【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种抗cd40/pd1双特异性抗体以及该双特异性抗体的应用。
技术介绍
1、cd40是一种位于细胞膜表面、分子量为50kd的共刺激蛋白，属于肿瘤坏死因子受体(tnfr)家族，其在抗原呈递细胞(包括树突细胞、b细胞、单核细胞和巨噬细胞)中组成型地表达，也表达于其他多种细胞，例如内皮细胞、成纤维细胞、胸腺上皮细胞等。此外，还发现cd40在多种肿瘤细胞(例如慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、肾癌、肺癌等)中表达。cd40在细胞表面形成三聚体，相应配体cd40l(即cd154)主要表达于激活的t细胞表面。cd40和cd40l的相互作用是t细胞活化的共刺激信号。t细胞上cd40l与cd40的结合可以激活多种通路，包括nf-κb(核因子κb)信号通路。apexigen制药的cd40抗体apx005m，获fda孤儿药称号，且具有治疗转移性胰腺癌(导管癌)的前景，疾病控制率达九成，但副作用较大。
2、pd1是表达在t细胞表面的受体蛋白，当t细胞激活时，其表面的pd1表达上调。当pd1与其配体pd-l1结合时，pd1开始发挥抑制作用使t细胞处于耗竭状态，不再能发挥免疫杀伤作用，即pd1与pd-l1结合后可提供抑制性信号，诱导t细胞凋亡，抑制t细胞的活化和增殖。
3、双特异性抗体(bispecific monoclonal antibody,bsab)是一种人工制作出来的可以同时结合两种不同抗原或抗原表位的特殊抗体。双特异性抗体的主要作用机制包括：介导免疫细胞杀伤、双靶点信号阻断和促进蛋白形成功
4、目前，百奥赛图全资子公司祐和医药提交的yh008双特异性抗体的临床试验申请(ind)获得中国国家药品监督管理局(nmpa)批准。yh008由百奥赛图自主研发，为全球首创的pd1/cd40双抗。本专利技术致力于阐明一种序列与yh008双特异性抗体不同，未来成药性也不同的cd40/pd1双抗。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种抗cd40/pd1双特异性抗体，其具有全新序列，并验证了初步成药性，具有低毒副作用，且疗效得到验证。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术首先提供了一种抗cd40/pd1双特异性抗体，其包括免疫球蛋白抗体lgg和两个相同的单链可变片段scfv，每个scfv包含重链可变区vh和轻链可变区vl；
4、其中，所述重链可变区vh包含互补决定区cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其氨基酸序列分别如seq id no.1-3所示的；
5、所述轻链可变区vl包含互补决定区cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其氨基酸序列分别如seq id no.5-7所示的；
6、所述lgg的重链可变区包含互补决定区cdr-h4、cdr-h5和cdr-h6，其氨基酸序列分别如seq id no.10-12所示的；
7、所述lgg的轻链可变区包含互补决定区cdr-l4、cdr-l5和cdr-l6,其氨基酸序列分别如seq id no.14-16所示的。
8、进一步方案，所述重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no.8所示；
9、所述lgg的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.13所示；所述lgg的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.17所示。
10、进一步方案，所述lgg的恒定区来自人抗体；
11、优选的，所述lgg的重链恒定区序列为人lgg1的重链恒定区，其轻链恒定区序列为人lgg1的轻链恒定区。
12、进一步方案，所述单链可变片段scfv的重链可变区vh与轻链可变区vl通过肽接头l1连接，每个单链可变片段scfv的n端通过肽接头l2与lgg重链的c端连接；
13、优选的，所述肽接头l1、肽接头l2的氨基酸序列为(ggggs)n，其中n为正整数。
14、进一步方案，所述双特异性抗体的重链氨基酸序列如seq id no.21所示；所述双特异性抗体的轻链氨基酸序列如seq id no.23所示。
15、本专利技术进一步提供了一种核苷酸分子，其编码如前所述的双特异性抗体；
16、优选的，所述核苷酸分子编码所述双特异性抗体重链的核苷酸序列为seq idno.22，编码其轻链的核苷酸序列为seq id no.24。
17、本专利技术进一步提供了一种表达载体，其含有如前所述的核苷酸分子。
18、本专利技术进一步提供了一种宿主细胞，其含有如前所述的表达载体。
19、本专利技术进一步提供了一种药物组合物，其含有如前所述的双特异性抗体和任意一种以上药学上可接受的辅料。
20、本专利技术还提供了如前所述的药物组合物在制备药物中的应用，所述药物用于预防和/或治疗肿瘤。
21、本专利技术的有益效果：
22、该抗cd40/pd1双特异性抗体具有全新的双抗序列，该双特异性抗体可以特异性结合cd40和pd1抗原，阻断信号通路，活化t细胞和apc细胞，抑制杀伤肿瘤细胞。
23、此外，该双特异性抗体由抗cd40抗体的lgg分子和抗pd1抗体的scfv形式的结构域组成，2个单抗单体均具有超越市面产品的药效，其组合后的双抗结构可以在保留lgg分子自身的亲和力的同时有效提高整个融合蛋白质的稳定性。并且基于lgg分子的双抗制备，能够有效减少因为分子构造过度变更带来的稳定和免疫源性上的不确定性，具有显著的优势。并且组合后的双抗验证了初步成药性。
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1.一种抗CD40/PD1双特异性抗体，其特征在于，其包括免疫球蛋白抗体lgG和两个相同的单链可变片段scFv，每个scFv包含重链可变区VH和轻链可变区VL；
2.如权利要求1所述的抗CD40/PD1双特异性抗体，其特征在于，所述重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；
3.如权利要求1所述的抗CD40/PD1双特异性抗体，其特征在于，所述lgG的恒定区来自人抗体；
4.如权利要求1所述的抗CD40/PD1双特异性抗体，其特征在于，所述单链可变片段scFv的重链可变区VH与轻链可变区VL通过肽接头L1连接，每个单链可变片段scFv的N端通过肽接头L2与lgG重链的C端连接；
5.如权利要求1所述的抗CD40/PD1双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO.21所示；所述双特异性抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.23所示。
6.一种核苷酸分子，其特征在于，其编码如权利要求1-5任一项所述的双特异性抗体
7.一种表达载体，其特征在于，其含有如权利要求6所述的核苷酸分子。
8.一种宿主细胞，其特征在于，其含有如权利要求7所述的表达载体。
9.一种药物组合物，其特征在于，其含有如权利要求1-5任一项所述的双特异性抗体和任意一种以上药学上可接受的辅料。
10.如权利要求9所述的药物组合物在制备药物中的应用，其特征在于，所述药物用于预防和/或治疗肿瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种抗cd40/pd1双特异性抗体，其特征在于，其包括免疫球蛋白抗体lgg和两个相同的单链可变片段scfv，每个scfv包含重链可变区vh和轻链可变区vl；
2.如权利要求1所述的抗cd40/pd1双特异性抗体，其特征在于，所述重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no.8所示；
3.如权利要求1所述的抗cd40/pd1双特异性抗体，其特征在于，所述lgg的恒定区来自人抗体；
4.如权利要求1所述的抗cd40/pd1双特异性抗体，其特征在于，所述单链可变片段scfv的重链可变区vh与轻链可变区vl通过肽接头l1连接，每个单链可变片段scfv的n端通过肽接头l2与lgg重链的c端连接；<...
【专利技术属性】
技术研发人员：樊丽，汪国兴，刘培培，徐文亮，陈家俊，
申请(专利权)人：安徽瀚海博兴生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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