本发明专利技术提供了一种降低IFNGR1的siRNA及其应用，涉及生物技术领域，包括IFNGR1‑si‑1、IFNGR1‑si‑2或IFNGR1‑si‑3中的至少一种，实验证明IFNGR1‑si‑1、IFNGR1‑si‑2和IFNGR1‑si‑3对于间充质干细胞中IFNGR1基因的敲减效率均达到48％以上。通过定量转入siRNA可实现间充质干细胞IFNGR1的定量表达。建立IFNGR1表达量和总淋巴细胞增殖抑制率的对应关系确定了拟合公式，通过检测待评价间充质干细胞的IFNGR1表达量即可计算总淋巴细胞增殖抑制率；与现有技术相比，无需对MSC的评价每次都与PBMC共培养，使用大量的PBMC。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种降低ifngr1的sirna及其应用。
技术介绍
1、间充质干细胞(mesenchymal stem cell，msc)是一群来源于中胚层的多能成体干细胞，具有自我更新多向分化、促进组织器官修复和免疫调控等潜能。msc可从骨髓、脐带、胎盘、脂肪、骨骼、牙髓和子宫内膜等多个组织中分离培养，msc样细胞也可由胚胎干细胞或多能干细胞分化而来。msc具有低免疫原性，因不表达cd40、cd80、cd86等共刺激分子和主要组织相容性复合体类分子，所以引起免疫排斥反应的可能性较小。同时因其对免疫细胞的调节效应不受主要组织相容性复合体分子的限制，对自体和异体的免疫细胞都可发挥免疫调节效应，如msc可通过细胞间直接接触或分泌细胞因子的方式对异常激活的t淋巴细胞、b淋巴细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等的增殖、分化和抗体产生等发挥调控效应，多项临床研究证明msc输注后会显著抑制患者体内t细胞过度增殖，并通过抑制细胞毒性cd8+t淋巴细胞的活性。虽然有大量的学者对msc作用机制的进行研究，但仍不能完全的阐述msc的药物作用机制(moa)和提供合适的效价评价方法。
2、目前对msc的免疫调节能力，最常用的评价方法为将msc与外周血单个核细胞(pbmc)进行3～5天共培养后，检测pbmc中淋巴细胞等免疫细胞的增殖能力，计算msc对其增殖的抑制能力，以评价msc的免疫调节能力。然而这种方法需要大量使用pbmc。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种降低ifngr1的sirna，以至少解决现有技术中存在的缺少一种能够下调ifngr1的表达量且能够用于评价哺乳动物细胞的物质的技术问题。
2、本专利技术的目的之二在于提供上述的sirna在降低或抑制哺乳动物细胞中ifngr1的表达或制备用于降低或抑制哺乳动物细胞中ifngr1表达的产品、降低或抑制哺乳动物细胞免疫抑制能力或制备用于降低或抑制哺乳动物细胞免疫抑制能力的产品或评价哺乳动物细胞免疫调节能力中的应用。
3、本专利技术的目的之三在于提供一种降低ifngr1的试剂或试剂盒。
4、本专利技术的目的之四在于提供一种下调间充质干细胞免疫调节能力的方法。
5、本专利技术的目的之五在于提供一种定量表达ifngr1的间充质干细胞。
6、本专利技术的目的之六在于提供一种评价间充质干细胞免疫调节能力的方法。
7、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
8、第一方面，本专利技术提供了一种降低ifngr1的sirna，包括ifngr1-si-1、ifngr1-si-2或ifngr1-si-3中的至少一种；
9、所述ifngr1-si-1包括核苷酸序列如seq id no.1所示的正向序列ifngr1-si-1-f和核苷酸序列如seq id no.2所示的反向序列ifngr1-si-1-r；
10、所述ifngr1-si-2包括核苷酸序列如seq id no.3所示的正向序列ifngr1-si-2-f和核苷酸序列如seq id no.4所示的反向序列ifngr1-si-2-r；
11、所述ifngr1-si-3包括核苷酸序列如seq id no.5所示的正向序列ifngr1-si-3-f和核苷酸序列如seq id no.6所示的反向序列ifngr1-si-3-r。
12、进一步的，所述正向序列和反向序列的3’末端分别连接有2个额外的核苷酸；
13、优选地，所述额外的核苷酸为脱氧胸腺嘧啶核苷酸。
14、第二方面，本专利技术提供了上述的sirna在如下任一项中的应用：
15、a1、在降低或抑制哺乳动物细胞中ifngr1的表达或制备用于降低或抑制哺乳动物细胞中ifngr1表达的产品中的应用；
16、a2、在降低或抑制哺乳动物细胞免疫抑制能力或制备用于降低或抑制哺乳动物细胞免疫抑制能力的产品中的应用；
17、a3、在评价哺乳动物细胞免疫调节能力中的应用。
18、进一步的，所述细胞为间充质干细胞；
19、优选地，所述哺乳动物包括人。
20、第三方面，本专利技术提供了一种降低ifngr1的试剂或试剂盒，包括上述的sirna。
21、第四方面，本专利技术提供了一种下调间充质干细胞免疫调节能力的方法，包括将上述的sirna转入间充质干细胞中。
22、进一步的，转入间充质干细胞后，还包括培养至少24h。
23、第五方面，本专利技术提供了一种定量表达ifngr1的间充质干细胞，含有上述的sirna。
