【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物培养领域，具体涉及一种肠道内容物的体外厌氧培养方法。
技术介绍
1、随着人类微生物组计划的启动，肠道菌群已成为微生物学研究领域的一个核心焦点。鉴于肠道菌群与人类健康状况及多种疾病之间存在着紧密而复杂的联系，深入探究其分布特征对于揭示人类健康奥秘至关重要。鉴于体内研究的种种局限性和高昂成本，探索肠道内容物的体外培养技术以及发酵方法显得尤为迫切。
2、有鉴于此，本专利技术创造性地提出一种新颖的肠道内容物体外厌氧培养方法，旨在提高肠道微生物的培养效率和/或简化操作流程，便于工业化。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种肠道内容物的体外厌氧培养方法及由该方法制备的培养物。该方法具有培养效率高、操作简单和/或便于工业化等特点。经由该方法制备的培养物，其代谢产物丰富、菌群多样性好和/或益生菌菌落总数高。
2、在第一方面，本专利技术提供一种肠道内容物的体外厌氧培养方法，所述方法包括将动物肠道内容物或含肠道内容物的肠道组织置于已加入dmem/f12液体培养基的容器(优选离心管)中，所述容器放入厌氧袋中进行厌氧培养。
3、在一些具体的实施方式中，所述含肠道内容物的肠道组织已去除肠道外部的膜、血管和脂肪，且所述肠道组织的两端打结，优选用无菌线打结。
4、在一些具体的实施方式中，所述肠道内容物或含肠道内容物的肠道组织来自人或者非人动物。在一些具体的实施方式中，所述非人动物选自大鼠、小鼠、猪、牛和羊。
5、在一些实施
6、在一些具体的实施方式中，所述厌氧培养的条件包括：30～45℃恒温培养24～36小时，优选为30℃，恒温培养24小时。
7、在一些具体的实施方式中，所述厌氧袋为圆底立式。
8、在一些具体的实施方式中，所述厌氧袋的体积为2.5～5l，优选为2.5l。
9、在一些具体的实施方式中，所述dmem/f12液体培养基中还包含青霉素和链霉素。
10、在一些具体的实施方式中，所述方法还包括制备所述dmfm/f12液体培养基：分别按10～15g/l(优选11g/l)和2～5g/l(优选2.4g/l)的比例称取dmem/f12培养基粉末和碳酸氢钠粉末，制备成dmem/f12液体培养基，调节培养基的ph至7～8(优选7.2)。在一些具体的实施方式中，所述方法还包括制备青霉素和链霉素的混合液，以及将所述混合液加入所述dmem/f12液体培养基中，优选地，所述混合液与所述dmem/f12液体培养基的体积比为1：
11、(50～100)，优选为1：50，或者1：100。在一些具体的实施方式中，，所述方法还包括在无菌操作条件下采用孔径0.2～0.4μm滤膜对所述dmem/f12液体培养基和/或所述青霉素和链霉素的混合液进行正压过滤除菌，过滤后分装，置于2～8℃条件下保存。
12、在一些具体的实施方式中，所述青霉素和链霉素的混合液的制备包括：将青霉素溶液和链霉素溶液按体积比1：(1～3)混合均匀，优选按1：1混合均匀，或按1：1.5混合均匀。
13、在一些具体的实施方式中，所述青霉素溶液的浓度为100～150u/ml，优选为100u/ml或者150u/ml。
14、在一些具体的实施方式中，所述链霉素溶液的浓度为0.1～0.5mg/ml，优选为0.1mg/ml或0.5mg/ml。
15、在第二方面，本专利技术还提供由前述肠道内容物的体外厌氧培养方法制备的培养物。
16、有益效果
17、1、本专利技术提出的厌氧培养方法，解决了当前肠道菌群培养技术面临的操作复杂性和培养状态难以实时观测等技术瓶颈，有效实现了肠道菌群的体外培养与发酵。
18、2、本专利技术所述方法以厌氧袋作为培养环境，厌氧袋能高效吸收袋内氧气，并同时生成约20％至21％的二氧化碳，精准模拟微生物所需的厌氧生态，为肠道微生物的体外生长提供了理想栖息环境。
19、3、本专利技术所述方法操作简便，显著降低实验操作的难度。该方法不仅能够高效地培养肠道内容物或其他有益菌株、发酵产物，而且提供了直观的实时观察培养状态的可能性，使得科研人员能够更准确地监控微生物的生长动态。
20、4、在培养基的选择上，本专利技术所述方法采用dmem/f12培养基，该培养基相较于其他类型具有更为广泛的应用范围和更高的可获得性。其营养成分均衡且丰富，包含葡萄糖、氨基酸、维生素及l-谷氨酰胺等关键营养物质，为菌株的生长繁殖提供了理想的营养支持。更重要的是，dmem/f12培养基的渗透压与动物体内环境高度接近，这有助于显著提升菌株的存活率和生长效率。
21、5、根据本专利技术所述方法制备得到的培养物表现除代谢产物丰富、菌群多样性好和/或益生菌菌落总数高等优点。
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1.一种肠道内容物的体外厌氧培养方法，其特征在于，所述方法包括将动物肠道内容物或含肠道内容物的肠道组织置于已加入DMEM/F12液体培养基的容器中，所述容器放入厌氧袋中进行厌氧培养。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肠道内容物或含肠道内容物的肠道组织来自人或者非人动物，优选地，所述非人动物选自大鼠、小鼠、猪、牛和羊。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肠道组织已去除肠道外部的膜、血管和脂肪，且所述肠道组织的两端打结，优选用无菌线打结。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述厌氧培养包括：在超净工作台打开厌氧袋包装，放入氧气指示剂，打开厌氧产气包，密封厌氧袋，将所述容器置于厌氧袋中进行恒温培养。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述厌氧培养的条件包括：30～45℃恒温培养24～36小时，优选为30℃，恒温培养24小时。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述厌氧袋为圆底立式，优选地，所述厌氧袋的体积为2.5～5L。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DMEM/
8.如权利要求1或7所述的方法，其特征在于，所述方法还包括制备所述DMFM/F12液体培养基：
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述青霉素和链霉素的混合液的制备包括：将青霉素溶液和链霉素溶液按体积比1：(1～3)混合均匀。
10.根据权利要求1-9任一项所述方法制备的培养物。
...【技术特征摘要】
1.一种肠道内容物的体外厌氧培养方法，其特征在于，所述方法包括将动物肠道内容物或含肠道内容物的肠道组织置于已加入dmem/f12液体培养基的容器中，所述容器放入厌氧袋中进行厌氧培养。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肠道内容物或含肠道内容物的肠道组织来自人或者非人动物，优选地，所述非人动物选自大鼠、小鼠、猪、牛和羊。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肠道组织已去除肠道外部的膜、血管和脂肪，且所述肠道组织的两端打结，优选用无菌线打结。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述厌氧培养包括：在超净工作台打开厌氧袋包装，放入氧气指示剂，打开厌氧产气包，密封厌氧袋，将所述容器置于厌氧袋中进行恒温培养。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：李茜，宋雨，杨淋，吴迪，张璐，王婷，张民，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：
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