【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学及植物分子育种，特别涉及一种水稻耐热基因tt2的snp分子标记的检测引物组合、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、水稻作为全球最重要的粮食作物之一，其产量和品质对于保障世界粮食安全具有举足轻重的意义。然而，随着全球气候变暖，高温胁迫已成为影响水稻生长发育、产量形成和品质提升的关键因素。深入探究水稻耐热机制并寻求有效的应对策略，是当前农业科研领域的重要课题。在水稻耐热生理研究方面，科学家们发现高温会对水稻的多个生理过程产生显著影响。例如，高温会干扰水稻的光合作用，降低光合效率，减少光合产物的积累。同时，高温还会影响水稻的呼吸作用、水分代谢以及养分吸收与转运等生理过程，破坏细胞内的生理平衡，进而影响植株的生长和发育。研究表明，耐热性强的水稻品种在高温胁迫下能够维持相对稳定的细胞膜结构和功能，减少电解质外渗，保持细胞内环境的相对稳定；并且能够通过调节抗氧化酶系统，如超氧化物歧化酶(sod)、过氧化物酶(pod)和过氧化氢酶(cat)等的活性，及时清除体内过量积累的活性氧自由基，减轻氧化损伤。
2、水稻耐热基因tt2在水稻耐热机制中发挥关键作用，tt2基因位点编码一个gγ亚基，通过sct1依赖的蜡质生物合成改变来控制水稻的耐热性。在高温胁迫下，tt2功能缺失的自然等位基因与蜡质的更大保留量和耐热性增加有关。从机制上讲，转录因子sct1通过与钙调蛋白的钙增强相互作用来解码ca2+，并作为其靶基因(如蜡质合成调节因子2，oswr2)的负调控因子。tt2的破坏导致热触发的ca2+减少，从而减弱了钙调蛋白和sct
技术实现思路
1、为了解决上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术提供一种水稻耐热基因tt2的snp分子标记的检测引物组合、试剂盒及其应用。
2、一种水稻耐热基因tt2的snp分子标记的检测引物组合，所述引物组合包括引物p1、引物p2、引物p3和引物p4；
3、所述引物p1的核苷酸序列如seq id no:1所示；引物p2的核苷酸序列如seq idno:2所示；引物p3的核苷酸序列如seq id no:3所示；引物p4的核苷酸序列如seq id no:4所示。
4、进一步的，所述引物p1和引物p4分别位于snp上游和下游，引物p2的3’末端的最后一个碱基为tt2基因的1637位的c型的互补碱基g，引物p3的3’末端的最后一个碱基是tt2基因的1637位a型碱基。
5、进一步的，所述引物组合中引物p1：引物p2：引物p3：引物p4的添加比例为2：2：1：1。
6、一种检测水稻耐热基因tt2的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物组合。
7、一种检测水稻耐热基因tt2的方法，包括如下步骤：
8、s1、提取待测水稻的基因组dna；
9、s2、采用权利要求1-3任意一项所述的引物组合，以待测水稻的基因组dna为模板，对其进行arms-pcr扩增；
10、s3、在1％的琼脂糖凝胶中检测arms-pcr扩增产物，根据扩增产物的条带分型判断tt2基因的c/c型，a/a型和a/c型。
11、进一步的，所述arms-pcr的反应程序如下：
12、在94℃-98℃预变性2-10min；在94℃-98℃变性30-60s，在42-65℃退火30-60s，在72℃延伸45-60s，在28-35个循环；在72℃延伸3-10min；在4℃冷却5-20min。
13、进一步的，所述arms-pcr的反应体系总共为20μl，具体组份如下所示：
14、dna聚合酶buffer4-10μl，mgcl2溶液(25mm)0.8-3.2μl，dntp0.4-2.0μl，dna聚合酶0.1-1.0μl，p1引物0.1-0.5μl，p2引物0.1-0.5μl，p3引物0.1-0.5μl，p4引物0.1-0.5μl，基因组dna1.6-4.0μl，ddh2o将反应体系补齐到20μl。
15、上述引物组合或上述试剂盒在鉴定耐热型水稻中的应用。
16、本专利技术的优点和有益效果在于：本专利技术提供了一种用于快速鉴定tt2优异单倍型的检测引物和试剂盒，基于tt2基因1637位snp差异，设计了适用于arms-pcr扩增方法的四条特异性引物，可以高效准确的区分a/a耐热型、c/c不耐热型以及其a/c杂合型；对水稻中的28份材料进行tt2基因型鉴定，发现能够准确区分优异的耐热单倍型条带；本专利技术的检测方法成本低廉、操作简便、绿色环保，在琼脂糖胶中清晰分辨不同带型，且无杂带；本专利技术的检测方法在现阶段的水稻耐热育种过程中，起到分子辅助选择的作用，可以有效的缩短育种年限。
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1.一种水稻耐热基因TT2的SNP分子标记的检测引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物P1、引物P2、引物P3和引物P4；
2.根据权利要求1所述的水稻耐热基因TT2的SNP分子标记的检测引物组合，其特征在于，所述引物P1和引物P4分别位于SNP上游和下游，引物P2的3’末端的最后一个碱基为TT2基因的1637位的C型的互补碱基G，引物P3的3’末端的最后一个碱基是TT2基因的1637位A型碱基。
3.根据权利要求1所述的水稻耐热基因TT2的SNP分子标记的检测引物组合，其特征在于，所述引物组合中引物P1：引物P2：引物P3：引物P4的添加比例为2：2：1：1。
4.一种检测水稻耐热基因TT2的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任意一项所述的引物组合。
5.一种检测水稻耐热基因TT2的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的检测水稻耐热基因TT2的方法，其特征在于，所述ARMS-PCR的反应程序如下：
7.根据权利要求5所述的检测水稻耐热基因TT2的方法，其特征在于，所述A
8.如权利要求1-3任意一项所述的引物组合或权利要求4所述的试剂盒在鉴定耐热型水稻中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种水稻耐热基因tt2的snp分子标记的检测引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物p1、引物p2、引物p3和引物p4；
2.根据权利要求1所述的水稻耐热基因tt2的snp分子标记的检测引物组合，其特征在于，所述引物p1和引物p4分别位于snp上游和下游，引物p2的3’末端的最后一个碱基为tt2基因的1637位的c型的互补碱基g，引物p3的3’末端的最后一个碱基是tt2基因的1637位a型碱基。
3.根据权利要求1所述的水稻耐热基因tt2的snp分子标记的检测引物组合，其特征在于，所述引物组合中引物p1：引物p2：引物p3：引物p4的添加比例为...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆佳雨，汪秀峰，王沛然，许学，吴爽，江雅婷，张梦珂，陈若凡，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院水稻研究所，
类型：发明
国别省市：
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