【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学领域，涉及一种试剂盒，具体来说是一种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒及其模型构建方法。
技术介绍
1、随着年龄的增长，人体的生理功能逐渐衰退，这一过程往往伴随着多种生理变化及慢性疾病的发生。在生理性衰老过程中，人体往往伴随着器官功能的减退。区别于病理性的器官功能减退(往往伴随着疾病的发生)，这种随年龄增加的生理性器官功能减退也被称为生理性/健康衰老。然而在临床实践中，准确且无创地识别健康年轻或健康衰老较为困难。近年来，越来越多的研究发现，肠道微生物群落在推动人体衰老中发挥着重要作用。
2、我们的研究发现，衰老过程中，肠道内gordonibacter和c.scindens的丰度显著增加，这种变化与人体的衰老及衰老相关器官功能减退状态相关，并能对人体的健康衰老状态进行预测。
3、因此，准确评估肠道中这些微生物的丰度对健康衰老及衰老相关器官功能减退的预测、干预和治疗提供新的思路和无创且快速的评估策略。
4、gordonibacter：戈登氏杆菌属，革兰氏阳性短棒/球菌形厌氧细菌。
5、c.scindens：森登斯梭杆菌，梭状芽孢杆菌属下的一种细菌，革兰氏阳性梭状厌氧菌。
技术实现思路
1、针对现有技术中的上述技术问题，区别于疾病状态下的年轻/衰老，本专利技术提供了一种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒及其模型构建方法，所述的这种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒及其模型构建方法要解决现有技术中没有快速且无创评估
2、本专利技术提供了一种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒，所述的试剂盒中含有检测肠道细菌gordonibacter或者c.scindens的试剂，所述的试剂中含有检测gordonibacter或者c.scindens的dna的正向引物和反向引物，
3、所述的检测gordonibacter dna的正向引物的序列为：
4、5’-agcgggacagagataggatagt-3'(seq id no.1)；
5、所述的检测gordonibacter dna的反向引物的序列为：
6、5’-agagcttcgggttatcactaagt-3'(seq id no.2)；
7、所述的检测c.scindens dna的正向引物的序列为：
8、5’-gaacagacgcagggaaagga-3'(seq id no.3)；
9、所述的检测c.scindens dna的反向引物的序列为：
10、5’-tagccaaacgtcacccagag-3'(seq id no.4)。
11、进一步的，采用粪便作为检测物，如果粪便中的gordonibacter或c.scindens或gordonibacter+c.scindens的绝对含量均大于1000拷贝数每毫克粪便，则显示检测对象为健康衰老状态，反之，则表示检测对象为健康年轻状态。
12、本专利技术还提供了肠道细菌gordonibacter或者c.scindens作为生物标记物在制备用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒中的应用。
13、进一步的，采用粪便作为检测物，如果粪便中的gordonibacter或c.scindens或gordonibacter+c.scindens的绝对含量均大于1000拷贝数每毫克粪便，则显示检测对象为健康衰老状态，反之，则表示检测对象为健康年轻状态。
14、本专利技术还提供了一种用于预测人体健康年轻与健康衰老的模型，所述的模型的输入变量为检测的肠道细菌gordonibacter或者c.scindens的丰度。
15、本专利技术还提供了一种用于预测人体健康年轻与健康衰老的模型的构建方法，包括如下步骤：
16、1)健康衰老及衰老相关器官功能衰退下差异细菌的筛选：
17、收集健康年轻人群、健康衰老人群的粪便样本，使用宏基因组测序对健康年轻人群和健康衰老人群的肠道菌群进行检测，获取健康年轻人群、健康衰老人群间的差异细菌，发现细菌gordonibacter和c.scindens作为潜在的区分两类人群的生物学标志物；
18、2)特异性gordonibacter和c.scindens的引物设计和验证：
19、为获取gordonibacter和c.scindens的特异性引物，从ncbi上下载对应靶标细菌的代表性基因组，使用生物信息学软件“roary”、“prank”及“consambig”依次对靶标细菌代表基因组的核心基因序列进行鉴定和保守序列选择；
20、使用“blast+”软件和ncbi的细菌参考基因组序列数据库对靶标细菌核心基因序列进行比对，以核心基因序列为目标细菌保守且为单拷贝的基因序列作为候选基因，进行后续的引物设计；
