该专利涉及一种或更多种克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)菌株用于抑制或延迟饮料(优选酒精含量降低的饮料)中酵母属的种(Saccharomyces spp.)的生长的用途。本文还提供了保藏号为DSM 34278的克鲁维毕赤酵母和保藏号为DSM 34279的克鲁维毕赤酵母及其突变体，以及包含所述克鲁维毕赤酵母的组合物。
1、由于对更健康的食品和饮料的需求日益增长，减少酒精饮料(尤其是啤酒和葡萄酒)中的乙醇具有相当大的商业价值。具体来说，无酒精(alcohol-free)啤酒作为基于麦芽的热量降低的饮料，具有多种营养生理学积极特性，正变得越来越受欢迎。
2、与通常含有超过4％(vol/vol)的酒精的标准啤酒相比，低酒精啤酒或非酒精啤酒(又称淡啤酒(light beer)、无酒精(no-alcohol)啤酒、非酒精(nonalcoholic)啤酒、淡啤酒(small beer)、淡啤酒(small ale)、薄啤酒(near-beer))是酒精含量较低的啤酒，其旨在再现标准啤酒的全部风味。
3、用于生产酒精含量降低的啤酒、低酒精啤酒和非酒精啤酒的各种工艺是已知的并且已经被建立。一般来说，这些工艺可以分为两组。一方面，存在物理工艺，其中主要通过热工艺或膜工艺从普通啤酒或其他酒精饮料基质(如葡萄酒或苹果酒)中尽可能选择性地去除乙醇。另一方面，存在基于乙醇形成受限的生物学方法，例如使用改良的糖化工艺、使用有限的发酵工艺(如停止发酵)或使用特殊酵母。
>5、然而，啤酒厂和酿造罐的微环境通常由酵母属的种占高度主导地位，所述酵母属的种包括啤酒厂使用的酿酒酵母(s.cerevisiae)和巴斯德酵母(s.pastorianus)以及作为污染物的其他酵母属如糖化酵母(saccharomyces diastaticus)。难以通过清洗和消毒将这些酵母从酿造罐中完全消除。这可能会给低酒精啤酒和非酒精啤酒的生产带来问题。酿造这种类型的啤酒时，酵母属的种的任何污染可能导致乙醇产生，并从而超过靶标酒精浓度，以及潜在的异味或其他质量下降。啤酒中酵母属的变质情况例如在suiker et al."spoilage yeasts in beer and beer products."current opinion in food science 44(2022):100815中描述。啤酒中允许的残留酒精越低，在工艺中对酵母属的种的抑制就越关键。因此，当使用生物学方法生产酒精降低的啤酒时，必须抑制或完全抑制发酵罐中可能存在的酵母属的种的生长。6、因此，对于在生产饮料(特别是易受酵母属污染的饮料)时抑制酵母属的种的生长的改进方法存在需求。具体而言，在饮料生产过程中提供对酵母属的种的有效抑制，同时优选提供具有良好感官或感觉特性(例如良好的香味或风味特征)的饮料是期望的。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、该问题现在通过使用一种或更多种克鲁维毕赤酵母(pichia kluyveri)菌株来抑制或延迟饮料中酵母属的种的生长而得到了解决。
2、尽管从例如wo 2014/135673(其公开了克鲁维毕赤酵母菌株pk-kr1和pk-kr2的用途)中已知克鲁维毕赤酵母制造低酒精啤酒的用途，但对酵母属的种的抑制未被公开。
3、本专利技术中的一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的特征在于，与不包含一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酿酒酵母或巴斯德酵母与一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株能够将酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％，例如至少50％、至少60％、至少70％或至少80％。
4、本专利技术的专利技术人令人惊讶地发现通过使用克鲁维毕赤酵母管理酵母属的种的污染的新方法。因此，本专利技术有助于提供有效的解决方案，其通过生物学手段管理酵母属的种的生长，并且可以避免使用化学消毒剂。
5、本专利技术的用途和方法特别适用于发酵低酒精饮料或非酒精饮料。酵母属的种通常存在于酿酒厂微环境中。由于这些酵母难以通过清洗和消毒从酿造罐中完全消除，因此使用克鲁维毕赤酵母菌株来有效地抑制系统中存在的酵母属的种的污染物的生长是高度有利的。通过本专利技术的用途和方法，可以抑制发酵罐中存在的酵母属的生长，并且优选地，所述抑制不存在于同一发酵罐中用于普通啤酒酿造的下一批次生产中。这具有以下优势：啤酒厂不需要专用的罐来生产非酒精啤酒。
6、特别地，本申请的专利技术人已鉴定出两种新型克鲁维毕赤酵母菌株(dsm 34278和dsm 34279)，由于它们能够有效抑制酵母属的种，它们特别适用于本专利技术的用途和方法。此外，当用于发酵非酒精饮料时，这些菌株还提供了非常好的风味特征。
7、为了解决微生物污染的问题，本专利技术在第一方面提供了一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株用于抑制或延迟饮料(优选发酵饮料)中酵母属的种的生长的用途。一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的特征可以为，与不包含一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酿酒酵母或巴斯德酵母与一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株能够将所述酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％。优选地，克鲁维毕赤酵母以至少103cfu/ml，例如至少104cfu/ml，例如至少105cfu/ml，例如103cfu/ml至109cfu/ml，优选104cfu/ml至108cfu/ml，最优选107cfu/ml的浓度添加到饮料中。
