【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种融合蛋白及其在鉴别bcg疫苗免疫和自然感染结核分枝杆菌中的应用。
技术介绍
1、牛结核病主要由牛型分枝杆菌感染牛引起的一种慢性细菌性疾病，也可感染人类和其他一些动物引起相应疾病，被国际兽医局(oie)列为需通报的动物疫病。牛结核病直接影响牛的生产力及产品的国际贸易，造成巨大的经济损失，同时其作为一种重要的人兽共患病，也是公共卫生的重大威胁。因此，如何有效预防和检测牛结核具有重要的经济和社会意义。
2、鉴于分枝杆菌感染初期机体的免疫应答主要以细胞免疫为主，故牛结核的检疫主要通过细胞免疫应答为基础的检测手段，包括结核菌素皮内变态试验(tst)和抗原特异的γ-干扰素(ifn-γ)检测试验。其中tst是oie指定也是应用最普遍的牛结核检测方法，但其敏感性和特异性受限。ifn-γ检测法主要检测特异性抗原体外刺激全血后产生的ifn-γ水平，但主要是作为tst的辅助检测手段。两种方法均使用到结核菌素纯化蛋白衍生物(ppd)，ppd由分枝杆菌培养物灭活提纯得到，成分复杂，其特异性易受交叉反应影响，经常造成诊断结果的假阳性，给生产带来一些不必要的损失。而且，接种bcg疫苗后会干扰结核病的诊断，使用上述检测方法往往无法区分疫苗免疫和自然感染，这使得检疫措施严重受阻，病原扩散蔓延造成的疫情状态难以消除，使牛结核病防控耗时费力且控制困难重重。因此探索特异、敏感的检测抗原对控制牛结核有重要意义。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本
2、本专利技术的第二目的在于提供一种生物材料。
3、本专利技术的第三目的在于提供上述融合蛋白在鉴别bcg疫苗免疫和自然感染结核分枝杆菌中的应用。
4、本专利技术的第四目的在于提供一种试剂。
5、本专利技术的第五目的在于提供一种elisa试剂盒。
6、为了实现以上目的，特采用以下技术方案：
7、第一方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包含rv3615c-1片段和rv3615c-2片段；
8、所述的rv3615c-1片段的氨基酸序列如seq id no.5所示或与该序列有至少90％同源性的序列；所述的rv3615c-2片段的氨基酸序列如seq id no.6所示或与该序列有至少90％同源性的序列。
9、作为进一步技术方案，所述融合蛋白包含至少一个重复单元，相邻重复单元之间通过连接肽连接；
10、所述重复单元主要由esat6-1片段、esat6-2片段、cfp10-1片段、cfp10-2片段、rv3615c-1片段和rv3615c-2片段组成，相邻片段之间通过连接肽连接；
11、所述esat6-1片段的氨基酸序列如seq id no.1所示或与该序列有至少90％同源性的序列；
12、esat6-2片段的氨基酸序列如seq id no.2所示或与该序列有至少90％同源性的序列；
13、cfp10-1片段的氨基酸序列如seq id no.3所示或与该序列有至少90％同源性的序列；
14、cfp10-2片段的氨基酸序列如seq id no.4所示或与该序列有至少90％同源性的序列。
15、作为进一步技术方案，所述重复单元从n端至c端由esat6-1片段、esat6-2片段、cfp10-1片段、cfp10-2片段、rv3615c-1片段和rv3615c-2片段依次串联组成，相邻片段之间通过连接肽连接。
16、作为进一步技术方案，所述连接肽的氨基酸序列为ggaggg。
17、作为进一步技术方案，所述融合蛋白包含2个重复单元。
18、第二方面，本专利技术提供了生物材料，所述生物材料选自a-c中任一项：
19、a.核苷酸，所述核苷酸包括编码所述融合蛋白的核苷酸序列；
20、b.载体，所述载体携带所述a中的核苷酸；
21、c.细胞，所述细胞携带a中的核苷酸，或者含有b中的载体，或者表达所述的融合蛋白。
22、作为进一步技术方案，所述核苷酸的核苷酸序列如seq id no.7所示。
23、第三方面，本专利技术提供了上述融合蛋白在鉴别bcg疫苗免疫和自然感染结核分枝杆菌中的应用。
24、第四方面，本专利技术提供了一种试剂，包括所述的融合蛋白。
25、第五方面，本专利技术提供了一种elisa试剂盒，包括所述的融合蛋白、酶标板、洗涤液和荧光标记的抗牛igm抗体或荧光标记的抗牛igg抗体；优选地，所述荧光标记为cy5或者cy3。
26、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
27、本专利技术使用免疫信息学软件对esat6、cfp10和rv3615c蛋白进行抗原位点预测，将所得的抗原位点进行融合，获得融合蛋白。该融合蛋白的抗原特异性高，能够通过皮试检测、elisa检测或者体外ifn-γ检测的方式实现对bcg疫苗免疫和自然感染结核分枝杆菌的鉴别，且检测的敏感度和特异性高。此外，通过将所得的抗原位点进行重复融合，能够显著提升融合蛋白的敏感性。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含Rv3615c-1片段和Rv3615c-2片段；
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含至少一个重复单元，相邻重复单元之间通过连接肽连接；
3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述重复单元从N端至C端由ESAT6-1片段、ESAT6-2片段、CFP10-1片段、CFP10-2片段、Rv3615c-1片段和Rv3615c-2片段依次串联组成，相邻片段之间通过连接肽连接。
4.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接肽的氨基酸序列为GGAGGG。
5.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含2个重复单元。
6.生物材料，其特征在于，所述生物材料选自a-c中任一项：
7.根据权利要求6所述的生物材料，其特征在于，所述核苷酸的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示。
8.权利要求1-5任一项所述的融合蛋白在鉴别BCG疫苗免疫和自然感染结核分枝杆菌中的应用。
9.一种试剂，其特征在于，包括权
10.一种ELISA试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的融合蛋白、酶标板、洗涤液和荧光标记的抗牛IgM抗体或荧光标记的抗牛IgG抗体；优选地，所述荧光标记为CY5或者CY3。
...【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含rv3615c-1片段和rv3615c-2片段；
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含至少一个重复单元，相邻重复单元之间通过连接肽连接；
3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述重复单元从n端至c端由esat6-1片段、esat6-2片段、cfp10-1片段、cfp10-2片段、rv3615c-1片段和rv3615c-2片段依次串联组成，相邻片段之间通过连接肽连接。
4.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接肽的氨基酸序列为ggaggg。
5.根据权利要求2所述的融合蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，何传雨，刘梦志，赵海龙，吴冬玲，穆榕博，黄伟伟，王佩佩，李祥慧，
申请(专利权)人：天康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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