【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于共价药物设计，具体涉及一种靶向hces2a的共价抑制剂、其制备方法及其用途。
技术介绍
1、伊立替康(irinotecan,cpt-11)是一种抗癌化疗药物，静脉注射的伊替利康经血液进入人体后，可经肝脏中hces2a转化成为具有抗肿瘤能力的活性代谢产物sn-38(7-乙基-l0-羟基喜树碱)。然而，由于人体肠道中hces2a表达造成的严重迟发性腹泻，使伊替利康无法通过口服给药。因此，良好的hces2a抑制剂可以改善伊立替康口服给药引发的肠道毒性，减轻肿瘤患者的痛苦。
2、从药物发现和应用的角度来看，理想的hces2a抑制剂应该具有以下特征：高特异性、强效、低毒性、细胞通透性(能够进入细胞并阻断细胞内hces2a)和可接受的代谢稳定性。然而，大多数报道的hces2a抑制剂，特别是黄酮类、查尔酮类、三萜类和丹参酮类等具有天然骨架结构的化合物仅仅表现出中等的抑制能力、较差的特异性、低细胞通透性和不可接受的代谢稳定性。
3、共价抑制剂，也称不可逆抑制剂，是一类有机小分子，能与特定的靶蛋白相互作用并形成共价键，导致蛋白质构象的改变，从而抑制蛋白质的活性。共价抑制剂具有较高的生化效率、作用较强并且持久的优点，同时，其给药剂量以及给药频率与传统药物相比较少、药效学与药代动力学分离，游离药物被迅速清除也能够长久维持效力、能够预防耐药性的产生、能够靶向特定蛋白罕见的、非保守残基，达到较高的选择性。
4、目前，尚未见有关于靶向hces2a的共价抑制剂的相关研究报道。本专利技术在前期构建的靶向共价抑制
技术实现思路
1、本专利技术针对上述问题进行，提供了一种靶向hces2a的共价抑制剂、其制备方法以及在制备hces2a抑制剂中的应用。
2、本专利技术的技术方案如下：本专利技术首次提出利用n-取代的氨基甲酸硫酯作为亲电弹头，采用分子融合技术，对非共价先导化合物b1进行了“共价化”改造，使其与hces2a的催化空腔口袋中丝氨酸残基ser228共价偶联，改造后的化合物并未改变原分子的母核结构，结合方式不会受到太大影响；且能够通过共价作用增加小分子与靶蛋白间的结合能力，提高抑制活性，相较于非共价先导化合物b1产生了等同及更优的抑制作用效力。
3、本专利技术所述的化合物的药物制剂形式为口服制剂，在伊替利康治疗肿瘤过程中抑制肠道内hces2a活性，降低迟发性腹泻的应用。
4、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
5、本专利技术第一方面，提供了一种靶向hces2a的共价抑制剂，结构式如下列式i所示：
6、
7、其中，r为ch3或ch2ch3；r'为h，f，cl，br，oh，nh2，och3，ch3或c(ch3)3。
8、优选的，上述靶向hces2a的共价抑制剂中，烯基双键部分为e或z构型。
9、进一步优选，所述靶向hces2a的共价抑制剂如下任一结构式所示：
10、
11、
12、抑制性实验结果显示，以n-取代的氨基甲酸硫酯作为亲电弹头的化合物均表现出与共价作用相关的时间相关性抑制作用，且在33分钟孵育后表现出更强的抑制作用。其中，化合物b7-4-2，b7-13-2，b7-19-1，b7-19-2和b7-20-2对hces2a蛋白的抑制作用较为突出，远远大于非共价先导化合物b1。
13、共价结合位点测定结果显示，除化合物b7-19-2的结合位点为ser368外，其余化合物均能够共价修饰hces2a蛋白催化空腔中的丝氨酸残基ser228，从而抑制hces2a蛋白的催化活性。
14、本专利技术第二方面，提供了靶向hces2a的共价抑制剂的制备方法：
15、一、当r为甲基时，共价抑制剂的反应流程如下所示：
16、
17、反应主体步骤如下：在碱性条件下将香草醛a与二甲氨基硫代甲酰氯b偶联得到中间体c，然后在高温和微波辐射作用下进行重排，得到中间体d，后与二氢茚酮类化合物e发生羟醛缩合，得到式i中r为ch3时所述的目标产物f。
18、上述反应过程中，各步骤的具体合成方法如下：
19、(1)制备中间体c时，碱选自三乙胺、氢氧化钠、氢氧化钾中的任意一种，反应溶剂选自四氢呋喃；制备方法如下：将香草醛溶于四氢呋喃，0℃加入2.5eq.的三乙胺，2.5eq.二甲氨基甲酰氯，室温反应4小时，反应结束后加等比例水终止反应，二氯甲烷萃取母液3次，饱和食盐水萃取有机相1次，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，经柱层析得中间体c；