8、在第二方面，本专利技术提供了抑制或延迟饮料(优选发酵饮料，更优选酒精含量较低的饮料，例如酒精含量低于4.2vol.-％的饮料)中酵母属的种的生长的方法，其包括添加有效量的一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的步骤。一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的特征可以为，与不包含一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酿酒酵母或巴斯德酵母与一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株能够将所述酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％，例如至少50％、至少60％、至少70％或至少80％。优选地，克鲁维毕赤酵母以至少103cfu/ml，例如至少104cfu/ml，例如至少105cfu/ml，例如103cfu/ml至109cfu/ml，优选104cfu/ml至108cfu/ml，最优选107cfu/ml的浓度添加到饮料中。
9、在第三方面，本专利技术提供了克鲁维毕赤酵母种的酵母，其是保藏号为dsm 34278的克鲁维毕赤酵母或能够从所保藏的酵母获得的克鲁维毕赤酵母突变体。突变体的特征可以为，使用测定(例如测定i)确定，与不包含克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酵母属与克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述克鲁维毕赤酵母菌株能够将酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％，例如至少50％、至少60％、至少70％或至少80％。
10、在第四方面本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种或更多种克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)菌株用于抑制或延迟酒精含量低于4.2vol.-％的饮料中酵母属的种(Saccharomyces spp.)的生长的用途，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株的特征在于，与不包含所述克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酿酒酵母(S.cerevisiae)或巴斯德酵母(S.pastorianus)与所述克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述克鲁维毕赤酵母菌株能够将所述酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株不是PK-KR1。
2.一种抑制或延迟酒精含量低于4.2vol.-％的饮料中酵母属的种的生长的方法，所述方法包括添加有效量的一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的步骤，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株的特征在于，与不包含所述克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酿酒酵母或巴斯德酵母与所述克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述克鲁维毕赤酵母菌株能够将所述酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株不是PK-KR1。
3.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述饮料为酒精含量低于1.2vol.-％的饮料。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述饮料为酒精含量低于0.5vol.-％且最优选低于0.05vol.-％的饮料。
5.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中与不包含所述克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的麦芽汁相比，当103CFU/ml的酵母属的种与105CFU/ml的克鲁维毕赤酵母菌株同时接种在麦芽汁中持续三天时，所述克鲁维毕赤酵母能够将所述酵母属的种的生长抑制至少40％。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株选自由保藏号为DSM 34278的菌株和保藏号为DSM 34279的菌株及其突变体组成的组。
7.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、卡尔斯伯酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、真贝酵母(Saccharomyceseubayanus)、贝酵母(Saccharomyces bayanus)、葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)、库德里阿兹威酵母(Saccharomyces kudriavzevii)和/或巴斯德酵母(Saccharomycespastorianus)中的一种或更多种的生长被抑制。
