其残留物的技术，限制了对体内结核菌感染引起的生理学以及宿主细胞和结核病灶内结核菌空间分布的研究。此外，由于不同疫情的影响和影像学普及程度、分辨率的提高，后疫情时代不明原因的肺部结节多见，如何鉴别肺结节病因是困惑临床医生的重要难题。

2、出于临床诊断和研究目的，痰液、穿刺活检、切除标本或尸检组织中结核菌的鉴定依赖于ziehl-neelsen(zn)抗酸染色后显微镜观察。然而，结核菌耐酸性变化很大，抗酸特性非结核菌所特有，且结核菌存在完全、部分和非抗酸状态，因此抗酸性无法指示其死活状态，容易造成假阴性从而延迟治疗干预。此外，有研究表明结核菌可控制其生长过程中释放到胞内和组织中mrna的衰减率，并且在治疗6-9个月后组织中检测到结核菌mrna。因此，开发新的活动性结核病的诊断和鉴别技术，对减少诊断延迟、减轻疾病的传播和最大程度地降低结核病流行率至关重要。

<br/>

技术实现思路

1、针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术提供了一种用于组织结核分枝杆菌16srrna检测试剂盒及其应用。本专利技术是根据结核分枝杆菌16s rrna为靶点设计得到16条探针，并依据所述探针建立检测结核分枝杆菌的原位杂交方法。该方法相比于临床检测方法而言，具有更高阳性率、灵敏度和特异性，可实现感染患者的早期检测，为有效治疗提供借鉴。

2、本专利技术的目的之一在于提供一种用于检测结核分枝杆菌16s rrna的探针组，该探针组包括16条探针，其序列如seq id no.1-16所示。

3、优选地，所述探针是针对结核分枝杆菌16s rrna(ky084558.1)为靶点设计得到。

4、优选地，每条探针5'端被标记分子修饰，标记分子包括地高辛、生物素、辣根过氧化物酶中的至少一种。

5、另一方面，本专利技术还提供了一种用于检测结核分枝杆菌16s rrna的试剂盒，该试剂盒包括所述检测探针组。

6、优选地，所述试剂盒还包括：内源性酶抑制剂、10×修复液、杂交液、底物及底物稀释液、100×消化液和/或50×清洗缓冲液中的一种或多种。

7、优选地，所述试剂盒中的内源性酶抑制剂的组分包括3％双氧水，0.5m磷酸盐。

8、优选地，所述试剂盒中的10×修复液的组分包括0.1m枸橼酸钠缓冲溶液。

9、优选地，所述试剂盒中的杂交液包括：杂交液1、杂交液2、杂交液3、杂交液4和杂交液5；其中，杂交液1含有6×柠檬酸钠缓冲液(ssc)、40wt％甲酰胺、50mg/μl肝素、1mg/mltrna、0.2wt％十二烷基硫酸钠(sds)；

10、杂交液2含有5×ssc、40wt％甲酰胺、0.2wt％sds；

11、杂交液3含有4×ssc、40wt％甲酰胺、0.3wt％sds；

12、杂交液4含有3×ssc、40wt％甲酰胺、0.2wt％sds；

13、杂交液5含有2×ssc、40wt％甲酰胺、0.3wt％sds。

14、优选地，所述试剂盒中的底物为dab(3,3-二氨基联苯胺)或aec(3-氨基-9-乙基咔唑)，底物稀释液包括3％双氧水。

15、优选地，所述试剂盒中的100×消化液为250g/l的胃酶；

16、优选地，所述试剂盒中的50×清洗缓冲液为tbst缓冲液，其由tris-hcl、nacl和吐温20配制得到。

17、优选地，所述试剂盒的检测对象包括肺部有结节人群以及疑似感染细菌(结核菌、非结核分枝杆菌)或真菌等临床无法诊断结核病人群。

18、优选地，所述试剂盒的检测样本为经手术或肺穿刺获得的组织。

19、另一方面，本专利技术还提供了所述探针组在制备检测结核分枝杆菌16srrna的试剂盒中的用途。

20、本专利技术的优点如下：本专利技术是根据结核分枝杆菌16s rrna为靶点设计得到16条探针，并依据所述探针建立检测结核分枝杆菌的原位杂交方法。该方法相比于临床检测方法而言，具有更高阳性率、灵敏度和特异性，可实现感染患者的早期检测，为有效治疗提供借鉴。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测结核分枝杆菌16S rRNA的探针组，其特征在于，该探针组包括16条探针，其序列如SEQ ID NO.1-16所示。

2.如权利要求1所述的探针组，其特征在于，所述探针是针对结核分枝杆菌16S rRNA为靶点设计得到。

3.一种用于检测结核分枝杆菌16S rRNA的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1-2任一项所述检测探针组。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：内源性酶抑制剂、10×修复液、杂交液、底物及底物稀释液、100×消化液和/或50×清洗缓冲液中的一种或多种；

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的杂交液包括：杂交液1、杂交液2、杂交液3、杂交液4和杂交液5；其中，杂交液1含有6×柠檬酸钠缓冲液、40wt％甲酰胺、50mg/μL肝素、1mg/mL tRNA和0.2wt％十二烷基硫酸钠；

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的底物为3,3-二氨基联苯胺或3-氨基-9-乙基咔唑，底物稀释液包括3％双氧水。

7.如权利要求4

8.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的50×清洗缓冲液为TBST缓冲液，其由Tris-HCl、NaCl和吐温20配制得到。

9.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测对象包括肺部有结节人群以及疑似感染细菌或真菌的临床无法诊断结核病人群。

10.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测样本为经手术或肺穿刺获得的组织。

...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测结核分枝杆菌16s rrna的探针组，其特征在于，该探针组包括16条探针，其序列如seq id no.1-16所示。

2.如权利要求1所述的探针组，其特征在于，所述探针是针对结核分枝杆菌16s rrna为靶点设计得到。

3.一种用于检测结核分枝杆菌16s rrna的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1-2任一项所述检测探针组。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的杂交液包括：杂交液1、杂交液2、杂交液3、杂交液4和杂交液5；其中，杂交液1含有6×柠檬酸钠缓冲液、40wt％...

【专利技术属性】
技术研发人员：代友超，张惠华，肖艳华，宁雨平，余清，王岳刚，
申请(专利权)人：广州医科大学附属市八医院，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人