21、对于保守且单拷贝的靶标细菌的代表性基因序列，使用“primer3”进行引物设计，设计完成后使用算法“blast+”和“mfold”对引物进行质量控制和初步验证；
22、再依据上述算法筛选出的可用引物对，通过primer3提供的引物罚分进行排序，挑选出罚分最低的引物进行后续的实验验证；
23、所述的检测gordonibacter dna的正向引物的序列为：
24、5’-agcgggacagagataggatagt-3'(seq id no.1)；
25、所述的检测gordonibacter dna的反向引物的序列为：
26、5’-agagcttcgggttatcactaagt-3'(seq id no.2)；
27、所述的检测c.scindens dna的正向引物的序列为：
28、5’-gaacagacgcagggaaagga-3'(seq id no.3)；
29、所述的检测c.scindens dna的反向引物的序列为：
30、5’-tagccaaacgtcacccagag-3'(seq id no.4)。
31、3)目标引物的特异性检测：
32、抽提出阳性标本和阴性对照标本的菌群全基因组dna，使用筛选出的引物对阴性样本和阳性样本进行聚合酶链式反应联合凝胶电泳分析和实时定量聚合酶链式反应联合溶解曲线分析，检测引物的特异性；
33、4)特异性gordonibacter和c.scindens的灵敏度：
34、对已知浓度的标准dna扩增片段进行等比稀释检测，发现对两种特定细菌的检测线性区间为：102至108个拷贝数每微升上样量，反应体系最低检测下限为100个拷贝数每微升上样量，最高检测上线为108个拷贝数每微升上样量；
35、5)对实际受试者肠道粪便中的gordonibacter和c.scindens进行检测，并评估健康年轻与健康衰老的指标界限本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有检测肠道细菌Gordonibacter或者C.scindens的试剂，所述的试剂中含有检测Gordonibacter或者C.scindens的DNA的正向引物和反向引物，
2.根据权利要求1所述的一种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒，其特征在于，采用粪便作为检测物，如果粪便中的Gordonibacter或C.scindens或Gordonibacter+C.
3.肠道细菌Gordonibacter或者C.scindens作为生物标记物在制备用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，采用粪便作为检测物，如果粪便中的Gordonibacter或C.scindens或Gordonibacter+C.scindens的绝对含量均大于1000拷贝数每毫克粪便，则显示检测对象为健康衰老状态，反之，则表示检测对象为健康年轻状态。
5.一种用于预测人体健康年轻与健康衰老的模型，其特征在于，所述的模型的输入变量为检测的肠道细
6.一种用于预测人体健康年轻与健康衰老的模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.一种非诊断和治疗目的检测肠道细菌Gordonibacter或者C.scindens的试剂，其特征在于，所述的试剂中含有检测Gordonibacter或者C.scindens的DNA的正向引物和反向引物，
8.一种诊断或预测人体健康年轻与健康衰老的微生物标志物组合，其特征在于，为肠道细菌Gordonibacter和/或者C.scindens。
9.一种预测人体健康年轻与健康衰老的系统，其特征在于，包括以下模块：
...【技术特征摘要】
1.一种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有检测肠道细菌gordonibacter或者c.scindens的试剂，所述的试剂中含有检测gordonibacter或者c.scindens的dna的正向引物和反向引物，
2.根据权利要求1所述的一种用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒，其特征在于，采用粪便作为检测物，如果粪便中的gordonibacter或c.scindens或gordonibacter+c.
3.肠道细菌gordonibacter或者c.scindens作为生物标记物在制备用于评估人健康年轻与健康衰老的试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，采用粪便作为检测物，如果粪便中的gordonibacter或c.scindens或gordonibacter+c.scindens的绝对含量均大于100...
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