8.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株以至少103CFU/ml、优选至少105CFU/ml、更优选最优选至少107CFU/ml的浓度被添加到所述饮料中。
9.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述饮料是酒精含量低于4.2vol.-％、优选低于1.2vol.-％、更优选低于0.5vol.-％且最优选低于0.05vol.-％的葡萄酒、苹果酒、茶、水果饮料或啤酒。
10.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述酵母属的种的生长被抑制至少50％、优选至少60％或75％。
11.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株的特征在于，与不包含所述克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当103CFU/ml的酵母属的种与105CFU/ml的克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述克鲁维毕赤酵母菌株能够将酵母属的种的生长抑制至少40％。
12.克鲁维毕赤酵母种的酵母，其是保藏号为DSM 34278的克鲁维毕赤酵母或能够从所保藏的酵母获得的功能等同的克鲁维毕赤酵母突变体。
13.克鲁维毕赤酵母种的酵母，其是保藏号为DSM 34279的克鲁维毕赤酵母或能够从所保藏的酵母获得的功能等同的克鲁维毕赤酵母突变体。
14.一种组合物，其包含根据权利要求11至12中任一项所述的克鲁维毕赤酵母种的酵母，其中所述克鲁维毕赤酵母任选以至少106CFU/g的浓度存在于所述组合物中，其中所述组合物任选呈液体、冷冻或干燥形式，或其中所述组合物任选进一步包含一种或更多种冷冻保护剂、冻干保护剂、抗氧化剂、营养物、填充剂、香料或其混合物。
15.一种饮料，其包含根据权利要求11至12中任一项所述的克鲁维毕赤酵母种的酵母，所述饮料优选为酒精含量低于4.2vol.-％的饮料。
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种或更多种克鲁维毕赤酵母(pichia kluyveri)菌株用于抑制或延迟酒精含量低于4.2vol.-％的饮料中酵母属的种(saccharomyces spp.)的生长的用途，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株的特征在于，与不包含所述克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酿酒酵母(s.cerevisiae)或巴斯德酵母(s.pastorianus)与所述克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述克鲁维毕赤酵母菌株能够将所述酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株不是pk-kr1。
2.一种抑制或延迟酒精含量低于4.2vol.-％的饮料中酵母属的种的生长的方法，所述方法包括添加有效量的一种或更多种克鲁维毕赤酵母菌株的步骤，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株的特征在于，与不包含所述克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的样品相比，当酿酒酵母或巴斯德酵母与所述克鲁维毕赤酵母菌株同时接种时，所述克鲁维毕赤酵母菌株能够将所述酿酒酵母或巴斯德酵母的生长抑制至少40％，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株不是pk-kr1。
3.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述饮料为酒精含量低于1.2vol.-％的饮料。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述饮料为酒精含量低于0.5vol.-％且最优选低于0.05vol.-％的饮料。
5.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中与不包含所述克鲁维毕赤酵母菌株的其他方面相同的麦芽汁相比，当103cfu/ml的酵母属的种与105cfu/ml的克鲁维毕赤酵母菌株同时接种在麦芽汁中持续三天时，所述克鲁维毕赤酵母能够将所述酵母属的种的生长抑制至少40％。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中所述克鲁维毕赤酵母菌株选自由保藏号为dsm 34278的菌株和保藏号为dsm 34279的菌株及其突变体组成的组。
7.根据前述权利要求中任一项所述的用途或方法，其中酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)、卡尔斯伯酵母(saccharomyces carlsbergensis)、真贝酵母(saccharomyceseubayanus)、贝酵...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·U·斯洛特，S·卡尔森，C·M·R·佩雷拉，J·施纳布尔，J·K·安德森，
申请(专利权)人：科·汉森有限公司，
类型：发明
国别省市：
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