【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞冻存保护，具体涉及一种细胞冻存液及其制备方法和应用。
技术介绍
1、当前，生物医学领域的焦点主要集中在干细胞和免疫细胞等领域。其中，免疫细胞的研究具有重要的社会效益和发展潜力。近年来，细胞类创新药品的注册申报和临床研究项目显著增多，其中参与机体免疫应答或与免疫应答相关的免疫细胞在各类疾病预防和治疗中发挥极为重要的功能。为了最大限度地发挥细胞产品的疗效，对于现货型细胞产品，只有良好的细胞冷冻、保存技术才可能最大程度确保细胞在长期冷冻过程中的存活率和复苏后的产品功效，以确保细胞治疗产品临床应用的疗效。鉴于细胞冻存技术对于推动细胞治疗产品的临床应用的作用，亟需开发一种成分明确、且具有安全保障的适用于免疫细胞的冻存液。
2、常用的冻存液为胎牛血清和二甲基亚砜(dmso)。然而，研究表明，dmso在某些情况下可能对细胞产生毒性或不良反应，存在潜在的致癌风险。胎牛血清作为动物源性成分，不仅成分复杂，且不同批次存在差异，具有极大不确定性，影响冻存后的复苏回收率。因此，有必要开发一种成分明确、安全适用于免疫细胞冻存的冻存液以实现标准化、规模化的冻存效果和冻存后复苏的成功率。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种细胞冻存液及其制备方法和应用。
2、第一方面，本专利技术提供一种细胞冻存液，包括电解质溶液和冻存保护剂；其中，所述冻存保护剂包括海藻糖、乙二醇、葡萄糖、l-脯氨酸、乳清蛋白、人血白蛋白中的至少一种；
3、所述细胞冻存液不包括dmso和胎牛
4、如上所述的细胞冻存液，所述电解质溶液是指维持细胞内外平衡的矿物质成分，具体地，所述电解质溶液包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、碳酸氢钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾、氯化镁中的至少一种。
5、进一步地，所述电解质溶液可以为氯化钠注射液，包括0.85g/l的氯化钠、30mg/l的氯化钾和33mg/l的氯化钙。所述电解质溶液可以为碳酸氢钠注射液，包括50g/l的碳酸氢钠。所述电解质溶液可以为复方电解质溶液，包括氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁。
6、更进一步地，所述电解质溶液为复方电解质溶液，其中，氯化钠的浓度为5.26g/l、葡萄糖酸钠的浓度为5.02g/l、醋酸钠的浓度为3.68g/l、氯化钾的浓度为0.37g/l，氯化镁的浓度为0.30g/l。
7、如上所述的细胞冻存液，所述电解质溶液使用的溶剂可以为注射用水。
8、如上所述的细胞冻存液，所述冻存保护剂包括海藻糖、乙二醇、l-脯氨酸和人血白蛋白。海藻糖的cas号为6138-23-4，l-脯氨酸的cas号为147-85-3，人血白蛋白的cas号为70024-90-7。
9、进一步地，所述细胞冻存液中，海藻糖的浓度为0.1-1mol/l，乙二醇的浓度为0.5-1mol/l乙二醇，l-脯氨酸的浓度为0.5-1mol/l，人血白蛋白的浓度为10-50g/l。
10、更进一步地，所述冻存液中，海藻糖的浓度为0.5mol/l，乙二醇的浓度为0.5mol/l，l-脯氨酸的浓度为0.5mol/l，人血白蛋白的浓度为10g/l。
11、第二方面，本专利技术提供上述任一所述的细胞冻存液的制备方法，包括：将所述电解质溶液和冻存保护剂混合得到所述细胞冻存液。
12、第三方面，本专利技术提供上述任一所述的细胞冻存液在免疫细胞冻存中的应用。
13、第四方面，本专利技术提供一种免疫细胞的冻存方法，包括将上述细胞冻存液与免疫细胞混合，得到混合体系，对包括所述细胞冻存液和免疫细胞的混合体系进行冷冻保存。
14、如上所述的方法，所述免疫细胞可以为t细胞(t lymphocytes)、b细胞(blymphocytes)、自然杀伤细胞(natural killer cells,nk cells)、巨噬细胞(macrophages)、树突状细胞(dendritic cells)、中性粒细胞(neutrophils)、嗜酸性粒细胞(eosinophils)、嗜碱性粒细胞(basophils)、肥大细胞(mast cells)中的至少一种。
15、如上所述的方法，所述免疫细胞还可以为外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells，pbmc)。
16、如上所述的方法，所述免疫细胞可以来源于哺乳动物，所述哺乳动物可以选自牛科动物、马科动物、猫科动物、犬科动物、兔科动物、猪科动物、骆驼科动物、啮齿类动物和灵长类动物等，包括但不限于牛、马、山羊、绵羊、猫、兔、猪、骆驼、羊驼、大鼠、小鼠、豚鼠、非人灵长类动物(诸如猿、猴、狒狒、猩猩)和人，优选牛、马、犬、山羊、绵羊、猪、骆驼、大鼠、小鼠、猴和人。
