【技术实现步骤摘要】
本申请属于基因检测，具体涉及一种检测hla等位基因的试剂及其应用。
技术介绍
1、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，hla)是由位于人类第6号染色体短臂的一群密切连锁的hla基因编码的产物，是构成移植排斥反应的重要抗原物质。hla基因系统是迄今为止发现的多态性最高的基因系统之一，主要包括hla-a、hla-b和hla-c等。hla基因系统是调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统，并与同种异体器官移植的排斥反应密切相关。hla基因的多态性导致个体间表达的hla蛋白分子存在差异，从而影响不同个体处理和呈递同一种抗原的能力。这是免疫应答诱导和调节的基本机制，使得不同个体对同一种抗原的免疫应答表现出个体差异，这种个体差异或产生保护性免疫、或形成免疫耐受，或出现自身免疫倾向、或表现为hla相关疾病，如：hla-b*58:01、hla-b*15:02等位基因均与药物的过敏反应相关。
2、药物不良反应(adrs)指的是在使用推荐剂量和给药途径的合格药物时发生的与预期治疗效果无关的有害反应。adrs的特点包括发作延迟、非剂量依赖性和不可预测性，其中约15％的adrs与遗传背景相关。随着药物基因组学的发展，研究发现hla基因与adrs密切相关。卡马西平(cbz)，奥卡西平(oxc)等一类治疗三叉神经痛和癫痫的芳香族药物，可能诱发致命性的皮肤不良反应，包括史蒂文斯-约翰逊综合症(sjs)和中毒性表皮坏死松解症(ten)。研究表明，hla-b*15:02等位基因在亚洲人群(中国、印度、马
3、目前，hla等位基因的鉴定方法主要分为测序和pcr两大类。测序法(例如pcr-sbt和ngs)涉及目标基因的扩增与产物纯化，随后进行目标片段的测序分析，被认为是hla分型的金标准，具有发现新等位基因的能力。然而，此法耗时较长，成本较高，且操作复杂，不易在临床推广。基于pcr的分型方法(例如qpcr和多色探针熔解曲线分析)则依赖于多个荧光通道，检测标记有不同荧光基团的靶标，实行“一色对应一靶标”的检测方案。然而，此方法的检测能力受限于pcr仪器的荧光通道数量，通常只能针对单个hla等位基因进行鉴定，且目前尚未有研究将hla-b*15:02，hla-b*57:01，hla-b*58:01，hla-a*31:01这四种等位基因整合于一管进行检测。在多民族国家中，这一局限性尤为明显，不同族群可能需针对不同的hla标记进行筛查。例如，为预防sjs/ten，必须根据患者的家庭背景选择合适的遗传标记进行鉴定(如hla-b*15:02或hla-a*31:01)，这大大增加了筛查的复杂性和成本。
4、在相关技术中，例如公开号为cn104293932a的中国专利技术专利，记载了一种基于实时荧光pcr检测hla-b*5801等位基因的方法。该专利具体公开了利用荧光pcr高特异性扩增hla-b*58:01等位基因的引物探针组合，包括：上游引物fp：5’-aggggccggagtattgggatg-3’，下游引物rp:5’-ttggcctcaactgaaaatgaaac-3’，mgb探针：5’-hex/vic-tcagggaggcggatctcggac-mgb-3’，其中，hex为6-carbo6y-he6achlorofluorescein。然而，该方法在鉴别时存在局限性，例如hla-b*58:26，hla-b*58:104，hla-b*58:121，hla-b*58:122，hla-b*58:132等等位基因无法有效区分。
技术实现思路
1、1.专利技术目的
2、本申请的目的是提供一种检测hla等位基因的试剂及其应用，包括单独检测hla-b*15:02、hla-a*31:01、hla-b*58:01和hla-b*57:01的试剂或者其组合，尤其是针对hla-b*58:01的检测试剂，利用两对引物对，以提高检测准确性。
3、2.技术方案
4、为了达到上述专利技术目的，本申请所采用的技术方案如下：
5、第一方面，本申请提供了一种检测hla-b*58:01等位基因的试剂，该试剂包括第一引物对、第二引物对、第一探针和第二探针，其中：
6、第一引物对包括：
7、上游引物58-1-f：cctaatcttgaaccacttaccatcactctcgacgtccatgaggggccggagtattgagacg(seq id no.3)，
8、下游引物58-r：gcaggttctctcggtaagtccgc(seq id no.4)；
9、第二引物对包括：
10、上游引物58-2-f：ccatctacactcccgcgtccggaagttcttccttatctcgacgccgcgagtccgaagac(seq id no.11)，
11、下游引物58-r：gcaggttctctcggtaagtccgc(seq id no.4)；
12、第一探针包括：
13、p-1：hex-cctaatcatcaaccacttaccatcacttcacctatccat-p(seq id no.12)；
14、第二探针包括：
15、p-2：fam-ccatctacactcccaaactaatcttttcttccttatctc-p(seq id no.13)。
16、第二方面，本申请还提供了一种检测hla-b*57:01等位基因的试剂，该试剂包括第三引物对和第一探针，其中：
17、第三引物对包括：
18、上游引物57-f：cctaatcatcaaccacgctgtgacacttcacctatccatgccagggtctcacatcatcaaggt(seq id n本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测HLA等位基因的试剂，其特征在于，所述试剂包括如下任意一种或多种试剂的组合：
2.根据权利要求1所述的检测HLA等位基因的试剂，其特征在于，所述试剂包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和第四试剂。
3.根据权利要求1或2所述的检测HLA等位基因的试剂，其特征在于，所述试剂还包括第五试剂，用于检测内参基因ACTB，包括第六引物对，第六引物对包括：
4.权利要求1-3任一所述的检测HLA等位基因的试剂在检测HLA等位基因，或制备检测HLA等位基因的产品中的应用。
5.一种检测HLA等位基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一所述的检测HLA等位基因的试剂。
6.权利要求5所述的一种检测HLA等位基因的试剂盒在检测HLA等位基因中的应用。
7.根据权利要求4或6所述的应用，其特征在于，所述检测HLA等位基因包括：以待测样本DNA为模板，使用所述检测HLA等位基因的试剂进行PCR扩增；PCR扩增结束后的PCR产物以0.1～5℃/秒的速率逐渐升高到70℃或以上，同时收集荧光信号，以获得熔解曲线
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述根据熔解温度判断是否存在目标HLA等位基因包括：
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增包括：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，
12.一种检测HLA等位基因的方法，其特征在于，
...【技术特征摘要】
1.一种检测hla等位基因的试剂，其特征在于，所述试剂包括如下任意一种或多种试剂的组合：
2.根据权利要求1所述的检测hla等位基因的试剂，其特征在于，所述试剂包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和第四试剂。
3.根据权利要求1或2所述的检测hla等位基因的试剂，其特征在于，所述试剂还包括第五试剂，用于检测内参基因actb，包括第六引物对，第六引物对包括：
4.权利要求1-3任一所述的检测hla等位基因的试剂在检测hla等位基因，或制备检测hla等位基因的产品中的应用。
5.一种检测hla等位基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一所述的检测hla等位基因的试剂。
6.权利要求5所述的一种检测hla等位基因的试剂盒在检测h...
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