【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物生物，具体涉及一种提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法。
技术介绍
1、蕙兰(cymbidiums faberi)是兰科名贵的盆栽观赏花卉，其植株飒爽挺秀、叶片刚柔兼备、花气幽香清远、花型优美独特，被誉为“花中君子”，是我国栽培历史最为悠久和普及的兰花之一。蕙兰传世名品众多，瓣型、奇花、色花和叶艺的品赏美学不断发展，成为我国文化中一个重要的精神符号。蕙兰目前主要的繁殖方式为分株繁殖，但是繁殖周期长，3-4年才能进行一次，繁殖效率低。蕙兰种子极小、无胚乳且种子后熟，自然适宜条件下与真菌共生才能萌发，萌发率极低。
2、至今为止，蕙兰应用无菌播种的组培技术已有成功的例子，如申请(专利)号为“200910101739.0”名称为“一种适宜蕙兰种子无菌萌发培养基组合物及其方法”，申请(专利)号为“201610648641.7”名为“一种蕙兰种子萌发快繁方法”，申请(专利)号为“201711051075.7”的专利名为“一种蕙兰种子无菌萌发方法”等，相比较下，本专利技术大大缩短了萌发时间，并显著提高了蕙兰种子的萌发率。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术提供一种提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法。
2、本专利技术通过杂交育种的方式，通过对蕙兰种子进行冷处理，次氯酸钠二次消毒和暗处理，提供一种蕙兰无菌播种高效繁殖的方法，能够有效缩短萌发周期的同时，提高蕙兰种子的萌发率，对后期蕙兰的新品种选育提供一定的理论基础。
3、首先，本专利技术提供一种提
4、其中，所述的蒴果为授粉后120-150d生长饱满的蒴果。
5、在本专利技术一个具体实施方案中，蒴果进行表面灭菌的具体步骤包括：用牙刷蘸取肥皂水刷去蒴果表面灰尘，在流水下冲洗1-3h；用70％-75％的酒精润洗3-5min，再用无菌水漂洗1-3次，转入0.1％升汞溶液中消毒10-15min，过程中不断摇晃，使消毒充分，最后用无菌水漂洗7-8次，放置在无菌滤纸上吸干表面多余的水分。
6、其中，次氯酸钠的工作浓度为1％，处理时间为30min。
7、其中，光培养条件为：培养温度25℃-28℃，光照度1200-1500lux，12-14h光照/8-12h暗。
8、其中，种子在4℃下冷藏处理30d。
9、本专利技术还提供一种蕙兰无菌播种高效繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：
10、1)无菌播种：依据所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法获得原球茎；
11、2)原球茎增殖培养：将步骤1)获得的原球茎接种到增殖培养基上进行增殖培养，所述增殖培养基为：以1/4ms为基本培养基，添加椰子水100-200ml/l，萘乙酸0.1-0.5mg/l，蛋白胨0.5-2.0g/l，活性炭0.5-1.0g/l；
12、3)原球茎分化培养：将步骤2)中的增殖的原球茎接种到分化培养基上进行分化培养获得幼苗，所述分化培养基为：以1/4ms为基本培养基，添加6-苄氨基嘌呤0.2-2mg/l，萘乙酸0.4-4mg/l，椰子水100-200mg/l，蛋白胨0.5-2.0g/l，肌醇50mg/l，甘氨酸2mg/l，烟酸2mg/l。
13、其中，所述的蕙兰无菌播种高效繁殖的方法任选还可包括：
14、4)壮苗培养：将步骤3)中得到的幼苗接种到壮苗培养基上进行壮苗培养得到完整植株；所述的壮苗培养基为：以1/4ms为基本培养基，添加6-苄氨基嘌呤0.2-2mg/l，萘乙酸0.2-4mg/l，吲哚丁酸0.6-1.0mg/l，椰子水100-200ml/l，蛋白胨0.5-2.0g/l，活性炭0.5-1.0g/l，肌醇50mg/l，甘氨酸2mg/l，烟酸2mg/l；
15、5)试管苗移栽：将步骤4)得到的瓶苗转移到自然光下进行炼苗7-14d，然后取出种苗，洗净表面的培养基，移栽到含有椰砖、火山石、泥炭土和松树皮的栽培基质中栽培。
16、其中，椰砖，火山石，泥炭土，松树皮的混合比例为体积比1:1:3:1。
17、本专利技术具有以下有益效果：