17、如上所述的方法，所述冷冻过程可采用程序降温方法，具体地，将待冻存的免疫细胞与上述细胞冻存液混合，调整免疫细胞密度为1*107-5*107/ml后，将免疫细胞保存在4℃冰箱平衡10min，随后将免疫细胞保存于程序降温盒中并放入-80℃冰箱进行冷冻，最后转入液氮中进行长期冻存。
18、本专利技术提供的细胞冻存液是一种无dmso和胎牛血清的细胞冻存液，其可以用于免疫细胞的冻存，在避免dmso和胎牛血清对细胞冻存影响的基础上，有助于提高免疫细胞的冻存存活率和回收率，维持免疫细胞的增殖能力和对靶细胞的杀伤活性。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种细胞冻存液，其特征在于，包括电解质溶液和冻存保护剂；其中，所述冻存保护剂包括海藻糖、乙二醇、葡萄糖、L-脯氨酸、乳清蛋白、人血白蛋白中的至少一种；所述细胞冻存液不包括DMSO和胎牛血清。
2.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述电解质溶液包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、碳酸氢钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾、氯化镁中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的细胞冻存液，其特征在于，所述电解质溶液包括氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁。
4.根据权利要求3所述的细胞冻存液，其特征在于，所述电解质溶液中氯化钠的浓度为5.26g/L、葡萄糖酸钠的浓度为5.02g/L、醋酸钠的浓度为3.68g/L、氯化钾的浓度为0.37g/L，氯化镁的浓度为0.30g/L。
5.根据权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液，其特征在于，所述冻存保护剂包括海藻糖、乙二醇、L-脯氨酸和人血白蛋白。
6.根据权利要求5所述的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液中，海藻糖的浓度为0.1-1mol/L，乙二醇的浓度为0.5-1mol/
7.根据权利要求5所述的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液中，海藻糖的浓度为0.5mol/L，乙二醇的浓度为0.5mol/L，L-脯氨酸的浓度为0.5mol/L，人血白蛋白的浓度为10g/L。
8.权利要求1-7任一项所述的细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括：将所述电解质溶液和冻存保护剂混合得到所述细胞冻存液。
9.权利要求1-7任一项所述的细胞冻存液在免疫细胞冻存中的应用。
10.一种免疫细胞的冻存方法，其特征在于，包括：将权利要求1-7任一项所述的细胞冻存液与免疫细胞混合，得到混合体系，对包括所述细胞冻存液和免疫细胞的混合体系进行冷冻保存。
...【技术特征摘要】
1.一种细胞冻存液，其特征在于，包括电解质溶液和冻存保护剂；其中，所述冻存保护剂包括海藻糖、乙二醇、葡萄糖、l-脯氨酸、乳清蛋白、人血白蛋白中的至少一种；所述细胞冻存液不包括dmso和胎牛血清。
2.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述电解质溶液包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、碳酸氢钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾、氯化镁中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的细胞冻存液，其特征在于，所述电解质溶液包括氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁。
4.根据权利要求3所述的细胞冻存液，其特征在于，所述电解质溶液中氯化钠的浓度为5.26g/l、葡萄糖酸钠的浓度为5.02g/l、醋酸钠的浓度为3.68g/l、氯化钾的浓度为0.37g/l，氯化镁的浓度为0.30g/l。
5.根据权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液，其特征在于，所述冻存保护剂包括海藻糖、乙二醇、l-脯氨酸和人血白蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢戌，刘静维，王跃，
申请(专利权)人：康爱瑞浩生物医药浙江股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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