20、(2)制备中间体d时，将中间体c溶于二苯醚中，微波辐照220℃，反应1～2小时，经柱层析得中间体d；
21、(3)制备目标产物f时，将摩尔比为8:9的中间体d及二氢茚酮类化合物e溶于一定体积醇溶液，缓慢加入体积为醇体积60％、质量体积比为20％的强碱水溶液，于室温反应并实时检测反应进程；反应结束后，加入等比例水淬灭并调节ph至5左右，依次经二氯甲烷萃取、饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥，减压蒸馏后，用二氯甲烷/乙酸乙酯体系作为流动相进行柱层析分离得目标产物f。
22、二、当r为乙基时，共价抑制剂的反应流程如下所示：
23、
24、反应主体步骤如下：化合物d碱性条件下水解后与n-甲基-n-乙基氨基甲酰氯h偶联，得到中间体i，后与二氢茚酮类化合物e发生羟醛缩合，得到式i中r为ch2ch3时所述的目标产物j。
25、上述反应过程中，各步骤的具体合成方法如下：
26、(1)中间体g制备时，碱选自三乙胺、氢氧化钠、氢氧化钾中的任意一种；制备过程如下：将中间体d溶于醇溶液，缓慢加入体积为醇溶液20％、5.0m碱性水溶液，70℃油浴反应并检测反应；反应结束后，旋蒸去除溶剂，加等比例水终止反应，调节ph至3，依次经乙酸乙酯萃取母液、饱和食盐水萃取有机相、无水硫酸钠干燥后抽滤，旋干，经柱层析得中间体g；
27、(2)中间体i的制备过程如下：将中间体g溶于四氢呋喃，0℃加入2.5eq.三乙胺和2.5eq.n-乙基-n-甲基氨基甲酰氯，室温反应并实时检测反应；反应结束后，加等比例水终止反应，依次经二氯甲烷萃取母液、饱和食盐水萃取有机相、无水硫酸钠干燥后，抽滤，旋干，经柱层析得中间体i；
28、(3)制备目标产物j时，将摩尔比为8:9的中间体i及二氢茚酮类化合物e溶于一定体积醇溶液，缓慢加入体积为醇体积60％、质量体积比为20％的强碱水溶液，于室温反应并实时检测反应进程；反应结束后，加入等比例水淬灭并调节ph至5左右，依次经二氯甲烷萃取、饱和食盐本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向hCES2A的共价抑制剂，其特征在于：结构式如下式I所示：
2.根据权利要求1所述的靶向hCES2A的共价抑制剂，其特征在于：烯基双键部分为E或Z构型。
3.根据权利要求1所述的靶向hCES2A的共价抑制剂，其特征在于：所述靶向hCES2A的共价抑制剂如下任一结构式所示：
4.权利要求1至3任一项所述的靶向hCES2A的共价抑制剂的制备方法，其特征在于，当R为甲基时，共价抑制剂的反应流程如下所示：
5.根据权利要求4所述的靶向hCES2A的共价抑制剂的制备方法，其特征在于：
6.权利要求1至3任一项所述的靶向hCES2A的共价抑制剂的制备方法，其特征在于，当R为乙基时，共价抑制剂的反应流程如下所示：
7.根据权利要求6所述的靶向hCES2A的共价抑制剂的制备方法，其特征在于：
8.权利要求1至3任一项所述的靶向hCES2A的共价抑制剂、其同位素标记化合物或其药学上可接受的盐在制备hCES2A抑制剂中的应用。
9.一种靶向hCES2A的共价抑制剂，其特征在于，包括活性组分以及
10.根据权利要求9所述的靶向hCES2A的共价抑制剂，其特征在于，该抑制剂为口服制剂形式，与伊立替康联合使用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向hces2a的共价抑制剂，其特征在于：结构式如下式i所示：
2.根据权利要求1所述的靶向hces2a的共价抑制剂，其特征在于：烯基双键部分为e或z构型。
3.根据权利要求1所述的靶向hces2a的共价抑制剂，其特征在于：所述靶向hces2a的共价抑制剂如下任一结构式所示：
4.权利要求1至3任一项所述的靶向hces2a的共价抑制剂的制备方法，其特征在于，当r为甲基时，共价抑制剂的反应流程如下所示：
5.根据权利要求4所述的靶向hces2a的共价抑制剂的制备方法，其特征在于：
6.权利要求1至3任一项所述的靶向hces2a的共价抑制剂的制备方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛广波，赵庆杰，盖聪昊，胡雪艳，张雅，柴晓云，邹燕，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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