18、本专利技术通过蕙兰种间杂交获得高活力的种子，以合适成熟度的蕙兰种子作为外植体，对种子进行冷处理，暗处理，次氯酸钠二次消毒可以有效的提高蕙兰种子的萌发率，缩短萌发时间。蕙兰种子的种皮在一定程度上对蕙兰种子的萌发具有阻碍作用，通过使用次氯酸钠对其进行处理，能够有效的腐蚀蕙兰种子种皮，降低其抑制作用，从而提高萌发率，缩短蕙兰种子突破种皮萌发时间，降低种子萌发难度。对种子进行冷处理和暗培养是模拟自然条件下蕙兰蒴果秋季成熟后开裂后，种子洒落土壤并长期处于地下，且生长需要经历一定的春化作用，为蕙兰种子提供与自然环境相似的适生条件，能有效促进其萌发，无菌播种60d后种子萌发率高达85％。种子萌发后，经原球茎增殖、分化和壮苗培养得到完整植株，分化培养配方添加肌醇50.0mg/l、甘氨酸2.0mg/l、烟酸2.0mg/l能有效提高分化率，分化培养30d后原球茎叶芽分化率高达90％，在短时间内能够获得大量优质的蕙兰种苗。本专利技术具有种子萌发率高，播种后污染率低，萌发时间短、出苗快，种苗品质好的优点，蕙兰种苗可供应市场需要，并有利于蕙兰种质资源的保护、创新、新品种培育和可持续利用等。
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1.一种提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：将成熟未开裂的蕙兰蒴果表面灭菌后，无菌操作取出种子，将种子进行无菌冷藏10-30d，冷藏后使用次氯酸钠对种子进行二次消毒，消毒后的种子无菌播种到萌发培养基上，暗培养10-30d后转为光培养，萌发获得原球茎；所述的萌发培养基为：以1/4MS为基本培养基，添加椰子水100-200ml/L，6-苄氨基嘌呤0.5-1.0mg/L，萘乙酸0.1-0.5mg/L，蛋白胨0.5-2.0g/L，活性炭0.5-1.0g/L；次氯酸钠处理的具体步骤为：用70％-75％酒精消毒30-60s，无菌冲洗1-3次，用0.1％-1％次氯酸钠溶液漂洗10-30min，再用无菌水冲洗5-6次。
2.如权利要求1所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，所述的蒴果为授粉后120-150天生长饱满的蒴果。
3.如权利要求1所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，蒴果进行表面灭菌的具体步骤包括：用牙刷蘸取肥皂水刷去蒴果表面灰尘，在流水下冲洗1-3h；用70％-75％的酒精润洗3-5min，无菌水漂洗1-3次，转入
4.如权利要求1所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，次氯酸钠的工作浓度为1％，处理时间为30min。
5.如权利要求1所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，光培养条件为：培养温度25℃-28℃，光照度1200-1500Lux，12-14h光照/8-12h暗。
6.如权利要求1所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，种子在4℃下冷藏处理30d。
7.一种蕙兰无菌播种高效繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.如权利要求7所述的蕙兰无菌播种高效繁殖的方法，其特征在于，还包括：
9.如权利要求8所述的蕙兰无菌播种高效繁殖的方法，其特征在于，椰砖、火山石、泥炭土、松树皮的混合比例为体积比1:1:3:1。
...【技术特征摘要】
1.一种提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：将成熟未开裂的蕙兰蒴果表面灭菌后，无菌操作取出种子，将种子进行无菌冷藏10-30d，冷藏后使用次氯酸钠对种子进行二次消毒，消毒后的种子无菌播种到萌发培养基上，暗培养10-30d后转为光培养，萌发获得原球茎；所述的萌发培养基为：以1/4ms为基本培养基，添加椰子水100-200ml/l，6-苄氨基嘌呤0.5-1.0mg/l，萘乙酸0.1-0.5mg/l，蛋白胨0.5-2.0g/l，活性炭0.5-1.0g/l；次氯酸钠处理的具体步骤为：用70％-75％酒精消毒30-60s，无菌冲洗1-3次，用0.1％-1％次氯酸钠溶液漂洗10-30min，再用无菌水冲洗5-6次。
2.如权利要求1所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，所述的蒴果为授粉后120-150天生长饱满的蒴果。
3.如权利要求1所述的提高蕙兰无菌播种繁殖效率的方法，其特征在于，蒴果进行表面灭菌的具体步骤包括：用牙刷蘸取肥皂水刷去蒴果表面灰尘，在流水下冲洗1...
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