24、第六方面，本专利技术提供了一种评价间充质干细胞免疫调节能力的方法，包括检测待评价间充质干细胞的ifngr1表达量，并将待评价间充质干细胞的ifngr1表达量代入拟合公式计算总淋巴细胞增殖抑制率，根据总淋巴细胞增殖抑制率评价间充质干细胞免疫调节能力；
25、所述拟合公式由若干组上述的定量表达ifngr1的间充质干细胞的ifngr1表达量和与ifngr1表达量对应的总淋巴细胞增殖抑制率确定。
26、进一步的，所述拟合公式的构建方法包括以下步骤：
27、a、制备若干组定量表达ifngr1的间充质干细胞，获得各组间充质干细胞的ifngr1表达量；
28、b、将若干组定量表达ifngr1的间充质干细胞分别与外周血单个核细胞共培养，获得各组间充质干细胞对应的总淋巴细胞增殖抑制率；
29、c、根据各组间充质干细胞的ifngr1表达量及各组间充质干细胞对应的总淋巴细胞增殖抑制率构建拟合曲线，获得拟合公式；
30、优选地，所述若干组定量表达ifngr1的间充质干细胞的ifngr1表达量均不相同；
31、优选地，所述若干组定量表达ifngr1的间充质干细胞的组的数量至少为2个；
32、优选地，若干组定量表达ifngr1的间充质干细胞的制备方法包括将不同浓度的sirna分别导入间充质干细胞制得；
33、优选地，所述不同浓度的sirna为0～10pmol/ml的sirna，且不为0；
34、优选地，定量表达ifngr1的间充质干细胞的培养时间为0～72h，优选为24h；
35、优选地，与外周血单个核细胞共培养的时间为72～120h，优选为96h。
36、本专利技术提供的一种降低ifngr1的sirna及其应用，通过实验证明ifngr1-si-1、ifngr1-si-2和ifngr1-si-3对于间充质干细胞中ifngr1基因的敲减效率均达到48％以上，其中ifngr1-si-3最高。通过定量转入sirna可实现间充质干细胞ifngr1的定量表达。能够用于建立msc中ifngr1表达水平与msc对免疫细胞增殖的抑制能力的对应关系，用于评价间充质干细胞。另一方面提供的一种评价间充质干细胞免疫调本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种降低IFNGR1的siRNA，其特征在于，包括IFNGR1-si-1、IFNGR1-si-2或IFNGR1-si-3中的至少一种；
2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述正向序列和反向序列的3’末端分别连接有2个额外的核苷酸；
3.权利要求1或2所述的siRNA在如下任一项中的应用：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细胞为间充质干细胞；
5.一种降低IFNGR1的试剂或试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的siRNA。
6.一种下调间充质干细胞免疫调节能力的方法，其特征在于，包括将权利要求1或2所述的siRNA转入间充质干细胞中。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，转入间充质干细胞后，还包括培养至少24h。
8.一种定量表达IFNGR1的间充质干细胞，其特征在于，含有权利要求1或2所述的siRNA。
9.一种评价间充质干细胞免疫调节能力的方法，其特征在于，包括检测待评价间充质干细胞的IFNGR1表达量，并将待评价间充质干细胞的IFNGR1表达量代入拟合公式计算总淋巴细胞增殖抑制率，根据总淋巴细胞增殖抑制率评价间充质干细胞免疫调节能力；
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述拟合公式的构建方法包括以下步骤：
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【技术特征摘要】
1.一种降低ifngr1的sirna，其特征在于，包括ifngr1-si-1、ifngr1-si-2或ifngr1-si-3中的至少一种；
2.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于，所述正向序列和反向序列的3’末端分别连接有2个额外的核苷酸；
3.权利要求1或2所述的sirna在如下任一项中的应用：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细胞为间充质干细胞；
5.一种降低ifngr1的试剂或试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的sirna。
6.一种下调间充质干细胞免疫调节能力的方法，其特征在于，包括将权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：张宇，王天成，王磊，齐奇，孟坤，蔡晓雨，
申请(专利权)人：武汉光谷中源药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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